摘要
目的 评估新型冠状病毒(2019-nCoV)样本混采对提取、扩增步骤的影响.方法 取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测.使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A～E 5种模板上样量和检测灵敏度不同的扩增试剂分别进行提取和扩增.结果 对于相同的模拟混采样本,a提取的模板比b、c提取的模板检测循环阈值(Ct)分别提前2.10±0.47和3.46±0.62;扩增相同的混采核酸模板,A试剂的N基因Ct值比B试剂提前1.16±0.48,ORF1ab基因Ct提前2.36±0.54.扩增体系中加入10拭子核酸使A试剂检测Ct值滞后1.36±0.32,对B试剂无影响.使用a试剂提取,10混1混采后,C、D、E试剂的扩增Ct值比检测单拭子样本高1.66±0.39.对于400拷贝/ml的10混 1样本,C、E试剂均可检出,D试剂的N基因漏检.结论 混采引入的大量人基因组DNA干扰提取和扩增效率.在加大样本提取体积、提高提取试剂性能的同时,应选择大模板量上样、检测灵敏度高的扩增试剂,方可提高系统灵敏度和结果稳定性,大大降低漏检风险.
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