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利用CRISPR/Cas9建立RBBP4低表达的HepG2,LO2稳定细胞系

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目的 利用CRISPR/Cas9在肝癌细胞HepG2及正常肝组织细胞(LO2)中敲低RBBP4 eGFP报告基因,构建RBBP4低表达的HepG2及LO2稳定细胞系.方法 基于CRISPR/Cas9系统原理,设计靶向细胞RBBP4基因第1个外显子的小向导RNA(sgRNA),构建具有左右同源臂和P2A-eGFP供体质粒的干扰质粒;将测序鉴定正确的重组质粒分别转染至HepG2及LO2细胞中,通过嘌呤霉素筛选细胞系,提取RNA和蛋白,分别通过QPCR和蛋白质印迹分析检测RBBP4敲低对细胞系的影响.结果 QPCR及和蛋白质印迹分析结果提示筛选的HepG2及LO2细胞系中RBBP4基因及蛋白表达减低(P<0.05).结论 通过CRISPR/Cas9系统成功构建了RBBP4稳定敲低的HepG2及LO2细胞系.

杨丽丽、黄常新、李永强、王聪洁、沈靖、陈艺丹、张嗣玉

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视网膜母细胞瘤结合蛋白4 CRISPR/Cas9 系统HepG2细胞 LO2细胞

浙江省重大科技项目杭州市科技发展计划

2017C03053202004A21

2022

浙江临床医学
浙江中医药大学 浙江省科普作家协会医学卫生委员会

浙江临床医学

影响因子：0.52
ISSN：1008-7664
年,卷(期)：2022.24(12)
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