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高粱GRF基因家族鉴定及SbGRF4原核表达分析

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为研究高粱生长调控因子(growth-regulating factor,GRF)在高粱生长过程中的功能,采用生物信息学分析方法对高粱GRF基因家族进行鉴定,并以高粱BTx623品种为材料,利用PCR技术扩增获得SbGRF4基因cDNA全长序列,构建pET-28a-SbGRF4重组质粒,采用原核表达技术分别对表达菌株、诱导温度以及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导浓度进行优化,最后用Western blot技术对原核表达的SbGRF4蛋白进行验证.结果 表明,在高粱中共鉴定到10个GRF基因SbGRF1～SbGRF10;亚细胞定位预测结果显示均定位于细胞核中;分布于高粱的6条染色体上,所有家族成员均含有QLQ和WRC保守结构域;系统进化结果显示,高粱GRF蛋白分为Class 2、Class 3、Class 4a、Class 4b四个亚家族;相同亚家族各个成员间外显子和内含子的数量差异较小;同一亚家族的高粱GRF蛋白保守基序具有相似性;克隆到的SbGRF4基因cD-NA序列全长为1 221 bp,并成功构建pET-28a-SbGRF4融合表达载体;SbGRF4蛋白的最佳表达菌株为大肠杆菌Escherichia coli JM109 (DE3)菌株,最佳诱导温度为25℃,最佳IPTG诱导浓度为0.6mmol/L;Western blot验证结果显示原核表达的蛋白为SbGRF4.表明SbGRF4蛋白可在大肠杆菌原核表达系统中表达.
Identification of GRF gene family and prokaryotic expression analysis of SbGRF4 in sorghum

陈俊、屈志广、方远鹏、蒋君梅、李向阳、谢鑫

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贵州大学农学院,贵阳550025

贵州大学,绿色农药与农业生物工程教育部重点实验室,贵阳550025

高粱 基因克隆 GRF基因家族 SbGRF4 原核表达

国家自然科学基金贵州省科技计划项目贵州省高层次留学人才创新创业择优

31960546黔科合支撑[2019]2408号02号

2020

10.13802/j.cnki.zwbhxb.2020.2019194

植物保护学报
中国植物保护学会 中国农业大学

植物保护学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.207
ISSN：0577-7518
年,卷(期)：2020.47(4)
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