摘要
本文旨在建立一种制备19-去甲睾酮完全抗原及单克隆抗体的方法。通过丁二酸酐将19-去甲睾酮(19β NT)半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到偶联物(19β NT-HAS-BSA),以此进行免疫、筛选,最终获得3株阳性杂交瘤细胞(4D5,6F2,7E7),并制得相应的单克隆抗体。用间接竞争酶联免疫法,对7E7株抗体进行鉴定,发现:抗体的亲和常数为3.35×108 L/mol,半抑制浓度为0.35 ng/mL,表明此抗体对19-去甲睾酮有很强的亲和力;以19-去甲睾酮为参照物,抗体对丙酸诺龙的交叉反应率为80.3%,对甲基睾酮、睾酮、群勃龙、己烯雌酚等的交叉反应率均小于0.2%,表明此抗体具有良好的特异性。由此可知,7E7株抗体可用于对19-去甲睾酮、丙酸诺龙的免疫分析。