摘要
目的:探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)HOX转录反义 RNA(HOTAIR)在脊髓损伤凋亡和自噬中的作用及相关机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(SCI组).构建缺氧缺糖诱导的SY-SH5Y细胞模型(OGD模型),将SY-SH5Y细胞分为 Control组、OGD 组、OGD+Vector 组、OGD+pcDNA-HOTAIR 组、OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic 组、OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组.通过脊髓损伤运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能的恢复能力;通过双荧光素酶报告基因实验分别检测 HOTAIR 和 miR-17、miR-17 和 Beclin-1 之间的靶向关系;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠脊髓组织和细胞中HOTAIR、miR-17、Beclin-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脊髓组织和细胞中Beclin-1、微管相关蛋白轻链 3Ⅱ(LC3Ⅱ)、P62蛋白的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果:与 Sham组比较,SCI 组大鼠 BBB评分下降,脊髓组织中HOTAIR水平降低,miR-17 水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与 Control 组比较,OGD 组处理的 SY-SH5Y 细胞中HOTAIR水平降低,miR-17水平升高,神经元凋亡率升高,LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD+Vector组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR组细胞中 HOTAIR水平升高(P<0.05),神经元凋亡率降低(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05),P62蛋白表达降低(P<0.05),而自噬抑制剂 3-甲基腺嘌呤(3-MA)逆转了这一结果(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示,Beclin-1是 miR-17的靶基因,miR-17 是 HOTAIR的靶基因.与 OGD+pcDNA-HOTAIR+NC mimic组比较,OGD+pcDNA-HOTAIR+miR-17 mimic组细胞中 miR-17表达明显升高,神经元凋亡率明显升高,Beclin-1 和 LC3Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:LncRNA HOTAIR通过靶向 miR-17/Beclin-1 通路增强自噬,从而减轻神经元凋亡和改善脊髓损伤.
基金项目
河南省医学科学研究重点课题计划基金项目(202102310398)
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