摘要
目的:建立一种准确、快速地检测地黄Rehmannia glutinosa Libosch.轮纹病病原真菌草茎点霉Phoma herbarum的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法.方法:基于GenBank数据库中草茎点霉的基因序列设计草茎点霉的特异性引物,并基于该引物制备重组质粒标准品,以标准品DNA优化qRT-PCR反应体系及构建qRT-PCR标准曲线.采用所设计的qRT-PCR体系及特异性引物,检测草茎点霉回接地黄叶盘后不同时间病原菌数量的动态变化.结果:设计得到的特异性引物PH.F10/PH.R10及所建立的qRT-PCR方法体系特异性强,敏感度高,检测地黄草茎点霉DNA的最低浓度为2.04×10-4ng/μL.接种后24～48 h(Ct值＜31.29)时草茎点霉开始侵染地黄,48 h后病情级别调查结果为1级,且随时间延续侵染量逐渐增加.结论:本研究所建立的qRT-PCR方法能对地黄病株中草茎点霉真菌数量进行快速、动态检测,可为地黄轮纹病的早期诊断和动态监测提供技术支持.
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