摘要
目的:观察四君子汤对大鼠小肠黏膜HuR、ATF-2、JunD、CDK4蛋白表达及HuR调控IEC-6细胞增殖相关指标的影响,探讨其促进肠黏膜损伤修复的作用机制.方法:SD大鼠灌胃四君子汤水提液,采血制备四君子汤含药血清,体外实验设空白对照组,腐胺组,四群子汤含药血清组,α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)负荷实验加设DFMO组,Western Blot检测细胞HuR蛋白表达,RT-PCR法检测细胞ATF-2、JunD mRNA稳定性,RNA免疫共沉淀(RIP)检测细胞HuR结合ATF-2、JunD mRNA水平,免疫共沉淀(Co-IP)分析细胞ATF-2与JunD蛋白间相互作用;皮下注射吲哚美辛制备大鼠小肠黏膜损伤模型,Western Blot检测大鼠小肠黏膜HuR、ATF-2、JunD、CDK4蛋白表达.结果:体外实验结果显示,与正常对照组比较,四君子汤含药血清组细胞核HuR蛋白表达显著升高,细胞质HuR蛋白表达显著降低;模型组HuR蛋白在细胞质内表达升高,在细胞核中表达降低,HuR结合ATF-2、JunD mRNA水平升高,ATF-2及JunD mRNA稳定性升高,ATF-2/JunD蛋白复合物含量升高,四君子汤含药血清可逆转DFMO的上述作用(P<0.05).动物实验结果表明,与模型组比较,四君子汤水提液(5、15 g/kg)组小肠黏膜HuR蛋白在细胞质中表达显著降低,在细胞核中表达显著升高,CDK4蛋白表达显著升高,ATF-2、JunD蛋白表达显著降低.结论:四君子汤可作用于多胺/HuR信号通路降低IEC-6细胞ATF-2及JunD mRNA稳定性及蛋白相互作用,同时可影响HuR调控大鼠小肠黏膜ATF-2、JunD及CDK4蛋白表达而促进肠黏膜损伤修复.
基金项目
国家自然科学基金(81760864)
贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合KY字[2017]173)
贵州省普通高等学校特色重点实验室项目(黔教合KY字[2017]006)
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