摘要
目的:研究二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤的影响并探讨其机制.方法:建立棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤细胞模型,采用CCK-8法筛选二氢石蒜碱的最佳给药浓度.将培养的H9c2细胞随机分为正常对照组、模型组、LY294002组、雷帕霉素组及二氢石蒜碱低、中、高浓度组.蛋白免疫印迹法检测H9c2细胞中TLR4、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达;免疫荧光染色及流式细胞术检测二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平的影响.结果:采用棕榈酸100μmol/L建立H9c2细胞炎性损伤模型,CCK-8实验筛选出二氢石蒜碱组在1、10、50μmol/L下细胞存活率都在80％以上,分别确定为低、中、高给药浓度.蛋白免疫印迹实验表明,二氢石蒜碱预处理能显著下调棕榈酸诱导下H9c2细胞的TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达(P<0.05或P<0.01),其作用呈浓度依赖性;PI3K/AKT抑制剂LY294002可抑制p-AKT蛋白表达,mTOR抑制剂雷帕霉素可抑制p-mTOR蛋白表达(P<0.01).免疫荧光染色及流式细胞术结果表明二氢石蒜碱对炎性损伤H9c2细胞内ROS产生有显著的抑制作用(P<0.01).结论:二氢石蒜碱对棕榈酸诱导的H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进AKT蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生相关.
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