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六味地黄汤干预肾纤维化作用机制的网络药理学分析

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目的 基于网络药理学方法及体内外实验探讨六味地黄汤(LWDHD)干预肾纤维化的潜在作用机制。方法 (1)通过TCMSP平台检索筛选LWDHD的活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD数据库检索肾纤维化疾病相关靶点;利用R语言VennDiagram包对LWDHD活性成分靶点和肾纤维化疾病相关靶点取交集，得到共同(交集)靶点，即为LWDHD治疗肾纤维化的关键靶点;运用Cytoscape3。9。1软件构建LWDHD治疗肾纤维化的"活性成分-关键靶点"网络，分析核心活性成分;通过STRING平台构建共同靶点蛋白互作(PPI)网络;分别通过DAVID数据库、R语言软件的Pathview包对共同靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析;采用AutoDock Vina软件对核心活性成分与核心靶点进行分子对接。(2)体内实验:将24只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、LWDHD组(6。75g·kg-1)及依那普利组(10mg·kg-1)，每组6只。采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾纤维化大鼠模型。各组以相应药物灌胃给药(10mL·kg-1)，每日1次，连续7 d。采用HE、MASSON染色法观察大鼠肾脏组织病理变化和胶原沉积情况。(3)体外实验:将体外培养的HK-2细胞分为正常对照组(10％空白血清)、模型组(10％空白血清+200 μmol·L-1 CoCl2)、LWDHD组(10％含药血清+200 μmol·L-1 CoCl2);采用200 μmol·L-1 CoCl2模拟肾内缺氧环境，同时加入空白或含药血清，培养24h后收集细胞;采用Western Blot法检测HK-2细胞HIF-1α蛋白表达水平。结果 (1)共得到LWDHD活性成分40个，活性成分作用靶点194个，肾纤维化疾病相关靶点5 135个、，共同(交集)靶点即LWDHD治疗肾纤维化的关键靶点159个。筛选核心活性成分主要有槲皮素、豆甾醇、山柰酚、β-谷甾醇、薯蓣皂苷元等，核心靶点有热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、c-Jun氨基末端激酶(JUN)、蛋白激酶B(AKT1)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)等。GO功能主要与细胞因子介导信号通路、基因表达正向调控、凋亡过程负调控、缺氧反应等生物过程相关;KEGG关键通路有动脉粥样硬化、癌症途径、病毒感染、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、HIF-1信号通路等。槲皮素与HSP90AA1、HIF-1α结合力中等，豆甾醇与HSP90AA1、JUNE、AKT1、HIF-1α结合力中等，薯蓣皂苷元与HIF-1α有较强的结合力。(2)体内实验显示，与假手术组比较，模型组大鼠出现肾间质炎性细胞浸润、空泡化、肾小管萎缩，部分肾小管代偿性扩张;肾组织纤维化明显，可见大量染成蓝色的胶原纤维，胶原容积分数显著升高(P＜0。01)。与模型组相比，LWDHD组及依那普利组大鼠肾组织病变程度减轻，炎性细胞减少，肾小管结构损伤明显减轻;肾组织蓝色胶原纤维明显减少，纤维化程度明显减轻，胶原容积分数显著降低(P＜0。01)。(3)体外实验显示，与正常对照组比较，模型组细胞HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P＜0。01);与模型组比较，LWDHD组细胞HIF-1α蛋白表达水平明显降低(P＜0。05)。结论 LWDHD治疗肾纤维化作用可能是通过槲皮素、豆甾醇、薯蓣皂苷元等多种活性成分，作用于HSP90AA1、JUNE、AKT1、HIF-1α等多靶点，通过AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路等多条信号通路来实现的。
Network Pharmacological Analysis of the Mechanism of Liuwei Dihuang.Decoction in Intervening Renal Fibrosis

张海英、王晖、高海波、郭金晶、蒋志兵、潘佳俊、孟斌、张熙、唐群

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湖南中医药大学,湖南长沙410208

六味地黄汤 肾纤维化 网络药理学 体内外实验 槲皮素 豆甾醇 薯蓣皂苷元 HIF-1信号通路 大鼠 HK-2细胞

湖南省自然科学基金长沙市自然科学基金湖南省教育厅重点项目湖南中医药大学研究生科研创新项目

2021JJ30506kq201408921A02422021CX32

2023

10.19378/j.issn.1003-9783.2023.03.011

中药新药与临床药理
广州中医药大学

中药新药与临床药理

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.908
ISSN：1003-9783
年,卷(期)：2023.34(3)
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