黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达及其高效发酵研究

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中文摘要：葡萄糖氧化酶是一类能催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸-8-内酯的酶类,在食品、药品以及生物传感器等领域具有广泛的应用前景.从黑曲霉中克隆出葡萄糖氧化酶编码序列,在毕赤酵母中实现了组成型和诱导型表达并分析了其酶学性质和发酵条件.结果表明:黑曲霉葡萄糖氧化酶的编码基因长度为1 818 bp,编码605个氨基酸,具有21个氨基酸组成的信号肽.毕赤酵母组成型表达葡萄糖氧化酶的发酵上清液中葡萄糖氧化酶的酶活可达1.2 U/mL,利用镍离子亲和层析纯化后得到了分子质量约为100 kDa的葡萄糖氧化酶.利用糖苷内切酶H(Endo H)对葡萄糖氧化酶去糖基化后,其分子质量约为70 kDa,与推测的分子质量相近.对黑曲霉葡萄糖氧化酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH 6.0,最适反应温度35℃,比活力60.9 U/mg.为了进一步提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量,构建了诱导型表达的毕赤酵母菌株并通过G418抗生素筛选获得了高效表达菌株.对该菌株进行高密度发酵(湿菌体200 g/L),甲醇添加量为2.5％,发酵至第7天时葡萄糖氧化酶发酵量可达133 U/mL,蛋白表达量约1.9 g/L.

外文标题：Study on the expression of Aspergillus niger glucose oxidase in pichia pastoris and its high-efficiency fermentation

作者：

卢洋、张帅兵、翟焕趁、李娜、吕扬勇、胡元森、蔡静平

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作者单位：

河南工业大学生物工程学院,河南郑州450001

关键词：

葡萄糖氧化酶黑曲霉毕赤酵母高效发酵

基金：

河南省产学研合作项目

项目编号：

142107000024

出版年：

2021

DOI：

10.16433/j.1673-2383.2021.01.010

河南工业大学学报(自然科学版)

河南工业大学

河南工业大学学报(自然科学版)

CSTPCD北大核心

影响因子：0.547

ISSN：1673-2383

年,卷(期)：2021.42(1)

参考文献量9