查看更多>>摘要:目的 探讨海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及分子机制.方法 采用简单随机抽样法将8周龄的雄性C57 BL/6J小鼠分为4组:对照组(不给予任何处理)、海藻糖组(饮用2 g/100 ml海藻糖水)、照射组(以13 Gy剂量对小鼠腹部照射)、海藻糖+照射组(饮用2 g/100 ml海藻糖水+以13 Gy剂量对小鼠腹部照射),每组6只.经13 Gy照射和2 g/100 ml海藻糖饮水处理后,每天记录小鼠体重,14 d后处死小鼠并采集小鼠的血液、小肠和结肠,测量结肠长度.采用苏木精-伊红(HE)染色法和过碘酸-雪夫(PAS)染色法评估小鼠肠道损伤程度;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和小肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平;小鼠小肠上皮MODE-K细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、细胞凋亡检测实验、活性氧测定实验和DNA损伤检测实验分别检测细胞活力、细胞克隆形成能力、细胞凋亡率、活性氧水平和DNA双链断裂数量;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法和Western blot法分别检测自噬相关基因mRNA和蛋白水平的表达情况.组间比较采用两独立样本t检验.结果 动物实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著缓解电离辐射(IR)后小鼠体重的下降,并可促进其恢复(t=-4.064,P<0.05),且小鼠结肠缩短程度较轻,2组间的差异有统计学意义(t--4.044,P<0.05).HE和PAS染色法评估结果显示,海藻糖可缓解IR后小鼠小肠黏膜损伤,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠绒毛较长、隐窝较深、杯状细胞数量较多,2组间的差异有统计学意义(t=4.373、8.414、6.515,均P<0.05).ELISA检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著降低IR后小鼠血清及小肠组织中TNF-α和IL-6的水平,且差异均有统计学意义(t=4.475、8.686、3.993、6.007,均P<0.05).细胞增殖和克隆实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可促进IR后小鼠小肠上皮MODE-K细胞活性和克隆形成能力[(0.885±0.127)对(0.644±0.151)、(97.330±5.937)对(64.000±7.324)],且差异均有统计学意义(t=2.566、4.411,均P<0.05);细胞凋亡检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可抑制IR后小鼠小肠MODE-K细胞凋亡率[(15.270±0.647)%对(9.334±0.854)%],且差异有统计学意义(t--8.315,P<0.05);活性氧测定实验和DNA损伤检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可降低IR后小鼠细胞内ROS水平和DNA双链断裂数量(t=-8.884、4.802,均P<0.05).qRT-PCR法和Western blot法检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠小肠组织和MODE-K细胞中自噬相关基因TFEB、MAP1LC3B的表达水平显著增加[(208.210±26.143)对(8.986±5.362)、(13.970±4.587)对(5.815±1.873)],且差异均有统计学意义(t=8.875,8.461,均 P<0.05).结论 海藻糖通过调控转录因子EB介导的自噬反应激活缓解小鼠放射性肠损伤.