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期刊信息/Journal information
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院
南方农业学报

广西壮族自治区农业科学院

李杨瑞

月刊

2095-1191

nfnyxb@163.com

0771-3243905、3244920

530007

广西南宁市大学东路174号

南方农业学报/Journal Journal of Southern AgricultureCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊是由广西农业科学院主办的综合性农业科技期刊，主要报道农业科研新成果、新技术、新方法，农业生产新经验、新产业等。
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    黔北麻羊SIRT1基因睾丸组织表达及其过表达对间质细胞发育和抗氧化能力的影响

    陈家靖陈祥张远骆金红...
    3665-3673页
    查看更多>>摘要：[目的]分析沉默调节因子1(SIRT1)在黔北麻羊不同月龄睾丸组织与12月龄性腺轴组织中的表达水平,以及对睾丸间质细胞发育及抗氧化能力的影响,为探明SIRT1基因调控睾丸间质细胞生长发育机制提供理论基础.[方法]以1、3、6、9和12月龄健康的黔北麻羊公羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测不同月龄睾丸组织及12月龄性腺轴组织(下丘脑、垂体、睾丸和附睾)中SIRT1的表达量;将过表达载体pEGFP-N3-SIRT1和空载体pEGFP-N3转染至山羊睾丸间质细胞,运用CCK-8法检测细胞的增殖情况,划痕试验检测细胞迁移效率,利用实时荧光定量PCR检测细胞增殖、发育及抗氧化相关基因的表达量.[结果]SIRT1基因在3、6、9和12月龄睾丸组织中的表达水平均显著高于1月龄(P<0.05,下同),以12月龄的相对表达量最高;在性腺轴上,睾丸组织中SIRT1基因相对表达量显著高于下丘脑、垂体和附睾.CCK-8法结果显示,过表达SIRT1基因在12 h后极显著促进睾丸间质细胞的增殖(P<0.01,下同);划痕试验发现,过表达组在9和18 h的细胞迁移率均显著高于空载组;实时荧光定量PCR结果显示,过表达SIRT1基因可显著促进睾丸发育相关基因[胰岛素样生长因子2(IGF2)],细胞增殖相关基因[增殖细胞核抗原(PCNA)]和抗氧化相关基因[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)和血红素加氧酶1(HO-1)]的表达,对抗氧化相关基因[核因子E2相关因子2(Nrf2)]的表达无显著影响(P>0.05).[结论]SIRT1基因在黔北麻羊不同月龄均有表达,且主要表达在睾丸组织中.成功将超表达SIRT1基因表达在睾丸间质细胞,且可能通过提高山羊睾丸间质细胞中相关基因的表达,促进细胞增殖和发育,并提高其抗氧化能力,进而直接或间接影响睾丸间质细胞的生理功能.

    黔北麻羊SIRT1基因睾丸间质细胞发育抗氧化

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    miR-2366靶向DCT基因调控香猪黑色素细胞黑色素生成的分子机制研究

    毕欢袁巍张雨丹陈伟...
    3674-3682页
    查看更多>>摘要：[目的]明确miR-2366通过靶向作用多巴色素异构酶基因(DCT)对黑色素细胞中黑色素生成的影响,为解析剑白香猪"两头乌"毛色的形成机制打下理论基础.[方法]以剑白香猪为研究对象,通过酶解法测定不同毛色皮肤组织中总黑色素含量,利用碱溶法测定不同颜色毛发中不同种类黑色素含量,以实时荧光定量PCR检测miR-2366和DCT、TYR和TYRP1基因在不同毛色皮肤组织中的表达情况;根据miR-2366与DCT基因的靶向关系,人工合成双荧光素酶报告载体(pmirGL0-DCT-3'-UTR-wt和pmirGL0-DCT-3'-UTR-mut)及miRNA-2366过表达载体mimic、抑制载体inhibitor和阴性对照NC,分别转染剑白香猪黑素细胞后,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测DCT、TYR和TYRP1基因的相对表达量及其蛋白表达水平,并以碱溶法检测转染黑色素细胞中的总黑色素含量.[结果]在剑白香猪黑色皮肤组织中,总黑色素含量极显著高于白色皮肤组织(P＜0.01,下同);在黑色毛发中,总黑色素、棕黑色素和真黑色素含量也极显著高于白色毛发;在黑色皮肤组织中,miR-2366的相对表达量极显著低于白色皮肤组织,而DCT、TYR和TYRP1基因的相对表达量极显著高于白色皮肤组织.在转染试验中,miR-2366 mimic能极显著下调DCT、TYR和TYRP1基因表达,显著降低DCT、TYR和TYRP1蛋白表达;导致黑色素细胞中黑色素含量极显著降低36.0%;而miR-2366 inhibitor极显著显著上调DCT、TYR和TYRP1基因及其蛋白的表达,促使黑色素细胞中黑色素含量极显著上升高20.0%.[结论]miR-2366通过靶向负调控DCT基因表达而调节黑色素细胞中的黑色素含量,进而调控剑白香猪毛色的形成,提示miR-2366对黑色素的生成具有调控作用.

    剑白香猪miR-2366多巴色素异构酶基因(DCT)黑色素

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    鸡OATP1B3互作蛋白筛选及其相关基因的转录表达分析

    陈友波叶涛余欢石钰仕...
    3683-3696页
    查看更多>>摘要：[目的]筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据.[方法]以真核表达载体pEGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳腺上皮细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)结合液相色谱与串联质谱联用技术(LC-MS/MS)筛选鸡OATP1B3互作蛋白,经GO功能注释分析、KEGG信号通路富集分析和蛋白相互作用网络分析鉴定出与鸡蛋绿壳性状形成相关的OATP1B3互作蛋白.同时,通过构建SLCO1B3基因沉默及过表达载体分别转染蛋壳腺上皮细胞,检测SLCO1B3基因过表达或沉默时部分OATP1B3互作蛋白基因(FXR1、CTTN、RPL12和RPS17)在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况,并根据鸡蛋壳颜色分为白壳、浅绿和深绿3种类型,分析蛋壳颜色△a*值与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因表达的相关性.[结果]共筛选鉴定出37个与鸡OATP1B3相互作用的蛋白,其中FXR1、CTTN、RPL12和RPS17与鸡蛋的绿壳性状有密切关系.SLCO1B3基因过表达能极显著降低蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达(P<0.01,下同),显著上调RPL12基因表达(P<0.05,下同),极显著上调RPS17基因表达;当SLCO1B3基因被沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1和CTTN基因的表达极显著上调,RPL12基因的表达显著下降.白壳类型赤水乌骨母鸡下丘脑中的FXR1基因相对表达量极显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡,蛋壳腺和肝脏中的RPL12基因及肝脏中的RPS17基因相对表达量则显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡;此外,FXR1基因在下丘脑中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关,RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关.[结论]筛选鉴定出的37个鸡OATP1B3互作蛋白主要定位于细胞质或细胞核,具有蛋白结合能力及结构分子活性,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢.在鸡壳腺上皮细胞内SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因间存在调控关系,其中,FXR1和RPL12基因在鸡蛋绿壳性状的形成过程中发挥着重要作用.

    赤水乌骨鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)SLCO1B3基因互作蛋白表达调控

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    归芪益母复方制剂对产后奶牛血液氧化脂质的调节作用

    毛永霞王菲菲孔维怡岳康...
    3697-3707页
    查看更多>>摘要：[目的]探究归芪益母复方制剂对产后奶牛血液氧化脂质的调节作用,以期进一步明确归芪益母复方制剂抗炎和抗氧化的作用机制,为归芪益母复方制剂在产后奶牛保健与疾病防治中的应用提供参考依据.[方法]选取体况相近、2～3胎次的健康待产荷斯坦奶牛15头,将其随机分成对照组(C组,n=7)和试验组(G组,n=8),试验组奶牛产后灌服归芪益母复方制剂500 mL/头,连续灌服6 d,对照组奶牛每日灌服等体积饮用水.产后7 d晨饲前于尾静脉采集血液,制备血浆样本,采用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)联用技术定性定量检测2组奶牛血浆中氧化脂质含量,分析2组奶牛血浆氧化脂质代谢轮廓的变化规律,筛选产后奶牛血液中的差异氧化脂质并进行代谢通路富集分析.[结果]2组奶牛血浆中共鉴定出44种氧化脂质,其中花生四烯酸及其代谢物18个、亚麻酸及其衍生物12个、二十碳五烯酸及其衍生物9个、二十二碳六烯酸及其衍生物4个和二十二碳五烯酸及其衍生物1个.产后7 d,试验组奶牛血浆氧化脂质代谢轮廓较对照组发生显著变化,8种氧化脂质发生显著变化(P<0.05,VIP≥1,FC≥2或FC≤0.5),其中5种脂质分子显著上调,包括12-HETE、11-HETE、15-HETE、5-HETE和15-oxoETE;3种脂质分子显著下调,包括20-HETE、8,9-EET和TXB2.通路富集分析结果表明,差异脂质分子主要富集在花生四烯酸代谢通路、TRP通道的炎症介质调节通路和PPAR信号通路.[结论]归芪益母复方制剂主要通过花生四烯酸代谢通路、TRP通道的炎症介质调节和PPAR信号通路来调节产后奶牛脂质代谢,从而发挥抗炎和抗氧化作用.

    产后奶牛归芪益母复方制剂脂质组学氧化脂质通路富集

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    牦牛MPC1和MPC2基因克隆及其组织表达特征分析

    姜辉黄慈钟金城鲜莉莉...
    3708-3718页
    查看更多>>摘要：[目的]明确牦牛线粒体丙酮酸载体编码基因(MPC1和MPC2)的分子生物学特性及其组织表达特征,为揭示MPC基因在牦牛适应高原环境和能量代谢中的作用机制提供理论依据.[方法]选取麦洼牦牛为研究对象,PCR扩增牦牛MPC1和MPC2基因编码区(CDS)序列,利用在线生物信息学分析软件预测其蛋白结构及理化性质,并以实时荧光定量PCR检测MPC1和MPC2基因在不同年龄(0.5、1.5和2.5岁)牦牛各组织中的表达情况.[结果]牦牛MPC1基因CDS序列长330 bp,共编码109个氨基酸残基;MPC2基因CDS序列长384 bp,共编码127个氨基酸残基.基于MPC1和MPC2基因CDS序列相似性构建的系统发育进化树显示,牦牛分别与黄牛和水牛的亲缘关系最近,与绵羊的亲缘关系最远.牦牛MPC1和MPC2蛋白均为稳定的亲水性蛋白,主要由丙氨酸和亮氨酸组成,有跨膜结构但无信号肽,均存在1个MPC结构域;其二级结构以α-螺旋为主(分别占57.80%和55.12%),三级结构模型为5xpd.1.A.MPC1和MPC2基因在2.5、1.5和0.5岁牦牛脾脏中的相对表达量均最低,其次是肾脏和肝脏,而在心脏中的相对表达量最高;MPC1和MPC2基因在不同年龄段牦牛各组织中的表达趋势不一致,可能与基因表达的组织特异性及二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用不同有关.[结论]MPC1和MPC2基因在反刍动物间具有高度的保守性,其表达存在组织特异性和时序性,尤其在心脏中高表达,且编码蛋白中富含丙氨酸和亮氨酸,说明MPC1和MPC2基因在牦牛改善肉品质及适应高原环境的过程中扮演着重要角色,但二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用有所差异.

    牦牛线粒体丙酮酸载体(MPC)MPC1基因MPC2基因组织表达特征高原环境

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    转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析

    左梦娜何佳宁尹千禧王凤梅...
    3719-3726页
    查看更多>>摘要：[目的]探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑.[方法]从NCBI网站下载牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123,再将重组表达载体pAUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株,采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母.将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d,期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力,以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性.[结果]牛LDHA基因编码序列长1170 bp,共编码389个氨基酸残基;以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子,其替换率高达58.35%.牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h,其二级结构富含α-螺旋及无规则卷曲.替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中,经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒酵母菌株,命名为EC1118-LDHA.转基因酿酒酵母EC1118-LDHA株以200 g/L葡萄糖为碳源,发酵24 h后的LDHA活性达4.7±1.2 mU/mg,发酵2～3 d后约制备出30 g/L乳酸,同时约产生70 g/L乙醇,乳酸产出率约为0.15 g/g葡糖糖.[结论]将替换酿酒酵母偏好密码子后的牛LDHA基因编码序列导入酿酒酵母中能成功构建转牛LDHA基因酿酒酵母,牛LDHA基因的导入不会影响商业化酿酒酵母发酵能力,且赋予了酿酒酵母以200 g/L葡萄糖为碳源制备约30 g/L乳酸的能力.因此,采用转牛LDHA基因酿酒酵母制备食品级乳酸完全可行.

    酿酒酵母牛乳糖脱氢酶A基因(LDHA)乳酸发酵

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    家蚕热激蛋白Hsp 25.4对BmNPV增殖的影响

    唐芬芬杨伟克张祖芸何超...
    3727-3732页
    查看更多>>摘要：[目的]探究家蚕热激蛋白(Hsp25.4)基因在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrovirus,BmNPV)侵染家蚕后的表达变化规律,明确敲低该基因的表达后对BmNPV增殖复制的影响,为深入解析BmHsp25.4蛋白在BmNPV侵染家蚕过程中发挥的作用提供参考依据.[方法]以5龄家蚕幼虫为研究对象,经口添食10 µL预先制备好的BmNPV-T3株病毒悬液(5×108 个/mL),采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4基因在BmNPV侵染6 h各组织的表达情况,并选择相对表达量较高的3个组织,分析BmHsp25.4基因时空表达图谱;注射双链RNA(dsRNA)检测BmHsp25.4基因在体内的干涉效果,采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4基因干涉后对BmNPV增殖复制的影响.[结果]BmNPV侵染家蚕6 h,BmHsp25.4基因在家蚕血液、中肠和脂肪体组织中的相对表达量升高;时空表达谱结果显示,BmHsp25.4基因在3个组织中的表达谱均呈先升高后降低的变化趋势,其中血液和中肠组织的相对表达量均在6 h达到峰值,而脂肪体则在BmNPV侵染12 h时相对表达量达到最高;注射dsRNA干涉后,试验组BmHsp25.4基因的相对表达量与对照组相比极显著(P<0.01,下同)降低61.81%,说明BmHsp25.4基因的相对表达量被成功干涉;BmHsp25.4基因干涉后,感染24 h试验组BmNPV在各时期增殖速度极显著高于对照组,感染48 h二者差异为显著水平(P<0.05).[结论]BmNPV侵染能够引起BmHsp25.4基因的表达,并且敲低BmHsp25.4基因的表达能影响BmNPV早期在虫体内的增殖,推测Hsp25.4蛋白在家蚕的抗病毒免疫中发挥关联功能.

    家蚕家蚕核型多角体病毒(BmNPV)热激蛋白RNA干扰

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    珠江口海域游泳动物群落结构及多样性特征

    裴精花陈清华范金金刘伟杰...
    3733-3744页
    查看更多>>摘要：[目的]分析珠江口海域游泳动物群落结构及多样性特征,掌握物种组成、优势种、资源量及时空分布等生态现状,为珠江口海域游泳动物资源保护及合理开发提供理论依据.[方法]于2021年9月和2022年4月对珠江口海域16个站位进行底拖网调查,计算其相对重要性指数(IRI)、Margalef丰富度指数(D)、Shannon-Wiener多样性指数(H′)和Pielou均匀度指数(J′)等生物多样性指标,并结合尾数生物量比较(ABC)曲线、聚类分析和非度量多维尺度(NMDS)等方法分析游泳动物群落结构的时空差异性.[结果]共调查捕获游泳动物215种,其中鱼类120种、甲壳类91种、头足类4种;其中秋季优势种为近亲蟳(Charybdis affinis)、近缘新对虾(Metapenaeus affinis)、亨氏仿对虾(Parapenaeopsis hungerfordi)、长叉三宅虾蛄(Miyakea nepa)、皮氏叫姑鱼(Johnius belangerii)、短吻鲾(Leiognathus brevirostris)、凤鲚(Coilia mystus)、颈斑鲾(Nuchequula nuchalis)、线纹鳗鲶(Plotosus lineatus);春季优势种为近亲蟳、近缘新对虾、变态蟳(C.variegata)、亨氏仿对虾、长叉三宅虾蛄、皮氏叫姑鱼、须赤虾(Metapenaeopsis barbata)、周氏新对虾(M.joyneri)、脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda);全年优势种7种,优势种生物量占总生物量的51.81%,秋季、春季各9种,分别占总生物量的70.63%和63.26%;全年丰富度指数D均值为7.65,多样性指数H′均值为2.56,均匀度指数J′均值为0.66.秋季和春季生物量均值分别为1510 g/h和4626 g/h;根据ABC曲线计算的秋季、春季W分别为-0.062和-0.049,表明珠江口海域游泳动物群落处于中度干扰.聚类分析和NMDS分析结果显示,珠江口海域游泳动物群落分为河口群组和近岸群组,组间群落结构差异极显著(P<0.01).[结论]珠江口海域鱼类种群虽然已获得一定程度的恢复,生物多样性水平较高,但传统优势经济鱼类逐渐被小型低值鱼类和甲壳类取代,优势种更替明显.

    游泳动物群落结构多样性特征ABC曲线非度量多维尺度(NMDS)珠江口海域

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    陆川猪ACOX1基因不同亚型克隆及其表达差异分析

    陈钊潘鹏丞潘星辰陈少梅...
    3745-3753页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆陆川猪脂酰辅酶A氧化酶1(Acyl-CoA oxidase 1,ACOX1)基因不同亚型,并进行生物信息学分析,分析ACOX1基因及亚型在不同品种猪背最长肌中表达情况,为研究ACOX1基因在陆川猪机体内的功能作用提供参考依据.[方法]根据GenBank中ACOX1基因序列(NM_001101028.1)及所克隆获得陆川猪ACOX1基因序列编码区(CDS),设计特异性扩增和验证引物,采用TRIzol法提取0月龄陆川猪肝脏及8月龄陆川猪、杜洛克、杜陆猪、陆杜猪背最长肌的总RNA,反转录合成cDNA,以0月龄陆川猪肝脏cDNA为模板进行克隆和验证,获得陆川猪ACOX1基因不同亚型序列,并利用各在线工具进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测ACOX1基因及亚型在背最长肌组织中的表达情况.[结果]陆川猪ACOX1基因存在2种亚型结构,NCBI登录号OQ701687和OQ701688;2种亚型CDS长度均为1986 bp,共编码661个氨基酸残基,2种异构体主要是第270～429位氨基酸进行选择性剪切,陆川猪ACOX1-I型编码蛋白分子量为74786.50 Da,理论等电点(pI)为7.36,ACOX1-II型编码蛋白分子量为74670.49 Da,pI为8.17;ACOX1-I型蛋白中α-螺旋占47.96%,β-转角占10.14%,延伸链占14.52%,无规则卷曲占27.38%,ACOX1-II型蛋白中α-螺旋占47.66%,β-转角占10.89%,延伸链占14.37%,无规则卷曲占27.08%,陆川猪ACOX1蛋白不存在跨膜结构.ACOX1-I基因在陆川猪背最长肌中的相对表达量最高,杜洛克猪中的相对表达量最低,4个品种猪之间差异不显著(P>0.05),ACOX1-II基因在陆川猪和杜洛克猪背最长肌中的相对表达量显著高于杜陆猪和陆杜猪(P<0.05).[结论]陆川猪ACOX1基因存在2种亚型(ACOX1-I和ACOX1-II),ACOX1基因及其亚型在不同品种猪中的表达存在明显差异.

    陆川猪ACOX1基因亚型生物信息学分析表达分析

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    2021-2022年湖南省PRRSV流行病学调查及基因组特征分析

    周宇骏龙明英孟芳王文梅...
    3754-3762页
    查看更多>>摘要：[目的]了解当前湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行情况及主要流行基因型占比情况,并明确其遗传进化关系及重组特征,为湖南省PRRS的科学防控提供参考依据.[方法]2021年3月—2022年10月,从湖南省14个市(州)396个疑似暴发PRRS的猪场采集1184病料样品,采用荧光定量PCR检测PRRSV阳性率,统计不同季节和不同地区的感染情况;利用RT-PCR扩增部分阳性病料样品ORF5序列后进行序列相似性及遗传进化分析;将部分病料接种Marc-145细胞进行病毒分离,采用二代测序技术完成全基因序测序后进行遗传进化分析,并以SimPlot分析是否发生组重组事件.[结果]共有167份病料样品检测结果呈PRRSV阳性(检出率14.1%),湖南省不同地区和不同季节的PRRSV样品阳性率分别为0～46.43%和6.95%～19.67%;高致病性PRRSV(HP-PRRSV)株、经典型PRRSV株和类NADC30株的占比分别为43.11%、15.57%和41.32%.共扩增获得21株PRRSV的完整ORF5序列(600～603 bp),其中,7株与HP-PRRSV参考株的GP5氨基酸序列相似性较高(92.1%～98.9%),13株与类NADC30株的相似性较高(91.3%～93.4%);1株与PRRSV经典株的相似性较高(98.6%～99.1%).不同PRRSV的GP5氨基酸序列变异程度高,其中2株类NADC30株GP5氨基酸序列高变区存在氨基酸残基缺失,且部分病毒株氨基酸变异区域位于GP5氨基酸序列的细胞表位区域.共分离获得2株PRRSV(HuN-A和HuN-B),其中,HuN-A株属于类NADC30株,且以类NADC30株为主要亲本株,以HP-PRRSV株为次要亲本株;HuN-B株属于类HP-PRRSV株.[结论]湖南省PRRSV流行情况较严重,且PRRSV流行株基因型繁多,其中类NADC30株和HP-PRRSV株属于主要流行基因型.分离获得的2株PRRSV中,HuN-A株是类NADC30株与类HP-PRRSV株(JXA1)间发生重组变异而来,HuN-B株可能是JXA1弱毒疫苗株出现毒力返祖而产生.

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行病学调查ORF5基因重组分析湖南省

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