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期刊信息/Journal information
贵州医科大学学报
贵州医科大学学报

何志旭

双月刊

2096-8388

gyyxyxb@126.com

0851-6908166

550004

贵州省贵阳市北京路9号

贵州医科大学学报/Journal Journal of Guizhou Medical UniversityCSTPCD
正式出版
收录年代

    基于网络药理学的葛根素调节非小细胞肺癌自噬和凋亡相关机制研究

    陈梦雪胡婷蒲晗旭张树玲...
    1561-1576页
    查看更多>>摘要:目的 探究葛根素(PUE)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞自噬和凋亡的调控作用及潜在机制.方法 通过中药系统药理学(TCMSP)等数据库筛选PUE靶标,整合数据库中的NSCLC相关基因,进行目标交集分析,确定共同靶点;构建蛋白质互作网络(PPI),进行基因本体论(GO)功能注释,京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析及分子对接验证;为验证上述预测,取NSCLC细胞株A549和H1299设置对照组、PUE组、雷帕霉素(Rapa)阳性对照组、吉非替尼(EGFRi)组以及EFGRi+PUE组,采用细胞增值毒性试验(CCK-8)与乳酸脱氢酶(LDH)法评估细胞活力,实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测自噬与凋亡相关基因即自噬相关激酶1(ULK1)、螯合体1(P62)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)、AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白1轻链3β(LC3BⅡ/Ⅰ)、ULK1、P62、LDHA、磷酸化AMP激活的蛋白激酶(P-AmpK)、泛素化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase3)蛋白的表达,免疫荧光观察自噬相关蛋白P62与LC3B的变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平、线粒体膜电位及活性氧(ROS)水平,分析葛根素对表皮生长因子受体(EGFR)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及ULK1信号通路蛋白的调控作用.结果 通过网络药理学与分子对接技术筛选出PUE抗NSCLC的9个关键靶基因,确认PUE与EGFR等多个关键靶基因紧密结合;GO与KEGG分析揭示PUE可能通过调控信号转导、凋亡、细胞增殖及PI3K/AKT等通路发挥抗NSCLC作用;体外细胞实验表明,与对照组比较,A549 细胞的 PUE 半数致死浓度(LC50)为0.50 mmol/L(P<0.05),H1299 的 LC50 为 1.00 mmol/L(P<0.05);PUE浓度为0.25 mmol/L时,A549和H1299细胞的数量分别下降了 57.95%和69.35%(P<0.05);PUE处理诱导A549和H1299细胞,自噬和凋亡基因ULK1、BCL2表达上调,LDHA、AMPK及P62基因表达下调,自噬相关蛋白LC3BⅡ/Ⅰ 及 ULK1 上调,P62、LDHA 及 EFGR 蛋白下调(P<0.05),A549 细胞中 Cleaved-caspase3 表达蛋白上调(P<0.05);流式细胞术显示,PUE处理A549和H1299细胞均能诱导细胞早期凋亡(P<0.05),下调ROS水平和线粒体膜电位水平(P<0.05);免疫荧光显示,PUE处理后增强了 A549和H1299细胞LC3B荧光信号,减弱了 P62 荧光信号(P<0.05);PUE、EFGRi 及 EFGRi+PUE 处理 A549 和 H1 299 细胞,下调了 EGFR、PI3K、AKT、mTOR 相关通路基因(P<0.05),及 P-EGFR、EGFR、P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT 和 mTOR 等 7 个关键通路蛋白(P<0.05),且在抑制EGFR后效果增强(P<0.05),证实PUE通过EGFR介导的PI3K/AKT/mTOR/ULK1通路发挥抗NSCLC作用.结论 PUE可能通过EGFR介导了 PI3K/AKT/mTOR/ULK1通路,调控NSCLC细胞株A549和H1299的自噬与凋亡,从而发挥抗NSCLC的作用.

    葛根素网络药理学分子对接PI3K/AKT/mTOR通路自噬

    基于荧光图像的水凝胶几何网格重建及其力学性能有限元的模拟

    吴少东朱思勉曾柱
    1577-1586页
    查看更多>>摘要:目的 探讨通过荧光图像重建水凝胶的几何网络及其用于有限元模拟的可行性.方法 取冷水鱼皮的明胶水溶液,分别与28.2、56.5、113.0、141.0 mg戊二醛交联16 h,制备明胶水凝胶;采用动态热机械分析技术测量各组明胶水凝胶的力学性能,并计算压缩模量(Emeas),用激光共聚焦显微镜和图像分割程序分析观测各组明胶水凝胶的孔隙结构;采用图像分割及行进立方体算法进行各组水凝胶支架几何模型的三维重建,对水凝胶荧光图像进行预处理、分割、重建及优化;采用ANSYS Workbench计算有限元,使用静态结构分析模拟各组水凝胶的压缩试验,计算模拟得到模型的压缩模量(Esim)以及水凝胶结构的负载情况.结果 动态热机械分析获得水凝胶的应力应变数据,计算得到Emeas分别为(457.0±30.8)、(942.7±260.5)、(2 053.3±115.0)及(2 133.3±125.8)Pa;观测到经戊二醛交联的水凝胶孔隙发生变化,且戊二醛浓度越高,水凝胶的孔径越小、孔数量越多;三维重建程序生成了可用于有限元体网格划分的水凝胶几何模型;有限元模拟计算得到的Esim与Emeas一致,分别为447.2、829.9、1 987.7及2 181.6 Pa;有限元模拟结果显示,水凝胶结构承担的载荷增加,与基体相比,纤维网络承担主要载荷且载荷增加量更大;当基体弹性模量增加,纤维网络与基体界面处的应力分布的不均匀性降低,与纤维网络相比,基体共享负载增加.结论 利用三维重建方法构建了水凝胶几何模型,模拟的有限元模型可反映明胶水凝胶的力学性能.

    有限元分析水凝胶生物力学现象图像分割三维重建力学分析

    1-苯基2-硫脲对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因表达的影响

    孔鹏莫大双陈敏黄江涛...
    1587-1592,1600页
    查看更多>>摘要:目的 探讨去色素药物1-苯基2-硫脲(PTU)对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因ab-cb4及其标记基因egfp表达的影响及可能机制.方法 选取受精后24h(24 hpf)Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼胚胎做药物暴露实验,分为Control、PTU以及PTU+RES 3个组;持续用药96 h,通过荧光显微镜拍照检测各组斑马鱼胃肠道荧光强度;RT-qPCR 检测 abcb4、egfp 及 pxr 基因 mRNA,Western Blot 检测 abcb4、egfp 蛋白(Abcb4、eGFP)的表达,罗丹明B积累实验检测不同组Abcb4功能.结果 与Contro l组相比,PTU组Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光表达增强(P<0.01),PTU+RES组荧光变化不明显(P>0.05);PTU组abcb4、egfp及pxr基因mRNA表达均增加(P<0.005),PTU+RES组pxr基因mRNA表达增加(P<0.005),abcb4、egfp基因mRNA表达无明显变化(P>0.05);PTU 组 abcb4、egfp 蛋白表达均增加(P<0.005),PTU+RES 组无明显变化(P>0.05);PTU 组 Abcb4功能增强(P<0.01),PTU+RES组无明显变化(P>0.05).结论 PTU可诱导Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼abcb4和egfp表达增加,核因子pxr可能参与PTU对abcb4和egfp的诱导调节过程,在应用PTU去色素处理的Tg(ab-cb4:eGFP)斑马鱼进行药物筛选时需注意PTU对abcb4和egfp表达的影响.

    1-苯基2-硫脲转基因斑马鱼斑马鱼b4型ATP结合盒人B1型ATP结合盒孕烷X受体增强型绿色荧光蛋白

    小鼠Slfn3重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定

    辛晨况春燕刘兴德
    1593-1600页
    查看更多>>摘要:目的 构建携带小鼠Schlafen3(Slfn3)基因的重组过表达质粒,并观察其在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率.方法 从GenBank基因数据库获取小鼠Slfn3基因序列,利用VectorNTI软件对其进行引物设计,通过PCR扩增获得目的基因,将所得到的目的基因与穿梭载体pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG相连接,获得重组腺病毒载体pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG;筛选阳性克隆抽提质粒,通过限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并通过DNA测序验证;采用Admax系统将目的穿梭质粒和腺病毒骨架质粒一同转染HEK293细胞获得重组腺病毒(Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG),对其进行病毒滴度测定,Western blot验证Slfn3蛋白的表达;体外培养小鼠脾源EPCs 5~7 d,细胞密度达70%后,用Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG进行转染48 h后,采用荧光显微镜观察并统计绿色荧光细胞数量,计算Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CM V-Slfn3-3xFLAG 转染的效率.结果 DNA 测序验证 Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG构建成功,病毒滴度为3.16 × 1010(ifu/mL);腺病毒包装之后的重组腺病毒能够转染HEK293细胞,并在细胞中表达Slfn3-EGFP-3xFLAG融合蛋白,且含有Flag标签的蛋白,大小为57 kDa;重组腺病毒在EPCs中的转染效率为(71.43±2.58)%.结论 成功地构建了小鼠Slfn3的过表达重组腺病毒载体,且在EPCs转染效率较高.

    Schlafen3内皮祖细胞重组腺病毒质粒载体构建基因过表达

    中脑腹侧被盖区SIRT1过表达对海洛因依赖小鼠学习记忆和突触结构可塑性的影响

    马旋谭雨维刘美君郑欣雅...
    1601-1608页
    查看更多>>摘要:目的 探讨中脑腹侧被盖区(VTA)过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对海洛因依赖小鼠学习记忆能力和突触结构可塑性的影响.方法 42只C57BL/6J小鼠分为生理盐水对照组(SCG组,n=14)、海洛因依赖组(HDG组,n=14)以及SIRT1过表达海洛因依赖组(SIRT1-OE+H组,n=14),后两组采用逐日递增注射海洛因液体建立海洛因依赖小鼠模型,SIRT1-OE+H组需先VTA注射rAAV9-rSIRT1腺相关病毒;观察小鼠条件位置偏爱(CPP)及Morris水迷宫(MWM)学习记忆行为;转染rAAV9-rSIRT1 21 d时,透射电镜观察VTA脑区突触超微结构,蛋白质印迹(Western blot)检测小鼠VTA脑区突触可塑性相关蛋白的表达.结果 CPP试验中,与SCG相比较,HDG组小鼠在伴药箱中停留延长、CPP评分增高,SIRT1-OE+H组改变更加显著(P<0.05);MWM的定位航行试验结果显示,第4天和第5天,SIRT1-OE+H组逃避潜伏期延长(P<0.05);空间探索试验结果显示,HDG与SIRT1-OE+H组小鼠穿越平台次数增多(P<0.05),但目标象限停留时间比率、目标象限路程比率差异无统计学意义(P>0.05);透射电镜结果显示,HDG和SIRT1-OE+H组突触后膜致密物增厚,突触界面曲率增大;Western blot结果显示SIRT1-OE+H组中突触素(Syn)、突触后致密区蛋白95(PSD95)、生长相关蛋白43(Gap43)表达较SCG明显增多(P<0.05).结论 SIRT1参与了海洛因依赖过程,其机制可能是SIRT1过表达增强了突触可塑性,促进了海洛因引起的奖赏效应,但SIRT1对空间学习记忆能力的影响不显著.

    沉默信息调节因子1中脑腹侧被盖区记忆突触可塑性海洛因

    金骨莲胶囊及其拆方抗炎镇痛作用的研究

    王玲鲁婷婷周祖英王华斌...
    1609-1614页
    查看更多>>摘要:目的 研究金骨莲胶囊的抗炎镇痛作用及各组方配伍的抗炎镇痛内在规律.方法 108只健康昆明种小鼠随机分为对照组(CON组,0.5%羧甲基纤维素钠)、阳性药组(ASPL组,阿司匹林)、全方组(QF组,金骨莲胶囊)、主药组(A组,金铁锁)、辅药组(B组,透骨香、汉桃叶、八角枫)、引药组(C组,大血藤)、主+辅组(A+B组)、主+引组(A+C组)及辅+引组(B+C组)共9组,采用小鼠耳廓肿胀实验评价金骨莲胶囊的抗炎作用,采用醋酸致小鼠扭体反应实验评价其镇痛作用,并结合正交t值法探讨金骨莲方的组方配伍内在规律.结果 与CON相比,ASPL组、QF组、A组、B组、C组、A+B、A+C组以及B+C组的小鼠耳廓肿胀抑制率和扭体抑制率均有不同程度的升高(P<0.05或P<0.01),且QF组耳廓肿胀抑制率和扭体抑制率最高;正交t值表显示,QF组能显著抑制小鼠耳廓肿胀度(P<0.01)和小鼠扭体次数(P<0.05),交互作用明显.结论 金骨莲胶囊具有显著的抗炎镇痛作用,拆方研究表明该方存在配伍增强效应.

    金骨莲胶囊抗炎镇痛正交t值法拆方

    基于AKT-HK2-NF-κB信号通路的辣椒素对CIA大鼠的作用机制

    郑云松皮浩吕何子晗雷欢欢...
    1615-1621页
    查看更多>>摘要:目的 探讨辣椒素(CAP)对大鼠类风湿性关节炎(RA)蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)/己糖激酶2(HK2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的作用及机制.方法 SD大鼠尾根部皮下注入牛Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂的乳化剂,构建胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型作为模型组,空白组大鼠尾根部注入等体积的生理盐水;将造模成功的SD大鼠随机分为CAP低、中、高剂量组(CAP剂量分别为1、2、3 mg/kg)以及阳性对照组(雷公藤剂量为40 mg/kg),于造模成功2周后灌胃3周,空白组与模型组灌胃等量生理盐水;造模前后及给药期间测量大鼠足肿胀程度,给药3周取大鼠踝关节切片、HE染色观察组织学变化,Western blot检测大鼠关节滑膜组织AKT、HK2、NF-κB的表达,RT-qPCR检测AKT、HK2、NF-Kb mRNA的表达,ELISE检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)含量.结果 与模型组相比,CAP高剂量组大鼠右后足AI评分降低(P<0.05),大鼠足肿胀度减轻(P<0.05);与阳性对照组相比,CAP高剂量组大鼠右后足AI评分及大鼠足肿胀度差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,与空白组相比,模型组大鼠踝关节区滑膜出现增生,软骨下骨质结构破坏,同时伴有炎性细胞的浸润和滑膜血管翳的侵袭;与模型组相比,阳性对照组及CAP各组大鼠在进行药物干预后,关节滑膜组织增生均得到不同程度的抑制,且CAP高、中剂量组大鼠关节滑膜组织内浸润的炎症细胞以及新生血管数均有所减少;与模型组比较,阳性对照组和CAP高剂量组IL-6含量降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,CAP高、中剂量组及阳性对照组大鼠滑膜组织AKT、HK2、NF-κB mRNA及蛋白表达水平下降(P<0.05).结论 高剂量CAP可减轻RA大鼠踝关节的炎症反应,其机制可能与抑制AKT-HK2-NF-κB通路相关蛋白及降低血清IL-6水平有关.

    类风湿性关节炎辣椒素蛋白激酶B核因子-κB己糖激酶2白细胞介素-6

    丹参酮ⅡA通过调控星形胶质细胞表型极化促进脊髓损伤修复

    饶江文刘向春贺丰付玲玲...
    1622-1630,1638页
    查看更多>>摘要:目的 观察丹参酮ⅡA(TⅡA)对脊髓损伤模型大鼠脊髓组织星形胶质细胞表型极化及运动功能的影响.方法 将90只雌性SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、TⅡA组、星形胶质细胞抑制剂组(LAA组)及TⅡ A+星形胶质细胞抑制剂组(TⅡ A+LAA组),假手术组仅咬除T8-T10椎板(不损伤硬脊膜),后4组大鼠为脊髓横断损伤模型大鼠,后3组大鼠损伤部位注射相应药物;造模成功后于术后第3、7、14、21、28、56天时分别进行行为学观察和巴索-比蒂-布雷斯纳汉运动功能评分(BBB评分),并取损伤段脊髓组织采用免疫组织荧光染色以及苏木精-伊红(HE)染色、尼氏染色观察脊髓组织学改变;采用qRT-PCR检测各组细胞中A1星形胶质细胞标志物C3、A2星形胶质细胞标志物S100A10、神经胶质细胞标志物GFAP、神经元标志物NF200的表达,Western blot检测各组细胞C3、S100A10、GFAP蛋白表达.结果 与模型组比较,T Ⅱ A组大鼠BBB评分升高,S100A10 mRNA和蛋白表达升高,NF200 mRNA和蛋白表达升高,GFAP mRNA和蛋白表达升高,C3 mRNA和蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,TⅡA组尼氏体数目无明显差异;TⅡA可改善LAA造成的星形胶质细胞增殖抑制,激活反应性星形胶质细胞;与LAA组相比,TⅡA组S100A10蛋白表达升高(P<0.001);与LAA组相比,TⅡA+LAA组S100A10蛋白表达升高(P<0.000 1).结论 TⅡA腹腔注射可改善SCI大鼠的运动功能,其机制可能与调控反应性星形胶质细胞表型,促进A2型星形胶质细胞极化以及减少脊髓病理损伤有关.

    脊髓损伤丹参酮ⅡA星形胶质细胞A1星形胶质细胞A2星形胶质细胞

    乳双歧杆菌诱导旋毛虫感染小鼠Th2型免疫应答的研究

    迟茜文姚梦玮解文利马翔宇...
    1631-1638页
    查看更多>>摘要:目的 探究不同剂量乳双歧杆菌干预对旋毛虫感染小鼠的淋巴细胞增殖、辅助型T细胞2(Th2)型免疫和肠道损伤的影响.方法 用活力良好的旋毛虫灌胃48只小鼠获得感染旋毛虫模型小鼠,随机分为感染组(0.02 mL/g PBS灌胃)、乳双歧杆菌(高、中、低)剂量组(乳双歧杆菌浓度分别为1 ×106、1 ×105、1 ×104 CFU/L,0.02 mL/g灌胃)连续灌胃30 d;采用噻唑蓝(MTT)法检测第7、14、21、28天各组模型小鼠脾细胞中T淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测小鼠脾脏及肠系膜淋巴结中CD4+T细胞、CD8+T细胞表达水平,苏木精-伊红(HE)染色法对十二指肠组织病理学进行观察.结果 与感染组比较,高剂量组、中剂量组脾脏T淋巴细胞的刺激指数(SI))升高(P<0.05);与感染组相比,小鼠脾脏中乳双歧杆菌高剂量组第14、21天脾脏中CD4+T细胞表达升高,第21天乳双歧杆菌高剂量组表达CD8+T细胞降低,小鼠肠系膜淋巴结中乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组CD4+T细胞表达增加(P<0.05);HE结果显示;与感染组比较,乳双歧杆菌高剂量乳双歧杆菌灌胃后第7天和14天炎性细胞浸润减轻,肠绒毛脱落减少.结论 一定浓度的乳双歧杆菌能够提高小鼠抗旋毛虫感染的免疫效应,其机制可能与通过诱导小鼠趋向Th2型免疫极化、修复肠道病理损伤有关.

    乳双歧杆菌旋毛虫T淋巴细胞淋巴细胞增殖Th2型免疫免疫保护

    回流经历对中学生NSSI行为的影响及儿童期虐待的中介作用

    杨先涛吴荣罗媛任鹏宇...
    1639-1644页
    查看更多>>摘要:目的 探讨回流经历对贵州省中学生非自杀性自伤(NSSI)行为的影响,分析儿童期虐待的中介作用.方法 采用多阶段分层随机抽样选取了贵州省3 901名中学生,自编调查问卷测量中学生回流经历及相关人口学特征,以青少年NSSI行为问卷评价中学生NSSI行为,儿童期虐待问卷(CTQ-SF)评价儿童期虐待,采用中介效应模型分析儿童期虐待在NSSI行为与回流经历间的中介作用.结果 贵州省中学生NSSI行为的检出率是22.76%;中介效应分析结果显示,回流经历与中学生NSSI行为得分呈正向关联(直接效应估计值0.377,95%CI为0.070~0.684),情感虐待、躯体虐待及性虐待得分与中学生NSSI行为得分呈正向关联(间接效应估计值分别为 0.108、0.084 及 0.030,95%CI分别为 0.033~0.200、0.023~0.167、0.001~0.080).结论 有回流经历中学生较无回流经历中学生NSSI行为检出率高,在回流经历对中学生NSSI行为的影响中,儿童期虐待起部分中介作用.

    非自杀性自伤行为回流经历儿童期虐待中学生中介作用