查看更多>>摘要:目的 探讨微小RNA-124(microRNA-124,miR-124)的表达对紫杉醇诱导的神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)的影响机制,以及其对早期生长反应因子1(early growth response 1,EGR1)的调控机制.方法 将P12细胞分别暴露于0 μmol/L(对照)、0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L的紫杉醇溶液培养48 h;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)PCR实验、双荧光素酶实验以及蛋白质免疫共沉淀实验检测miR-124和EGR1的mRNA的表达以及两者之间的关系.将50只8~10周龄SD雄性大鼠分别在第1天、第3天、第5天、第7天腹腔注射2mg/kg的紫杉醇,构建大鼠NPP模型;将大鼠随机分为假手术组、模型组、对照(agomiR-124-NC+pcDNA3.1-EGR1-NC)组、激动剂(agomiR-124)组、过表达(pcDNA3.1-EGR1)组,每组10只;其中,假手术组大鼠在造模过程中腹腔注射等剂量的生理盐水;在造模成功后,对照组大鼠尾静脉注射agomiR-124-NC+pcDNA3.1-EGR1-NC;激动剂组大鼠尾静脉注射agomiR-124+pcDNA3.1-EGR1;过表达组大鼠尾静脉注射agomiR-124+pcDNA3.1-EGR1,每日注射一次,连续注射14 d.测定大鼠的械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TdT-mediated dUTPnick end labelling,TUNEL)染色检测脊髓组织中神经元的细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-4和IL-10的水平;免疫荧光检测脊髓组织中小胶质细胞的表型转换;采用Western blot法检测各组脊髓组织中EGR1蛋白的表达.结果 在紫杉醇诱导的P12细胞损伤模型中,miR-124的表达明显降低(均P<0.05),EGR1的mRNA的表达明显升高(均P<0.05),miR-124靶向调控EGR1的表达;动物实验中,与假手术组相比,模型组、对照组、激动剂组、过表达组大鼠的MWT和TWL、脊髓组织中M2型小胶质细胞的比例以及脊髓组织Bcl-2的表达明显降低(P<0.05),细胞的凋亡率、血清中IL-1β、IL-6、IL-4和IL-10的水平、脊髓组织中M1型小胶质细胞的比例、脊髓组织Bax和EGR1蛋白的表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组、过表达组大鼠的MWT和TWL、血清中IL-4和IL-10的水平、脊髓组织中M2型小胶质细胞的比例以及脊髓组织Bcl-2的表达明显升高(P<0.05),细胞的凋亡率、血清中IL-1β、IL-6的水平、脊髓组织中M1型小胶质细胞的比例、脊髓组织Bax和EGR蛋白1的表达明显降低(P<0.05);与激动剂组相比,过表达组大鼠的的MWT和TWL、血清中IL-4和IL-10的水平、脊髓组织中M2型小胶质细胞的比例以及脊髓组织Bcl-2的表达明显降低(P<0.05),细胞的凋亡率、血清中IL-1β、IL-6的水平、脊髓组织中Ml型小胶质细胞的比例、脊髓组织Bax和EGR1蛋白的表达明显升高(P<0.05).差异均具有统计意义(均P<0.05),模型组与对照组大鼠的相关参数间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在紫杉醇诱导的神经病理性疼痛模型中,miR-124的表达明显降低,EGRJ mRNA的表达明显升高,miR-124靶向EGR1的表达,过表达miR-124后能明显促进脊髓组织中小胶质细胞向M2型转换,降低神经元的细胞凋亡率,减轻动物脊髓组织的病理损伤,缓解其疼痛.