查看更多>>摘要:目的 一氧化氮(nitric oxide,NO)作为一种信号分子,调节关键生理过程,与牙周炎关系密切.本研究拟探讨负载黄酮类NO供体药物的复合纳米颗粒(G10@HAP/MSN@ZnO@COS)通过调控巨噬细胞极化对牙周膜干细胞(periodontal liga-ment stem cells,PDLSCs)成骨分化的影响.方法 将新型NO供体药物G10 负载于羟基磷灰石掺杂的介孔二氧化硅颗粒(hydroxyapatite/mesoporous silica nanoparticles,HAP/MSN)上,并用氧化锌(zinc oxide,ZnO)填充,再通过壳聚糖(chitosan,COS)包裹,制备复合纳米颗粒(G10@HAP/MSN@ZnO@COS).CCK-8细胞实验筛选G10@HAP/MSN@ZnO@COS促进细胞增殖的最佳浓度.通过脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞建立细胞炎症模型后,将其分为Control组、G10 组、HAP/MSN@ZnO@COS组和G10@HAP/MSN@ZnO@COS组,各组分别加入新鲜培养基、5 μg/mL G10、5 μg/mL HAP/MSN@ZnO@COS和 5 μg/mL G10@HAP/MSN@ZnO@COS,培养 72 h,采用ELISA和RT-qPCR检测各组细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、IL-10)的表达水平,评估其M1/M2 表型变化.用各组培养基上清液作为条件培养基培养PDLSCs,并通过碱性磷酸酶活性检测和茜素红染色评估其成骨矿化能力.结果 CCK-8实验显示,5 μg/mL G10@HAP/MSN@ZnO@COS能显著促进PDLSCs的增殖.ELISA结果表明,与Control组相比,G10@HAP/MSN@ZnO@COS组中M1 型标志物IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS的表达显著降低(P<0.000 1),而 M2 型标志物 IL-10 表达显著升高(P<0.000 1).RT-qPCR 结果与 ELISA 结果一致,显示 G10@HAP/MSN@ZnO@COS组中M1 相关基因的表达显著下降(P<0.01).在G10@HAP/MSN@ZnO@COS调控巨噬细胞的环境下,茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测结果表明,G10@HAP/MSN@ZnO@COS-CM作为条件培养基,PDLSCs的矿化结节数量和碱性磷酸酶活性均显著高于其他组(P<0.000 1).结论 复合纳米颗粒(G10@HAP/MSN@ZnO@COS)能有效抑制巨噬细胞向M1 表型极化,并促进其向M2 表型极化,G10@HAP/MSN@ZnO@COS调控的抗炎微环境能增强PDLSCs的成骨分化能力.