查看更多>>摘要:目的:探讨水晶兰苷(monotropein,MON)对盲肠结扎穿孔(cecum ligation and puncture,CLP)诱导的小鼠脓毒症相关急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury,S-AKI)的影响及其机制.方法:将90只BALB/c小鼠随机分为阴性对照(nega-tive control,NC)组、假手术(Sham)组、CLP 组、CLP+MON 组、Sham+MON 组和 CLP+地塞米松(dexamethasone,DEX)组.小鼠CLP术后连续5 d腹腔注射药物或等量的生理盐水,第5天安乐死全部小鼠后,采集血清和肾脏组织.使用生化试剂盒检测血清中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,CRE)浓度,以及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平.HE染色评估肾脏组织病理学变化,激光共聚焦显微镜观察二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色的肾组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.ELISA和RT-qPCR检测血清和肾脏组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的水平.Western blot检测 NLR家族Pyrin域蛋白 3(NLR family pyrin domain containing protein 3,NLRP3)炎症小体和核因子-κB(nu-clear factor kappa-B,NF-κB)信号通路蛋白表达.此外,用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/腺苷三磷酸(adenosinetriphosphate,ATP)诱导人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)建立体外脓毒症模型,分为NC组、LPS/ATP组、LPS/ATP+MON组、NL-RP3OE+LPS/ATP+MON组和IKKβOE+LPS/ATP+MON组.CCK-8检测细胞活力,ELISA检测HK-2细胞中炎症因子分泌水平.结果:与CLP组相比,CLP+MON组小鼠存活率显著增加,血清BUN和CRE水平显著降低,黑色的肾组织外观恢复至鲜红色,肾组织病理学变化明显改善.与CLP组相比,CLP+MON组TNF-α、IL-1 β和IL-6水平显著降低,GSH、CAT和T-AOC水平升高,MDA和 ROS 含量显著下降.Western blot 结果显示,与 CLP 组相比,CLP+MON 组 NLRP3、Caspase-1、Cleaved-caspase-1 和 p-NF-κB P65蛋白表达显著下降,核因子κB抑制蛋白α(ihibitor of nuclear factor kappa-B,IκBα)表达明显增加.此外,与LPS/ATP+MON组相比,NLRP3OE+LPS/ATP+MON 组和 IKKβOE+LPS/ATP+MON 组 NLRP3 炎症小体和 NF-κB 通路激活,逆转了 MON 对 LPS/ATP刺激的HK-2细胞中炎症细胞因子的抑制作用.结论:MON通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体通路减少炎症因子释放,从而改善小氧S-AKI和功能障碍.