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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    安徽白山羊MIR206遗传变异对生长性状和启动子活性的影响

    段琴丁扬卢嘉妮张思欢...
    2324-2331页
    查看更多>>摘要：MIR206是MIR-1家族成员之一,在脊椎动物骨骼肌中特异表达,而肌肉是机体的重要组成部分,因此MIR206基因可能对动物的生长发育具有重要调控作用.插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)是一种重要的遗传变异,可能通过影响基因表达水平影响基因功能.本研究探究了安徽白山羊(Capra hircus)MIR206基因InDel变异对生长性状及启动子活性的影响,以期为山羊分子育种提供参考.以431只安徽白山羊为研究对象,收集相应个体的体重、体高、体长、胸围、管围和尻宽等数据.采用PCR产物直接测序的方法鉴定MIR206基因的InDel突变.利用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定安徽白山羊个体的基因型;通过计算遗传参数分析InDel变异在安徽白山羊群体中的分布情况;利用SPSS 25.0分析突变位点基因型与山羊生长性状的相关性;通过双荧光素酶报告系统检测分析MIR206启动子区遗传变异对启动子活性的影响.PCR产物测序和序列比对结果显示,安徽白山羊MIR206转录起始位点上游389～394位置存在1个6 bp InDel变异(rs653221349).该变异在安徽白山羊群体中有3种基因型:II(野生型)、ID(杂合型)和DD(纯合缺失型),属于中度多态(0.25＜PIC＜0.5),处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P＜0.05).关联分析结果显示,6 bp InDel的不同基因型与安徽白山羊的体重、体长和胸围显著相关(P＜0.05).其中ID基因型个体的体重、体长和胸围显著优于II和DD基因型个体.双荧光素酶报告系统结果显示,6 bp的缺失显著降低了基因启动子活性.综上,本研究发现安徽白山羊MIR206基因动子区存在6 bp InDel变异,该突变与安徽白山羊的部分生长性状显著相关且降低了启动子活性,可作为安徽白山羊分子标记辅助选择的候选DNA分子标记.

    安徽白山羊生长性状MIR206基因插入/缺失(InDel)启动子活性

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    甲硫氨酸脑啡肽对猪前体脂肪细胞凋亡的调控机理

    陈齐刘尊海任泽宇王文涛...
    2332-2343页
    查看更多>>摘要：甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,Met-Enk)是一种阿片类神经肽,对于细胞增殖与代谢具有调控作用.为探究Met-Enk对猪(Sus scrofa)前体脂肪细胞凋亡及线粒体结构功能的影响,本研究使用Met-Enk处理猪原代前体脂肪细胞,利用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)、AV/PI(膜联蛋白V/碘化丙啶,annexin V/propidium iodide)染色技术检测细胞凋亡,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)观察线粒体结构变化,并使用JC-1荧光探针等手段检测线粒体功能变化.结果表明,Met-Enk导致猪前体脂肪细胞活性下降,凋亡率升高,引起凋亡标记分子Caspase 3、Caspase 9等表达水平变化;TEM结果显示,前体脂肪细胞中线粒体数目减少、体积肿胀、线粒体嵴减少;AFM结果显示,线粒体发生形变,膜表面出现凹陷,粗糙度增加;结合免疫印迹和qPCR等方法发现,Met-Enk处理导致线粒体结构与功能的受损,并通过阿片生长因子受体(opioid growth factor receptor,Ogfr)促进Bax/Bak等凋亡因子表达,促使线粒体释放细胞色素C,促进细胞凋亡.本研究深入探讨了Met-Enk通过影响线粒体结构与功能诱导猪前体脂肪细胞凋亡的作用机理,为使用Met-Enk改善畜禽脂肪组织发育提供参考.

    甲硫氨酸脑啡肽(Met-Enk)猪前体脂肪细胞细胞凋亡原子力显微镜(AFM)

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    碱韭总黄酮通过m6A-IGF2BP2依赖性途径促进宫颈癌细胞凋亡的机制研究

    赵彩权赵鹏图雅白力格...
    2344-2360页
    查看更多>>摘要：宫颈癌(cervical cancer,CC)是妇科恶性肿瘤,大部分黄酮类化合物具有抗宫颈癌活性,然而碱韭(Allium polyrhizum)总黄酮是否也具有抗宫颈癌活性鲜少报道.为揭示碱韭总黄酮对宫颈癌细胞的作用及机制,本研究利用CCK-8(cell counting kit-8)实验、划痕实验、流式细胞术、实时定量PCR、免疫印迹、斑点杂交、N6-甲基腺苷(N6-methyladenine,m6A)定量、甲基化RNA免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)和RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)等方法,对碱韭总黄酮处理的宫颈癌细胞生长能力进行检测,发现碱韭总黄酮对HeLa、SiHa和CaSki 3种宫颈癌细胞有不同程度的抑制作用,可有效抑制其增殖和迁移能力,同时促进HeLa细胞凋亡.碱韭总黄酮处理HeLa细胞后显著上调其促凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 associated X protein,BAX)的表达,全基因组m6A修饰水平显著上升,且与m6A去甲基化酶脂肪量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)表达显著下调有关;此外,m6A读取蛋白胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达显著上调.生物信息学预测发现,BAX mRNA上有1个极高可信度的m6A修饰位点,而IGF2BP2与此位点结合;同时,m6A抗体和IGF2BP2抗体均能够显著富集BAX mRNA.综上,本研究证明碱韭总黄酮具有良好的抗宫颈癌活性,且可能通过m6A-IGF2BP2相关分子机制促进宫颈癌细胞凋亡而发挥抗癌作用.本研究结果可为黄酮类化合物抗肿瘤机制的相关研究提供理论基础,也为新型药物的开发与应用提供一定的理论参考.

    碱韭总黄酮宫颈癌细胞N6-甲基腺苷(m6A)细胞凋亡

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    基于LPS炎症模型探究贝母素甲与贝母素乙对巨噬细胞Raw264.7的抗炎作用

    金泽兰董云哲李青董莉莉...
    2361-2370页
    查看更多>>摘要：贝母素甲与贝母素乙为百合科草本植物浙贝母(Fritillaria thunbergii)中的代表性生物碱类药用成分,对浙贝母抗炎功效发挥重要作用.为从细胞水平上进一步探究这两类生物碱的抗炎功效,本研究以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠(Mus musculus)单核巨噬细胞(Raw264.7细胞)为炎症模型,采用Griess法、ELISA、Western blot、qRT-PCR等方法分析贝母素甲和贝母素乙对LPS诱导的Raw264.7细胞分泌促炎因子一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、一 氧 化 氮 合 酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)、环 氧 合 酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的影响.结果显示,贝母素甲与贝母素乙均能抑制Raw264.7细胞分化,减少LPS刺激产生的伪足,贝母素甲与贝母素乙中、高剂量组Raw264.7细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度显著降低(P＜0.05,P＜0.01).贝母素甲与贝母素乙对Raw264.7细胞iNOS、COX-2蛋白表达均有抑制作用,且对于iNOS蛋白,贝母素乙的抑制作用高于贝母素甲,对于COX-2蛋白,贝母素甲的抑制作用高于贝母素乙.贝母素甲和贝母素乙均能显著降低Raw264.7细胞IL-6和IL-1β表达量.综上,贝母素甲和贝母素乙均有良好的抗炎效果.本研究为生物碱类物质对炎症的治疗提供一定的数据支持.

    贝母素甲贝母素乙Raw264.7抗炎活性

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    鸡TET2及截短体真核表达载体的构建及其对先天免疫反应的影响

    马克姣蔡清清王佳兴王强州...
    2371-2380页
    查看更多>>摘要：甲基胞嘧啶双加氧酶2(ten-eleven translocation 2,TET2)通过甲基化依赖和不依赖的两种方式调控哺乳动物的天然免疫反应,而鸡(Gallus gallus)TET2的先天免疫调控作用尚未阐明.本研究旨在克隆鸡TET2基因并构建TET2及截短体的真核表达载体,初步探讨TET2及其功能域对鸡先天免疫反应的影响.根据鸡TET2基因组(GenBank No.NM_001277794.1)信息,克隆其全长CDS序列.将TET2全长分为N端N1126和C端CD两个截短体,扩增其基因片段,将其同源重组连接至pCAGGS-Myc真核表达载体.将重组质粒pCAGGS-Myc-TET2及截短体分别转染至鸡胚成纤维细胞DF-1中,通过Western blot和免疫荧光检测鸡TET2及截短体的蛋白表达和细胞定位.通过qRT-PCR检测过表达pCAGGS-Myc-TET2及截短体基因对ploy(I:C)诱导的先天免疫反应相关基因表达的影响.PCR结果显示,成功克隆鸡TET2全长序列及其截短体N1126和CD.生物信息学分析表明,与鸡TET2亲缘关系最为相似的是鸿雁(Anser cygnoides)和绿头鸭(Anas platyrhynchos).Western blot检测表明,Myc标签融合的TET2全长和截短体均能在DF-1细胞正常表达.免疫荧光检测表明,鸡TET2定位于细胞核.qRT-PCR结果表明,过表达鸡TET2全长及截短体均能显著促进poly(I:C)诱导的黑色素瘤分化相关基因 5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)和三基序蛋白25(tripartide motif containing 25,TRIM25)的表达(P＜0.05),而对干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)的表达无显著影响(P＞0.05);与过表达截短体N1126相比,过表达TET2全长和CD功能域极显著促进poly(I:C)诱导的β干扰素(interferon-β,IFN-β)表达(P＜0.05).本研究初步探索了TET2及其截短体对鸡先天免疫反应的影响,为鸡TET2调控先天免疫反应的分子机制提供了基础信息.

    鸡甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)功能域真核表达载体先天免疫

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    白羽王鸽CAPN11基因SNPs鉴定及其对屠宰性状的影响

    向进龙霞庞金兰成敏...
    2381-2390页
    查看更多>>摘要：白羽王鸽(Columba livia)是重要的经济禽类,探究其钙蛋白酶11(calpain 11,CAPN11)基因多态性与屠宰性状的关系,对其屠宰性状的遗传改良和经济性状提升具有重要意义.本研究采用PCR直接测序法对白羽王鸽CAPN11基因SNP进行筛查,并分析SNP位点与白羽王鸽屠宰性状的关联性.通过鉴定白羽王鸽的CAPN11 基因的SNPs发现,在外显子 6 区的第 636 和 738 位发现g.3641644 C>T和g.3641746 C>T 2个同义突变,均存在3种基因型,优势基因型和优势等位基因均为CT和C,0.25＜PIC＜0.5均呈中度多态;χ2检验显示,2个SNPs位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05);连锁不平衡分析显示,2个SNPs位点之间不满足D'＞0.80,r2＞0.33,表明不存在强连锁不平衡效应;关联性分析显示,g.3641644 C>T位点对宰前活重的影响达到显著水平(P＜0.05);g.3641746 C>T位点对白羽王鸽的宰前活重、屠体重、全净膛重、胸肌重和腿肌重等屠宰性状的影响均达到了显著水平(P＜0.05);双倍型分析发现,2个SNPs位点在实验群体中共检测到4种单倍型和10种双倍型,双倍型H2H2(CCTT)个体的宰前活重、屠体重、全净膛重和腿肌重均显著高于其他9种双倍型(P＜0.05);双倍型H2H2(CCTT)个体的胸肌重显著高于除双倍型H3H3(TTCC)和H3H4(TTCT)外的其他双倍型个体(P＜0.05).通过分析单倍型mRNA二级结构发现,单倍型H1(CC)、H2(CT)、H3(TC)均引起了CAPN11基因的mRNA二级结构变化,可能会影响转录和翻译效率,进而影响屠宰性能.综上,CAPN11基因能够作为潜在候选基因用于改善白羽王鸽屠宰性状,为加速白羽王鸽育种选育进程提供一定的理论依据,为提升品种屠宰性状的分子标记选育工作提供参考.

    白羽王鸽钙蛋白酶11基因(CAPN11)SNPs屠宰性状

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    乙型脑炎病毒囊膜蛋白I176R位点突变株的生物学特性比较研究

    唐冕耀赵勤石艳萍曹玉琴...
    2391-2401页
    查看更多>>摘要：乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种危害严重的人畜共患病毒,囊膜蛋白(envelope protein,E)对JEV的神经毒力起关键作用.前期研究发现,重组乙型脑炎病毒(recombinant Japanese encephalitis virus,rJEV)囊膜蛋白I176R位点突变可致弱其神经毒力.为鉴定rJEV-EI176R位点突变后其生物学特性的变化,本研究克隆分析了E176位点突变重组病毒rJEV-EI176R的E基因序列和E蛋白的生物信息学特征;利用qPCR、蚀斑试验和间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)等技术测定rJEV-EI176R的生长曲线、对多种细胞的吸附差异和rJEV-EI176R诱导小鼠小胶质细胞系(mouse microglia cell line,BV-2)细胞炎性水平差异.结果显示,rJEV-EI176R的E蛋白带正电荷的残基增加1个,等电点升高0.37,不稳定指数升高0.39;E蛋白的α螺旋、β折叠、延伸链以及无规则卷曲的数量及占比均发生了改变,同时E176位点氨基酸与附近氨基酸有了不同的连接;rJEV-EI176R在BV-2细胞上的生长曲线没有显著变化且能够感染不同来源的神经细胞和肾细胞;rJEV-EI176R的吸附能力显著提高(P＜0.05)但蚀斑大小变化不显著;rJEV-EI176R接种BV-2细胞后,在12和24h均引起肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、干扰素γ诱导蛋白-10(interferon-gamma-induced protein-10,IP-10)的水平显著低于亲本株(P＜0.05).本研究丰富了JEV毒株E蛋白的生物学特性研究,为后期深入研究JEV减毒机制和疫苗研发提供基础资料.

    乙型脑炎病毒(JEV)囊膜蛋白(E)I176R位点突变神经毒力致弱生物学特性

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    利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂提高猪体细胞核移植胚胎发育率的研究进展

    晏超陈指龙彭翠婷谢浩...
    2402-2412页
    查看更多>>摘要：体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术在保护濒危物种、扩繁良种和治疗疾病等方面应用广泛.组蛋白乙酰化修饰是调控猪(Sus scrofa)早期胚胎发育重要的表观遗传标记,其正确的擦除与重建是胚胎正常发育的基础.随着微量细胞测序技术的发展,研究人员发现体细胞克隆胚胎重编程过程中存在多种表观遗传修饰异常,其中组蛋白乙酰化修饰异常是导致猪体细胞克隆胚胎发育阻滞的重要因素.近年来,一些组蛋白去乙酰化酶抑制剂逐渐被发掘,可用于改善胚胎发育过程中组蛋白乙酰化的异常修饰水平.本文综述了近年来利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂提高猪体细胞核移植胚胎发育及其作用机制的相关研究,为提高猪体细胞克隆效率提供参考.

    猪体细胞核移植(SCNT)组蛋白去乙酰化酶抑制剂胚胎发育

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    单增李斯特菌微滴式数字PCR检测方法的建立及在标准物质研制方面的应用

    徐佳微辛长卫李铁山赵格...
    2413-2423页
    查看更多>>摘要：单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是最严重的食源性病原菌之一.本研究以细胞壁水解酶基因(invasion associated protein,iap)为靶基因建立了微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,优化了反应条件并测试了方法的特异性、灵敏度和重复性,并利用所建立的方法进行了临床样品的检测以及应用该方法研制其标准物质.结果显示,在10 μmol/L引物用量为1.5 μL、10 μmol/L探针用量为0.45 μL和退火温度在60℃时,ddPCR方法的扩增效果最好,最终成功建立了单增李斯特菌ddPCR检测方法.所建立的ddPCR检测方法具有较好的特异性,与其他非特异性菌株不发生交叉反应;重复性试验结果显示组间变异系数为1.57%～4.32%,证实该方法重复性好;该方法具有较高的灵敏度,最低检出下限为6.65 copies/μL.利用ddPCR方法和qPCR方法检测实验室保存的47份临床阳性样本,符合度为100%;应用所建立的方法对标准物质进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室对标准物质定值,定值结果为5.79×103 copies/μL,不确定度为0.47×103 copies/μL.本研究建立的ddPCR检测方法可用于实验室中单增李斯特菌的检测和标准物质的研制,可成为监测单增李斯特菌感染的一种技术手段.

    单核细胞增生李斯特菌微滴式数字PCR(ddPCR)iap基因标准物质

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    北京地区四种百合病毒的检测及病毒序列分析

    鲁婧童孔祥凤李介文贾桂霞...
    2424-2436页
    查看更多>>摘要：百合属植物(Lilium spp.)易受多种病毒复合侵染,病毒检测与序列分析有助于明确感染病毒种类、揭示病毒变异情况.本研究基于百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)、百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PLAMV)中保守基因序列的4对引物,通过优化PCR延伸时间建立上述4种病毒的多重RT-PCR检测方法,并利用该方法抽检了北京地区田间种植百合的病毒感染情况,进一步分离4种病毒产物进行测序与比对,构建系统进化树.结果表明,在多重RT-PCR反应中,增加延伸反应时间至90s时可扩增出全部4种病毒及18S rRNA(内参基因)条带;抽样检测结果显示,田间种植的百合多受2种及以上病毒复合侵染,其中病毒检出率由大到小依次为LSV(100%)＞CMV(92.31%)＞LMoV(30.77%)＞PLAMV(15.38%);序列分析发现,4种病毒分离物与其各自同种病毒序列平均相似性在84.4%以上,证明检测所得4种病毒为目标病毒;4种病毒变异分析发现,CMV分离物以百合为寄主时单独聚为一个分支,具有寄主差异性;LMoV在系统发育关系上可分为2个分支,实验中的分离物属于分支Ⅱ;LSV和PLAMV未见明显分支模式.本研究为百合病毒病的常规分子诊断与研究提供技术支持,为病害防治提供基础参考.

    百合病毒检测多重RT-PCR序列分析

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