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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    虹鳟TANK基因的克隆及其在传染性造血器官坏死病毒(IHNV)感染下的表达分析

    孙同振黄进强吴深基赵璐...
    2174-2186页
    查看更多>>摘要：TRAF家族成员关联的NF-κB激活剂(TRAF family member-associated NF-κB activator,TANK)参与维甲酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible gene I,RIG-Ⅰ)样受体介导的信号通路,在脊椎动物的先天免疫中发挥重要作用.为了解TANK基因的生物学特性及其在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)抗病毒免疫应答中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得虹鳟TANK的全长cDNA序列(GenBank No.OK605587),并进行了生物信息学分析,同时采用qPCR技术检测该基因在健康虹鳟头肾、皮肤、眼、鳃、脑、肠、肝脏、脾脏、心脏和肌肉10个组织中的表达模式,以及感染传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)后脾脏、肝脏、头肾、皮肤、鳃和肠6个重要免疫组织在不同时间点(0,6,12,24,48,72,96,120和144 h)的表达变化.结果显示,TANK基因cDNA全长1618 bp,包含1107 bp的开放阅读框,编码368个氨基酸.生物信息学分析表明,TANK蛋白的分子量为41.41 kD,理论等电点为6.03,不稳定系数为70.60,亲水性平均值为−0.748,脂肪系数为65.54,属于不稳定亲水蛋白.对TANK蛋白的结构分析发现,该蛋白无跨膜结构域,含有保守的TBK1/IKKi结合结构域(TBK1/IKKi-binding domain,TBD)和coiled-coil区域.同源性比对及系统进化分析显示,虹鳟与大马哈鱼(Oncorhynchus keta)的同源性最高(95.92％)且进化关系最近.组织表达分析显示,TANK基因在健康虹鳟头肾、皮肤、眼、鳃、脑、肠、肝脏、脾脏、心脏、肌肉组织中均有表达,在肝脏中表达最高,脾脏和心脏次之,皮肤中最低;经IHNV感染后,TANK基因在脾脏、肝脏、头肾、皮肤、鳃、肠中的表达均极显著上调(P<0.01),以黏膜组织的皮肤和肠中变化最为显著,分别在48和72 h达到峰值,为对照组的3.14和3.16倍;除了脾脏组织的表达量整体表现为先升后降的趋势外,肝脏、头肾、皮肤、鳃和肠均呈现先降后升再降的表达趋势,且肝脏、头肾、皮肤、肠在96和120 h出现不同程度的回升.上述结果表明,TANK基因可能在虹鳟抵御IHNV感染的先天免疫应答中发挥重要作用.本研究结果为进一步探究TANK基因在硬骨鱼类中的抗病毒免疫调控机制提供了基础数据.

    虹鳟免疫基因克隆TRAF家族成员关联的NF-κB激活剂(TANK)表达分析

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    红螯光壳螯虾渗透压相关基因的克隆及其在不同盐度下的表达

    彭博浩张炎刘畅钟箫...
    2187-2200页
    查看更多>>摘要：红螯光壳螯虾(Cherax quadricarinatus)是淡水虾,盐度是影响其生长与存活的重要环境因素.为了扩大可用于红螯光壳螯虾养殖的水域,如盐碱地、河口半咸水区,需要了解其渗透压调节机制,为其在半咸水养殖的可行性及通过半咸水暂养改善其风味提供理论依据.本研究通过NCBI已发表的红螯光壳螯虾转录组数据库筛选出3个与渗透压相关基因:钠钾ATP酶(Na+/K+-ATPase,NKA)、钠钾氯共转运体(Na+/K+/2Cl--cotransporter,NKCC)和酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(14-3-3),通过RT-PCR验证其ORF区.运用生物信息学在线网站对其蛋白结构进行预测,并将不同物种的同源蛋白序列进行多重序列比对和进化树构建,同时利用qPCR分析NKA、NKCC和14-3-3在红螯光壳螯虾不同组织的表达情况及在不同盐度胁迫24、48和96 h后,在鳃和肝胰腺中的表达变化情况.结果表明,NKA、NKCC、14-3-3蛋白在不同物种间具有较高保守性.NKA、NKCC和14-3-3基因在所检测的红螯光壳螯虾鳃、肌肉、心脏、肝胰腺、眼柄组织中均有表达.在不同盐度胁迫下,鳃组织中的NKA基因的表达量在5‰、10‰盐度下变化不显著,在15‰、20‰盐度组的48 h表达量显著提高(P<0.05),在肝胰腺中NKA基因表达量仅在20‰盐度组的48 h显著上升(P<0.05).鳃组织中的NKCC基因表达量在10‰、15‰、20‰盐度组的24、48和96 h均显著上调(P<0.05),在肝胰腺中仅在15‰、20‰盐度组的48 h显著上调(P<0.05).鳃组织中14-3-3基因表达量在10‰、15‰、20‰盐度组的48 h显著上调(P<0.05),在肝胰腺中其表达量在5‰、10‰、15‰盐度组的48 h均显著上调(P<0.05),在20‰盐度组的24和48 h显著上调(P<0.05).结果表明,NKA、NKCC、14-3-3基因的表达与盐度变化相关,20‰盐度胁迫48 h可能是鳃和肝胰腺在高盐度下渗透调节的关键点.本研究为进一步探讨NKA、NKCC和14-3-3基因在红螯光壳螯虾渗透调节机制中的作用提供了参考依据.

    红螯光壳螯虾盐度变化钠钾ATP酶(NKA)钠钾氯共转运体(NKCC)酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(14-3-3)

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    不同有机物料还田后砂质土壤有机碳组分结构特征

    郝近羽陈源泉代红翠李超...
    2201-2211页
    查看更多>>摘要：近年来固态13C核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术已成为土壤有机碳分子结构研究领域的应用热点,相比于壤土和黏土,砂质土对土壤碳组分变化的反馈机制更加敏感.为揭示不同外源碳输入对土壤有机碳组分及稳定性的影响,本研究利用13C-NMR技术,以秸秆还田、单施化肥为主、副对照,测定3种有机物料进行8年连续还田后对砂质土壤有机碳分子结构的影响.结果表明:1)猪粪、沼渣和生物炭处理的土壤有机碳组分与对照组相似,均以烷氧碳(45～110 ppm)为主,其中碳水化合物类碳(60～90 ppm)是其构成的主体.2)与秸秆还田(主对照)相比,沼渣与猪粪还田后土壤耐分解碳组分(烷基碳+芳香碳)比例分别降低了2.96％和3.77％,而生物炭处理则增加了8.12％;沼渣与猪粪处理的疏水性指数分别比秸秆处理降低了4.93％和6.25％,而生物炭处理则提高了14.65％;生物炭处理的芳香度约为沼渣和猪粪处理的1.7～2.0倍.3)冗余分析表明,土壤芳香碳的相对含量对土壤有机碳稳定性指标和有机碳含量的影响达到显著水平(P<0.01).由于不同有机物料还田后土壤有机碳组分存在差异,沼渣和猪粪还田后增加了土壤易分解碳组分(以碳水化合物类碳为主)和羧基碳,意味着土壤有机碳的稳定性被削弱了;生物炭还田后增加了土壤耐分解碳组分(以芳香碳为主),提升土壤有机碳稳定性的效果更显著.本研究结果可为进一步提升农田土壤有机碳库稳定性提供参考.

    有机物料长期施肥固态13C核磁共振(NMR)有机碳分子结构

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    植物腺苷酸环化酶研究进展

    袁野赵馨李佳敏刘志国...
    2212-2223页
    查看更多>>摘要：腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)作为合成重要功能性物质3',5'-环磷酸腺苷(3',5'-cyclicadenosine monophosphate,cAMP)的关键酶,是环磷酸腺苷第二信使系统的重要组成部分.在动物和微生物中,腺苷酸环化酶已有较为系统深入的研究,而植物中腺苷酸环化酶研究起步相对较晚.随着科学技术不断发展进步,最近几十年,植物AC活性验证、基因挖掘、蛋白结构特征及生物学功能等研究取得了明显进展,但尚未有系统的综述报道.因此,本文对植物中AC相关研究进行了系统综述,旨在为进一步开展植物中腺苷酸环化酶研究提供参考.

    植物3',5'-环磷酸腺苷(cAMP)腺苷酸环化酶(AC)酶活检测功能验证

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    甘氨酸-N-甲基转移酶对肝脏代谢及相关疾病的调控机制

    杜雪儿王建国姚军虎曹阳春...
    2224-2235页
    查看更多>>摘要：肝脏是人体重要的功能器官,能够进行多种物质的代谢并重新转运至机体其他部位进行利用和排泄,具有解毒及多种物质的合成、代谢、消化和储存等生理功能.其中脂肪与能量代谢尤为重要,如果该过程出现异常,包括脂肪合成过多、代谢减少及转运能力下降等,就会使非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化及肝硬化、胆汁淤积,甚至肝细胞癌等多种疾病的发生风险急速上升,且与其他代谢类疾病的诱发也紧密关联.最近的研究表明肝脏中的甘氨酸-N-甲基转移酶(glycine-N-methyltransferase,GNMT)作为调控S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)向S-腺苷高半胱氨酸(S-adenosyl-homocysteine,SAH)转化的关键酶来影响SAM的在体水平,进而调控机体的甲基化状态,GNMT还能调控脂肪代谢与转运相关基因的表达,以及氧化呼吸复合物Ⅱ的活性来调控脂肪含量,降低疾病发生和进一步发展.本文对GNMT在肝脏中的脂代谢、糖代谢及氧化应激等调控作用进行阐述,同时还讨论了GNMT在多种肝脏疾病中发挥的治疗作用,期望可以为今后针对GNMT的治疗方法及靶点夯实理论基础.

    甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)脂代谢甲基循环肝脏疾病

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    槐耳WH5的分离鉴定及其液体发酵工艺优化

    唐少军雷平杨祎邵晨霞...
    2236-2245页
    查看更多>>摘要：槐耳(Vanderbylia robiniophila)是一种重要的药用大型真菌,因目前野生资源逐渐稀少,人工栽培周期长、成本高,造成槐耳子实体来源紧缺,阻碍了槐耳活性成分多糖的获取,从槐耳发酵液中提取活性多糖是一种重要途径.为丰富槐耳的菌种资源,提升发酵液中活性化合物多糖的产量,本研究对1株野生槐耳WH5进行组织分离获得纯培养物,结合形态与内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析对其进行鉴定,在单因素实验的基础上结合正交实验对槐耳WH5的液体发酵工艺进行优化;利用体外细胞实验分析发酵液中胞外多糖对肿瘤细胞的抑制活性.结果表明,获得的WH5菌株ITS序列长度为637 bp,与槐耳(GenBank No.KX081122.1)有最高相似性,为99％,且在系统发育树聚集在一个分支上,结合子实体和菌丝形态,确定WH5菌株为槐耳.WH5菌株的最佳液体发酵工艺为:可溶性淀粉30 g/L,蛋白胨15 g/L,MgSO4•7H2O 1.0 g/L,KH2PO42.0 g/L,pH 7.0,转速为160 r/min,发酵温度为30℃,发酵时间为9 d,菌丝和胞外多糖的产量分别为27.52和1.91 g/L.发酵液中的胞外多糖可以抑制B16和Hep-3B肿瘤细胞,其半数抑制浓度(IC50)分别为:24.12和13.25 mg/mL.本研究对丰富槐耳菌种资源以及促进槐耳发酵液中多糖的利用具有重要意义.

    槐耳液体发酵鉴定工艺优化抗肿瘤活性

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    FpgMBV1-P4基因的原核表达及多克隆抗体制备

    刘东伟宋嘉庆潘鑫闫书味...
    2246-2254页
    查看更多>>摘要：假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1(Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1,FpgMBV1)是从假禾谷镰孢(Fusarium pseudograminearum)弱毒菌株FC136-2A中发现的一种真菌病毒.FpgMBV1共编码4个蛋白质,其中FpgMBV1-P4由268个氨基酸残基组成,功能未知.本研究设计特异性引物,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法从菌株FC136-2A的菌丝中扩增FpgMBV1-P4基因,构建原核表达载体pGEX4T-FpgMBV1-P4并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株,在25℃以0.5 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达重组蛋白.结果表明,FpgMBV1-P4基因长为807 bp,重组表达的融合蛋白分子量约为60 kD,与预期大小相符.将该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔(Lepus sinensis),获得抗血清,采用间接ELISA测定其效价达1:160000,能够特异性检测到假禾谷镰孢菌丝中约36 kD的FpgMBV1-P4蛋白.研究结果为深入分析FpgMBV1-P4的结构和功能及进一步探讨FpgMBV1与假禾谷镰孢菌的相互作用提供了基础.

    真菌病毒假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1(FpgMBV1)P4蛋白原核表达多克隆抗体

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    A型塞内卡病毒VP1蛋白单克隆抗体制备及胶体金试纸条的试制

    张涛王会宝孙燕燕翟国元...
    2255-2266页
    查看更多>>摘要：A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是近年新发现的一种病原体,严重危害着我国养猪业的健康发展.为制备SVA病毒结构蛋白1(viral structural protein 1,VP1)单克隆抗体(monoclonol aitibody,McAbs)及建立一种快速、高效、简便的SVA检测方法,本研究利用RT-PCR方法扩增SVA VP1基因,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,诱导表达并纯化得到重组VP1蛋白.以重组VP1蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),筛选获得2株稳定分泌抗SVA VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2E10,3E4).通过2E10和3E4免疫小鼠获得腹水型McAbs并纯化,利用间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定McAbs.以2E10 McAbs作为捕捉抗体,山羊抗鼠IgG与3E4 McAbs分别作为质控线(C线)与检测线(T线)试制SVA胶体金试纸条.结果显示,重组SVA VP1蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为43 kD.抗体亚型鉴定结果显示,2E10重链亚型为IgG2b,3E4重链亚型为IgG2a,轻链均为κ链.IFA和Western blot结果显示,制备的McAbs与SVA特异性结合.试纸条检测结果显示,试纸条能特异性地检测SVA,而与口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)、猪繁殖障碍与呼吸症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)和猪圆环病毒2型病毒(Porcine cirovirus type 2,PCV2)无交叉反应;最低检测病毒含量为5×101.13 TCID50/mL;该方法与qPCR方法检测临床样品的符合率达96.55％.以上结果表明,本研究制备的基于VP1单克隆抗体的胶体金试纸条为SVA的即时检测提供了新方法.

    A型塞内卡病毒(SVA)病毒结构蛋白1(VP1)单克隆抗体胶体金试纸条

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    人物介绍

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