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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    IP3R2结构域对三穗鸭子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的影响

    杨酸谭光辉张依裕游敏芳...
    1153-1165页
    查看更多>>摘要：肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2,IP3R2)是位于内质网的细胞内Ca2+释放通道,通过调控Ca2+释放而影响蛋壳品质.为阐明IP3R2蛋白结构域对鸭(Anas platyrhyncha domestica)子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的调控效应及其对钙转运相关基因的影响,本研究以蛋鸭品种三穗鸭为研究对象,构建IP3R2蛋白结构域的表达载体pCDNA3.1-IP3R2,转染至鸭子宫内膜上皮细胞,以Flag标签ELISA检测试剂盒确定IP3R2蛋白结构域的表达量;以Fluo-3/AM钙离子荧光标记检测胞内Ca2+含量;以qPCR检测不同结构域过表达量及离子转运相关基因的mRNA水平.结果显示,MIR、RYDR_ITPR(1)、RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和Ion_trans结构域过表达均引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+浓度下降;RYDR_ITPR(1)和IP3R2-Ion_trans的表达量与胞内Ca2+浓度显著负相关(P<0.05);RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和5个结构域共转染的表达量与胞内Ca2+浓度极显著负相关(P<0.01);RYDR_ITPR(2)结构域表达量与RYR2、KCNJ15和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);MIR结构域过表达量与IP3R1、CALB1和CA2的基因表达量呈现显著正相关(P<0.05),2个RYDR_ITPR结构域过表达量均与KCNJ15和RYR2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);RIH_assoc结构域过表达量与IP3R2和ORAI1基因表达量呈显著正相关(P<0.05);Ion_trans结构域过表达量与CALB1、SLC8A1和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);5个结构域共转染后的表达量与CFTR基因表达量呈显著正相关、与TRPV6呈显著负相关(P<0.05).上述结果提示,5个IP3R2蛋白结构域的过表达可能引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+向胞外释放,对细胞中20个离子转运基因表达水平的调控效应存在差异.本研究可为分子遗传标记选择和鸭蛋壳品质提高提供参考依据.

    三穗鸭肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(IP3R2)蛋白结构域子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌蛋壳品质

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    玉米大斑病菌转录因子基因StSwi4的克隆及表达分析

    卞哲周启慧刘玉卫巩校东...
    1166-1173页
    查看更多>>摘要：在植物病原真菌中,CWI-MAPK(cell wall integrity-mitogen-activated protein kinase)级联途径主要参与调控病菌细胞壁完整性、细胞周期以及致病性等,Swi4是该级联途径下游关键转录因子.在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,转录因子ScSwi4作为一种调控表达元件参与细胞壁的生物合成及细胞周期调控,但其同源基因在丝状病原真菌中的功能鲜见报道.玉米大斑病(northern leaf blight of corn)由大斑刚毛座腔菌(Setosphaeria turcica)引起,本研究克隆获得玉米大斑病菌StSwi4基因,对其序列及编码蛋白质进行特征分析,发现其DNA全长为2247 bp,cDNA全长为2037 bp,含有3个外显子和2个内含子,编码678个氨基酸;StSwi4蛋白包含1个KilA-N保守结构域和2个ANK保守结构域.对该蛋白的系统进化关系分析发现,玉米大斑病菌与梨黑斑链格孢菌(Alternaria gaisen)、烟草赤星病菌(A.alternate)、番茄匐柄霉菌(Stemphylium solani)的进化关系较近.利用IPTG诱导StSwi4-His融合蛋白表达,利用镍柱亲和层析技术获得其纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果表明,该融合蛋白可以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达.利用qPCR技术分析StSwi4基因在病菌不同发育时期的表达模式,发现该基因在分生孢子时期的表达水平最高.本研究明确了转录因子基因StSwi4的结构特征及表达模式,为深入揭示其在病菌致病过程中的分子机制提供基础资料.

    玉米大斑病菌StSwi4基因克隆原核表达

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    高碳基肥减氮施用对土壤肥力和细菌多样性的影响

    苏梦迪马啸胡丽涛赵龙杰...
    1174-1185页
    查看更多>>摘要：化肥过量施用导致土壤环境恶化,严重影响作物生产.高碳基肥在改善农田土壤生态环境方面起到重要作用,对土壤肥力和微生物多样性影响较大.本研究通过田间试验,针对植烟土壤设置5个处理,NF(不施肥)、GCK(常规施肥纯氮为111 kg/hm2)、G3(高碳基肥料450 kg/hm2+99.9 kg/hm2纯氮)(减氮10％)、G5(高碳基肥料750 kg/hm2+88.8 kg/hm2纯氮)(减氮20％)、G7(高碳基肥料1050 kg/hm2+77.7 kg/hm2纯氮)(减氮30％).采用高通量测序技术对土壤细菌多样性进行分析和土壤化学成分测定,明确高碳基肥减氮施用对土壤肥力和细菌多样性的影响.结果显示,1)高碳基肥减氮施用能够提高土壤pH、碱解氮、速效磷和速效钾的含量.移栽后90 d,G7处理的土壤pH、碱解氮、速效磷和速效钾分别提高了23.49％、8.78％、20.28％和27.81％.2)高碳基肥减氮施用对细菌多样性影响较大.在门水平上,G7处理提高了变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度,在移栽后30和60 d分别比对照提高了9.93％和2.28％.G3处理在移栽后60 d提高了拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度,与对照相比提高了93.42％.高碳基肥减氮施用降低了酸杆菌门(Acidobacteria)相对丰度,其中G7处理在移栽后30 d降幅最大,相较于对照降低了35.39％.属水平上,G7处理在移栽后30和60 d提高了鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)和假节杆菌属(Pseudarthrobacter)的相对丰度,在移栽后60 d降低了产黄杆菌属(Rhodanobacter)的相对丰度.整体来看,G7处理对细菌多样性影响较大.3)冗余分析(redundancy analysis,RDA)表明,土壤pH、速效钾、速效磷和碱解氮均与变形菌门、拟杆菌门、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)呈正相关关系.施用1050 kg/hm2高碳基肥+77.7 kg/hm2纯氮(减氮30％)对土壤肥力改善效果最优,对土壤细菌多样性影响较大.本研究为进一步探究高碳基肥减氮施用改良土壤及其对土壤微生物多样性的影响提供了科学线索.

    高碳基肥减氮施用细菌多样性植烟土壤

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    植物MYC转录因子:结构特点、作用机制和功能调控

    邹文会苏亚春任永娟张畅...
    1186-1201页
    查看更多>>摘要：MYC(myelocytomatosis)转录因子(transcription factors,TFs)是茉莉酸(jasmonic acid,JA)信号转导通路的核心调控因子,参与植物的生长发育、次生代谢物的合成、逆境应答、植物激素信号转导及其通路之间的相互作用.本文针对植物MYC转录因子,从序列特征、结构特点、功能特性及其在生物和非生物胁迫中的作用机制等方面进行研究进展综述.本文为进一步深入探讨MYC转录因子的功能作用和调控模式积累基础资料.

    MYC转录因子结构特点功能特性调控机制

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    道地中药材光慈菇检测试剂盒的研制和评价

    孙传伯何燕飞张晶王玉威...
    1202-1209页
    查看更多>>摘要：近年来,中药光慈菇的应用趋热,市场需求旺盛,但伪品混杂现象严重,研发基于DNA检测技术的鉴别试剂盒对于该药材具有重要的现实意义.本研究基于本课题组前期对光慈菇及其混、伪品构建的系统发育树及在对内转录间隔区(internal transcribed spacers,ITS)序列分析的基础上设计光慈菇特异性PCR引物,优化特异性检测试剂使用和反应条件,根据诊断试剂盒评价标准研制光慈菇检测试剂盒.对试剂盒的特异性、检测限、重复性、保存期以及稳定性进行了评价.根据检测结果,该试剂盒具有良好的特异性(检测限为0.03μg/μL)和极好的稳定性,且保存时间长.本研究开发的道地中药材光慈菇的特异性鉴别试剂盒可对光慈菇准确、快速、灵敏地鉴别,具有广阔的应用前景.

    光慈菇PCR检测试剂盒分子鉴定核酸染料SYBRGreenⅠ

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    两种甘蔗梢腐病病原分子检测技术体系的建立及应用

    李婕李银煳普家荣张荣跃...
    1210-1218页
    查看更多>>摘要：甘蔗(Saccharum officinarum)是我国最重要的糖料作物,甘蔗梢腐病(Pokkah boeng)对我国蔗糖产业高质量发展带来严重威胁,因此本研究基于甘蔗梢腐病主要病原菌拟轮枝镰孢(Fusarium verticillioides)和层出镰孢(Fusarium proliferatum)的核糖体DNA内转录间隔区(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer,rDNA-ITS)序列分别设计了特异性引物,并对采自云南省不同蔗区不同主栽品种上的117份典型甘蔗梢腐病样品进行了PCR分子检测,明确了该区域这2种甘蔗梢腐病主要病原菌的发生情况.结果表明,引物Fp-F3/Fp-R3可从拟轮枝镰孢菌及其侵染甘蔗中扩增出400 bp的特异性片段,而其他甘蔗病害病原菌均未扩增出此片段,该引物最低能检测到的拟轮枝镰孢菌DNA浓度为30 pg/μL;引物Fp-F4/Fp-R4可从层出镰孢菌及其侵染甘蔗中扩增出362 bp的特异性片段,而其他甘蔗病害病原菌均未扩增出此片段,该引物最低能检测到的层出镰孢菌DNA浓度为300 pg/μL.117份样品中有112份样品检出拟轮枝镰孢菌,阳性检出率为95.7％;有103份样品检出层出镰孢菌,阳性检出率为88％;有103份样品为拟轮枝镰孢菌和层出镰孢菌复合侵染,复合侵染率为88％;另有5份样品均未检测出这2种病原菌,可能为其他种引起的甘蔗梢腐病.分别选取不同蔗区不同主栽甘蔗品种上的23个拟轮枝镰孢菌和19个层出镰孢菌的PCR扩增产物进行测序,结果显示,拟轮枝镰孢菌和层出镰孢菌扩增产物序列分别与拟轮枝镰孢菌(GenBank No.KU508286)和层出镰孢菌(GenBank No.MK252904)序列相似性高达99.45％～100％和99.26％～100％.挑取部分序列构建系统发育树,系统发育分析显示测序序列分属于拟轮枝镰孢菌组和层出镰孢菌组.结果表明,本研究建立的检测体系能够准确、快速的检测拟轮枝镰孢菌和层出镰孢菌,云南不同蔗区不同主栽品种轮枝镰孢菌和层出镰孢菌检出率均较高,为云南甘蔗梢腐病重要病原,且复合侵染现象较普遍,其中普洱、临沧、红河和玉溪蔗区拟轮枝镰孢菌为优势种,但层出镰孢菌检出率也较高,且存在其他种.本研究为甘蔗梢腐病病害早期诊断和及时防控提供技术支撑和实践依据.

    甘蔗梢腐病拟轮枝镰孢层出镰孢系统进化分析

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    基于猪口蹄疫O型病毒结构蛋白VP1基因的mRNA疫苗制备及免疫活性研究

    董金杰王会宝王凡邓瑞雪...
    1219-1227页
    查看更多>>摘要：口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是危害养猪(Sus scrofa domesticus)业最重要的传染病之一,疫苗免疫是防控口蹄疫的重要手段之一.由于口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)容易发生变异,致使候选疫苗株和流行毒株间的抗原不匹配,从而影响疫苗免疫效力和疫病预防效果.本研究根据结构蛋白VP1(viral structural protein 1)基因序列和功能,以猪口蹄疫病毒O型毒株(O/MYA98/BY/2010株)灭活抗原为模板,扩增结构蛋白VP1基因,并与pSFV1载体连接构建重组质粒pSFV1-VP1.重组质粒经线性化、体外转录等方法处理获得的mRNA,转染BHK-21细胞并验证表达效果,然后与制备的脂质体纳米颗粒混合免疫豚鼠(Cavia porcellus),进行免疫应答水平和攻毒保护效果检测.结果表明,mRNA转染乳仓鼠肾(baby hamster syrian kidney-21,BHK-21)细胞24 h后,采用免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法均证实VP1得到表达;mRNA疫苗免疫豚鼠后血清中特异性抗体、中和抗体、γ干扰素(γinterferon,IFN-γ)和白介素4(interleukin 4,IL-4)均显著高于阴性对照组.试制的mRNA疫苗免疫豚鼠可以对50倍50％豚鼠感染量(50％guinea pig infectious dose,GPID50)的O/MYA98/BY/2010株攻击提供4/4保护.以上结果表明,试制的mRNA疫苗可以诱导较强的体液免疫与细胞免疫应答,免疫原性良好.本研究为研制口蹄疫紧急预防接种疫苗提供了新途径.

    口蹄疫病毒结构蛋白VP1(VP1)mRNA疫苗免疫原性

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    猪源嗜血支原体三重TaqMan探针荧光定量PCR方法建立和应用

    付媛石团员袁秀芳徐丽华...
    1228-1236页
    查看更多>>摘要：猪附红细胞体病是由猪支原体(Mycoplasma suis)、微小支原体(M.parvum)和浙江分离到的待定新种嗜血支原体(Candidatus M.haemosuis,CMh)引起猪(Sus Scorfa)传染性贫血、黄疸和母猪流产等症状的疾病.3种病原在我国猪群中的流行和传播情况不明,为鉴别诊断3种猪源嗜血支原体和了解该类病原在我国猪群中的流行特点,本研究建立了1种基于甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因的三重TaqMan探针荧光定量PCR(qPCR)鉴别检测方法.根据已知的3种猪源嗜血支原体GAPDH基因序列,利用Beacon Designer 4.0软件分别设计特异性引物和探针.通过分别优化Mg2+浓度、热启动酶浓度、引物和探针浓度等反应条件,建立了三重TaqMan探针qPCR方法,并验证了该法的特异性、敏感性和重复性.结果表明,建立的三重TaqMan探针qPCR方法标准曲线相关系数R2在0.9992～0.9996之间,扩增效率在99.9％～103.2％之间;该法对其他常见猪病无扩增信号,具有良好的特异性;该法对3种猪源嗜血支原体的最低检测限均为1 copy/μL;组内和组间变异系数在0.31％～1.75％之间,表明重复性好.应用该法对浙江省148份猪抗凝血样品检测并与二重PCR符合比较,结果显示三重Taqman探针qPCR检测M.suis、M.parvum和CMh的阳性率分别为50％(74/148)、48.6％(72/148)和64.9％(96/148),3种病原的混合感染率为29.7％(44/148);二重PCR方法检测M.suis/M.parvum和CMh阳性率分别为29.1％(43/148)和15.5％(23/148),二重PCR阳性样品三重qPCR检测均阳性.本研究建立的方法可用于临床上M.suis、M.parvum和CMh的鉴别诊断,为猪源嗜血支原体病的流行病学调查和防控提供技术支撑.

    猪支原体微小支原体新种嗜血支原体嗜血支原体荧光定量PCR附红细胞体病

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