查看更多>>摘要:目的 阐明胃动蛋白 2(gastrokine 2,GKN2)在人胃癌中的作用及相关分子机制.方法 采用免疫组织化学技术检测 90 例胃癌(gastric cancer,GC)组织、48 例癌旁胃组织(adjacent tissue,PT)和 22 例远端胃黏膜组织(distal gastric mucosa,DGM)中GKN2 和TFF1 的表达;构建GKN2 基因高表达载体,转染人胃癌细胞MKN28 和SGC7901,qRT-PCR和Western blot验证转染效率,实验分为 3 组:GKN2 组、NC组、空白组.采用CCK-8、Transwell迁移和侵袭实验测定细胞增殖、迁移和侵袭能力;Western blot观察GKN2 转染后JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3 蛋白表达变化.结果 与癌旁胃组织(GKN2,43.75%;TFF1,62.50%)和远端胃黏膜组织(GKN2,86.36%;TFF1,81.82%)相比,胃癌组织中GKN2(6.67%)、TFF1(21.11%)表达下调(P<0.05);但胃癌组织中GKN2 与TFF1 的表达无相关性(r ≈ 0.23,P=0.074).与NC组(0.25±0.03)和空白组(0.24±0.03)相比,GKN2转染MKN28细胞24 h后OD570下降至(0.15±0.02),GKN2 转染 48 h后的OD570(0.22±0.06)也低于相应的NC组(0.49±0.06)和空白组(0.44±0.02),72 h后的OD570(0.25±0.05)比相应的NC组(0.65±0.21)和空白组(0.63±0.03)减少(P<0.05);SGC7901 细胞中GKN2 转染 24 h后OD570(0.721±0.014)低于NC组(1.352±0.168)和空白组(1.381±0.168),48 h后的OD570(0.674±0.028)也低于相应的NC组(1.459±0.211)和空白组(1.565±0.351),72 h后GKN2 的OD570(0.400±0.028)比NC组(1.745±0.194)和空白组(1.792±0.385)减少(P<0.05).Transwell迁移实验发现,MKN28 细胞中GKN2 转染组穿过膜的癌细胞数(26±5.01)明显低于NC组(109±7.10)和空白组(110±4.04)(P<0.05);与NC组(94±6.00)和空白组(75+7.05)相比,SGC7901中GKN2高表达显著降低了穿过膜的细胞数(37±3.11)(P<0.05).Transwell侵袭实验证实,与NC组(67±5.02)和空白组(66±5.16)相比,GKN2高表达显著降低了穿过基质胶的MKN28细胞数(28±4.10)(P<0.05);SGC7901细胞中GKN2 转染组穿过基质胶的癌细胞数(10±2.06)远低于NC组(58±5.13)和空白组(55±3.17)(P<0.05).Western blot结果显示,GKN2高表达显著下调MKN28和SGC7901细胞中总JAK2、STAT3蛋白表达以及磷酸化形式p-JAK2和p-STAT3的表达水平(P<0.05).结论 GKN2高表达可通过阻断JAK2/STAT3通路抑制胃癌细胞迁移和侵袭.