查看更多>>摘要:目的 探究骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)成骨与成脂分化的影响.方法 取激素性股骨头坏死患者骨髓,体外进行hBMMSC的培养,通过细胞形态学观察、成骨及成脂分化潜能来鉴定hBMMSC.以完培组(基础培养基+10%的胎牛血清)作为对照,采用CCK-8 法测定 1%、2%、5%、8%、10%体积分数的骨痹通消含药血清A组作用 24h后对细胞增殖的影响.细胞在 96 孔板的培养过程中,每孔加入地塞米松溶液 0.52 μl,以完培组(基础培养基+10%的胎牛血清)和损伤组(基础培养组+10%的胎牛血清+0.52 μl地塞米松溶液)作为对照,采用CCK-8法测定2%、5%、8%体积分数的骨痹通消含药血清B组对激素环境中细胞活力的影响.以无激素诱导细胞作为对照组(基础培养基+10%的胎牛血清),将体外激素诱导的hBMMSC细胞分为模型组(基础培养基+10%的胎牛血清+10-5 mol/L地塞米松溶液)、实验组(基础培养基+5%的骨痹通消含药血清+ 10-5 mol/L地塞米松溶液).茜素红染色试剂盒测定各组成骨分化后矿化结节的形成;油红O染色试剂盒测定各组成脂分化后脂滴的形成;RT-qPCR测定成脂相关标志基因PPARγ、C/EBP-α与Fabp4 中mRNA的表达,Western blot检测成骨相关蛋白BMP-2、Runx2及β-catenin的蛋白表达含量.结果 原代细胞培养 7d后,可见梭形、纺锤形或多角形的贴壁细胞.第三代细胞生长均匀,平行排列,透光率好.成骨诱导 21 d,细胞发生改变,局部细胞聚集,并有矿化结节产生,茜素红染色呈阳性;成脂诱导 21 d,脂滴与油红O染液结合变为红色,油红O染色呈阳性.与完培组比较,10%体积分数的含药血清A组细胞活力下降(P<0.05).与完培组比较,损伤组细胞活力下降(P<0.05);与损伤组比较,2%、5%、8%体积分数的含药血清B组细胞活力升高(P<0.05).与对照组比较,模型组染色面积降低(P<0.05);与模型组比较,实验组中矿化结节与沉积升高,染色范围也更广(P<0.05).与对照组比较,模型组细胞内脂质积累增多(P<0.05);与模型组比较,实验组较细胞内脂质积累降低(P<0.05).与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4 的表达量升高(P<0.01),与模型组比较,实验组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4 的表达量降低(P<0.05).与对照组比较,模型组BMP-2、Runx2 及β-catenin蛋白表达含量升高(P<0.01),与模型组比较,实验组BMP-2、Runx2 及β-catenin蛋白表达含量降低(P<0.05).结论 骨痹通消颗粒能够促进激素性股骨头坏死hBMMSC的增殖及其向成骨分化的能力,抑制成脂分化,为临床上防治激素性股骨头坏死提供了理论基础.