查看更多>>摘要:目的 对云南省1株从手足口病病例中分离得到的新型肠道病毒EV-A89进行分子生物学鉴定,并对其基因特征进行分析.方法 对2022年1-12月云南省手足口病实验室监测网络收集的1448份手足口病病例粪便标本进行病毒分离,将经处理的便悬液接种于人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞和人喉表皮样癌(human epidermoid carcinoma,Hep-2)细胞,在出现典型的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)后,采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)对阳性分离物进行VP4/VP2结合区序列和VP1区基因扩增,对扩增产物进行基因测序(Sanger法).用Sequencher 5.4.5软件对测序图谱进行拼接和编辑,分别得到病毒VP4/VP2结合区序列和VP1区序列.对病毒株VP4/VP2结合区序列和VP1区序列进行序列鉴定,得到1株EV-A89(标本编号:B36).用Mega5.2软件的邻位相接法(neighbor jorning method)和Kimura 2参数法(Kimura 2 parameter)构建B36株病毒的基因进化树.结果 1448份手足口病病例粪便标本中,共分离得到126株病毒.对病毒株VP4/VP2结合区和VP1区序列鉴定,得到1株EV-A89.VP4/VP2结合区的序列同源性分析表明,该病毒最接近分离自新疆的1株EV-A89病毒(KSYPH-TRMH22F-XJ-CHN-2011,KT277550,以下简称 KSYPH-TRMH22F),二者的核苷酸(nucleotide,nt)相似性为100.00%,氨基酸(amino acid,aa)同源性为100.00%;该病毒与EV-A89原型株BAN00-10359-BAN-2000(基因库编号:AY697459)的核苷酸相似性为93.82%,氨基酸同源性为99.38%;在VP1区,该病毒也最接近分离自新疆的EV-A89病毒KSYPH-TRMH22F;该病毒与KSYPH-TRMH22F的核苷酸相似性为99.66%,氨基酸同源性为98.99%;该病毒与EV-A89原型株BAN00-10359的核苷酸相似性为97.90%,氨基酸同源性为98.31%.结论 在云南省2022年手足口病病例中检测到1株EV-A89病毒,该病毒为肠道病毒A组的一种新型病毒.