查看更多>>摘要：目的 建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证.方法 以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度(以160 ng/mL为初始浓度,进行2倍系列稀释,共10个稀释度)、抗体起始浓度(起始终浓度设为2 000 ng/mL,进行2倍系列稀释,共20个稀释度)、抗体稀释倍数(1.5、2、3、4倍)、细胞接种量(8×103、2×104、4×104、6×104个/孔)、孵育时间(0.5、1、2、3 h),验证方法的专属性、准确性、精密性及线性范围.采用优化的方法及基于L929细胞的TNF-α中和活性法分别检测5批阿达木单抗的相对效价.结果 阿达木单抗国际标准品的剂量-效应曲线呈典型的S型,且所得数据符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,R2＞0.99.确定最适TNF-α浓度为5 ng/mL,抗体起始浓度为800 ng/mL,抗体稀释倍数为2倍,细胞接种量为2 × 104个/孔,诱导时间为2 h.阿达木单抗等3种TNF-α靶点的治疗性单抗均可获得较好的剂量-效应曲线,其他非TNF-α靶点的治疗性单抗未呈现该曲线;效价理论值对数与其实测值对数的直线回归方程的斜率为1.037,相对偏倚均在±12％范围内;各效价样品的相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均＜20％;理论效价在64％～156％范围内,与检测值呈良好的线性关系,拟合直线回归方程为y=1.037 4 x-0.023 7,R2=0.998 4.两种方法检测5批阿达木单抗的相对效价检测结果差异无统计学意义(t=1.198,P=0.265 1).结论 建立的基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性检测方法具有良好的专属性、准确性及精密性,且耗时短(仅需3h),可作为阿达木单抗生物学活性的快速评价方法.
万方数据
维普