查看更多>>摘要：目的 探讨裂亡PC3细胞来源的细胞外囊泡(MEV)对前列腺癌细胞活性的影响.方法 采用1μmol/L顺铂连续诱导PC3细胞5 d,用免疫荧光法检测细胞核损伤,原子力显微镜检测细胞刚度,流式细胞术检测细胞的衰老标志物(SA-β-Gal)、增殖、周期、线粒体膜电位和线粒体数量,qRT-PCR 检测衰老分泌表型相关因子 CDKN1A、CDKN2A、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-α/β/γ mRNA 表达量.提取MEV,用电镜和纳米颗粒跟踪分析技术检测MEV的形态和粒径,qRT-PCR检测MEV的DNA含量和成分(β-actin和mtDNA),原子力显微镜检测MEV刚度.检测MEV对PC3细胞的作用,免疫荧光法检测细胞对MEV吞噬情况,流式细胞术检测PC3细胞增殖、凋亡情况,qRT-PCR检测PC3细胞IFNα/β/γ表达情况.将5、15、50µmol/L阿霉素与PC3细胞共孵育24h后检测PC3细胞凋亡情况,选取可使PC3细胞明显调亡浓度的阿霉素与50µg MEV混合后处理PC3细胞24h,流式细胞术检测PC3细胞凋亡情况.结果 成功诱导PC3细胞裂亡并提取MEV.与正常培养PC3细胞分泌的胞外囊泡(NEV)相比,MEV的数量明显增多[(4 530.9±353.6)×106粒子数/1×106个细胞与(33.7±5.4)×106 粒子数/1×106 个细胞,P＜0.01],粒径显著变小[(122.0±2.6)nm 与(163.6±2.6)nm,P＜0.01],核 DNA[(111.0±20.7)/1×106个细胞]与 mtDNA[(26.2±3.8)/1×106个细胞]相对含量均明显上升(P均＜0.01),硬度变大[(0.18±0.01)MPa 与(0.11±0.01)MPa,P＜0.01],且 MEV更易被吸收.与NEV相比,MEV能显著诱导PC3细胞凋亡[(641.0±42.5)平均荧光强度(MFI)与(351.7±37.0)MFI,P＜0.01],抑制其增殖[(1 523.0±64.9)MFI 与(1 336.3±94.1)MFI,P＜0.05],对PC3细胞的IFNβ mRNA水平无影响,显著降低IFNα/γ表达量[(0.6±0.1)与(0.8±0.1)](P均＜0.01).与单独应用15µmol/L阿霉素相比,MEV和15μmol/L阿霉素联用后能显著促进 PC3 细胞凋亡[(14 290.3±1 315.9)MFI 与(2 669.3±241.5)MFI,P＜0.01].结论 裂亡 PC3 细胞能高效分泌富含DNA的柔性细胞外囊泡,且MEV易被PC3细胞吸收并能显著抑制其细胞活性,提高阿霉素的杀伤效果.
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