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病毒学报
病毒学报

侯云德

双月刊

1000-8721

bdxb@chinajournal.net.cn

010-63536460

100052

北京西城区迎新街100号

病毒学报/Journal Chinese Journal of VirologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊登载内容为人与动物病毒、植物病毒、昆虫病毒、噬菌体和病毒基础理论研究和应用研究的新成就，新进展。读者对象为病毒学、微生物学、免疫学等领域的科研和教学工作者以及病毒学的医务工作者。是自然科学的核心期刊。在国外是MEDLINE、MEDLARS数据库，《化学文摘》CA，《生物学文摘》BA等的来源刊，在国内是《中国学术期刊文摘》、《中国医学文摘》、《中国生物医学文摘》等的来源刊。已经加入中国期刊网、万方数据“数字化期刊群”等网络。主要栏目有论著、简报、综述、述评、信息。
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    新型冠状病毒奥密克戎变异株感染者呼吸道排毒规律研究

    包恬淼冯晔囡毛乃颖陈操...
    241-247页
    查看更多>>摘要：本文通过分析采集的鼻咽拭子样本新冠病毒核酸Ct值,探索我国奥密克戎变异株流行时期感染者的排毒规律及影响因素,为预判不同类型病例的传染性和疾病进展提供科学依据.研究纳入某地区457例SARS-CoV-2核酸阳性感染者的1462份鼻咽拭子样本.提取病毒总RNA,荧光定量PCR法确定样本新冠病毒Ct值.设定Ct值＜35为阳性,比较核酸检测阳性后不同时间点Ct值以及不同年龄、性别、疫苗接种分组间Ct值的差异.结果表明感染者ORF1ab和N基因的平均Ct值在首次核酸阳性后的第1周均最低(ORF1ab:32.36±0.3949;N:31.89± 0.3792),ORF1ab基因的平均Ct值在首次核酸阳性后第2周转阴,而N基因的平均Ct值在首次核酸阳性后第3周转阴.不同年龄组新冠病毒感染者ORF1ab和N基因的Ct值变化具有统计学差异(ORF1ab:P=0.011;N∶P=0.0042).其中,在第3周,老年组Ct值显著低于中青年组;在第4周,老年组和中青年组的Ct值显著低于儿童组.不同性别和疫苗接种情况分组间Ct值变化均无统计学差异.本研究结果显示,年龄是影响新冠病毒感染者病毒载量变化的主要因素.

    新冠病毒病毒载量排毒规律

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    青年人群感染Omicron的细胞因子动态变化特征

    宗可鑫罗琴王璐璐宫悦...
    248-254页
    查看更多>>摘要：为了评价2022年12月至2023年3月北京市SARS-CoV-2 Omicron BA.5和BF.7变异株感染青年人群感染前和感染后7d、14d和21d细胞因子免疫谱的动态变化,预防过度炎症反应和严重疾病的发生,采用Cytek Aurora全光谱流式细胞仪(Cytek,America)检测15例感染者在SARS-CoV-2感染前、感染后(7d、14d和21d)的血清样本中12种细胞因子的表达水平,评价细胞因子在SARS-CoV-2感染前后的动态变化特征.本研究成功构建了 SARS-CoV-2感染青年人群细胞因子免疫谱的纵向研究队列.研究结果发现感染SARS-CoV-2后,各细胞因子与感染前相比均有显著的动态变化.IL-6、IL-17A、MIP-1β在感染后第7d显著升高,第14d和第21d逐渐下降.与感染前相比,感染后IL-2、IL-4、IL-22和IL-9的表达水平显著升高,并维持在较高水平一直持续至21d.与感染后IL-6的快速升高相比,TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8、和RANTES在感染后缓慢升高,在第14d或第21d达到最高表达水平,提示这些细胞因子的变化伴随着疾病进展的发展.SARS-CoV-2感染后,各细胞因子与感染前相比均显著升高(P＜0.05),促炎和抗炎相关细胞因子在SARS-CoV-2感染后维持了适当的平衡,确保了感染后不发展为严重感染.虽然SARS-CoV-2可以在短时间内被清除,但细胞因子反应将在宿主体内持续21d以上.

    新冠病毒感染细胞因子免疫谱奥密克戎变异株纵向队列研究

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    基于RT-qPCR方法对新冠病毒4种基因型鉴定的可行性研究

    杨潇雨牛培华田晓灵王衍海...
    266-273页
    查看更多>>摘要：严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的广泛传播强调了对该病毒进行持续监测的紧迫性,以便早发现并采取预防措施.虽然全基因组测序(Whole genome sequencing,WGS)作为SARS-CoV-2检测的金标准,但是其专业性和昂贵成本限制了其在各种情境下的广泛应用.在资源匮乏的地区,迫切需要一种低成本高效率的替代方法.实时荧光定量PCR(Real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)提供了一种经济、快速的方法,同时有效补充了 WGS方法.本研究旨在验证SARS-CoV-2 Omicron BF.7/BA.5.2/XBB/BQ.1及亚分支变异株单重核酸检测试剂盒(RT-qPCR法)的性能,并通过对101例SARS-CoV-2阳性临床样本进行评估,验证其在实际应用中的可行性.研究结果显示,该试剂盒与"野生型"SARS-CoV-2、Alpha、Beta、Delta变异株和甲型流感病毒参考株之间无交叉反应,最低检测限为100拷贝/mL.在101例新冠病毒核酸阳性样本中,该试剂盒对Omicron BF.7/BA.5.2/XBB/BQ.1及亚分支变异的检测结果与WGS检出结果完全一致.因此,该RT-qPCR试剂盒为SARS-CoV-2 Omicron变异株亚型的快速鉴定提供了一种简单、经济且高效的方法,可作为WGS的有效补充方案.

    SARS-CoV-2OmicronBF.7/BA.5.2/XBB/BQ.1及亚分支变异株实时荧光定量PCR应用评价

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    人呼吸道合胞病毒SH蛋白混合多肽免疫原性初步研究

    郭宏宋洋李海时雨晴...
    293-301页
    查看更多>>摘要：本研究旨在探讨人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)小疏水蛋白(Small hydrophobic protein,SH)T细胞表位肽的免疫原性和保护效果.通过设计并合成覆盖SH蛋白序列全长的10条多肽,利用HRSV感染小鼠的脾淋巴细胞进行IFN-γ-酶联免疫斑点(Enzyme-linked immunospot assay,ELISpot)的检测,筛选出5条能显著刺激IFN-y产生的SH蛋白T细胞表位多肽.将其与CpG和磷酸铝(AL)佐剂配制成混合多肽疫苗,两次皮下给药的方式免疫C57BL/6J小鼠,评价其免疫原性和保护效果.结果显示,与佐剂对照组相比,SH蛋白混合多肽疫苗可以诱导免疫后的小鼠产生抗原特异性IgG抗体和Th1偏向的T细胞免疫应答,降低HRSV感染后肺病毒载量,并减轻肺脏病理损伤.研究结果表明,SH蛋白混合多肽通过免疫小鼠可以引起良好的免疫原性,并保护小鼠抵抗HRSV的感染.为进一步研究基于SH蛋白的HRSV多肽疫苗提供了科学依据.

    人呼吸道合胞病毒小疏水蛋白多肽细胞免疫

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    呼吸道合胞病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及初步研究

    王亚娟陈娇陈志华茹毅...
    302-313页
    查看更多>>摘要：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒,其非结构蛋白(Nonstructural protein 2,NS2)在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用,但目前尚无商品化NS2单克隆抗体.本研究选取NS2基因,经密码子优化后构建重组质粒pET-32a-NS2.将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经16℃诱导表达后,对表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定.应用亲和层析技术纯化重组蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体用于Western blot分析、免疫荧光检测和免疫沉淀反应.结果表明,诱导后的重组蛋白为可溶性表达,并经纯化后得到高纯度的NS2蛋白;纯化的NS2蛋白免疫小鼠后,获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS2单克隆抗体4A4 2B2,其亚型为IgG1,且抗体效价可达1:1024000;使用该单克隆抗体鉴定出RSVNS2蛋白在转染和感染细胞中正常表达,且NS2主要分布在细胞质中,在细胞核周围形成点状聚集体;在免疫沉淀反应中,该单克隆抗体作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS2蛋白,为NS2蛋白的功能研究奠定了基础.

    呼吸道合胞病毒NS2蛋白原核表达单克隆抗体

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    水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析

    李海鑫曹蕾郭晋源孙馨...
    314-325页
    查看更多>>摘要：水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZVgE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市.多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白.三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照.SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在.与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P＜0.01),与Shingrix相当.此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P＜0.0001,P＜0.05).综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗.

    水痘带状疱疹病毒gE-Foldon蛋白免疫效果

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    柯萨奇病毒A10型对利巴韦林耐药性的初步研究

    孙甜甜宗彦君王蕊李冀琛...
    337-345页
    查看更多>>摘要：近年来,全国范围内手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一.为了评价利巴韦林在体外对CVA10的抑制效果,本研究中,我们随机选取了 19条2009-2021年的不同地区和不同年代的有代表性的中国大陆优势流行基因型C基因型的CVA10毒株,通过细胞毒性实验(Cell counting kit-8,CCK8)来检测利巴韦林在RD细胞上对CVA10的抑制率.将抑制率大于85％的CVA10定义为对利巴韦林敏感组,抑制率小于15％的CVA10定义为对利巴韦林耐药组.结果显示利巴韦林在0.78mmol/L浓度下可以对CVA10产生较好的抑制作用并且对细胞的毒性较低.19株CVA10中有4株表现出对利巴韦林耐药性,2株表现出对利巴韦林敏感性,剩余13株的敏感性在85％～15％之间.通过7日龄ICR乳鼠感染实验比较对利巴韦林敏感组和耐药组毒株的致病力差异,通过观察乳鼠临床评分、生存率、体重及组织取材的滴度测定结果均表明对利巴韦林敏感组CVA10在小鼠上的致病力比耐药组强.进一步使用MEGA 7.0软件对影响CVA10复制和翻译的2C区氨基酸序列进行差异性分析,以分析可能的耐药位点.结果显示对利巴韦林耐药组和敏感组CVA10的2C区的327位和328位氨基酸位点存在差异.本研究发现当前国内流行的CVA10存在广泛对利巴韦林耐药现象,其中部分CVA10对利巴韦林完全耐药.因此,有必要加强对CVA10耐药株的监测,以便更好地指导临床医生正确地选择抗病毒药物,为个体化的治疗提供理论依据.

    柯萨奇病毒A10型利巴韦林耐药性2C区差异位点

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    线粒体凋亡参与EV-71感染致人微血管内皮细胞损伤的机制

    李爽梁若楠朱培育纪望全...
    357-364页
    查看更多>>摘要：肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是一种嗜神经性肠道病毒,主要通过粪～口途径传播.然而,EV71感染导致微血管内皮细胞凋亡的机制尚未完全阐明.本研究使用临床分离的EV71毒株体外感染人微血管内皮细胞(Humanmicrovascularendothelial cells,HMEC-1),探讨线粒体损伤在EV71 感染损伤HMEC-1 的作用机制.MTT法检测结果发现,HMEC-1感染EV7124h后细胞活力下降到47％(P＜0.01);透射电子显微镜观察到EV71感染后的HMEC-1胞质中出现大量空泡,并且可观察到HMEC-1线粒体肿胀、变性并明显空泡化,部分线粒体嵴断裂、减少,少量胞质内可见散在或游离的病毒颗粒;JC-1染色结果显示EV71感染32 h后,HMEC-1线粒体膜电位明显下降;荧光探针DCFH-DA检测到病毒感染后的细胞线粒体活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平明显升高;随着 EV71 感染时间的增加,EV71-VP1、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 8、Cleaved-caspase 9、Bax蛋白水平逐渐升高,并且细胞中的Cyt C蛋白从线粒体转移到了细胞质;此外,实时荧光定量PCR法结果显示,随着感染时间增加,HMEC-1表达TNF-a、IL-6、IL-1p的mRNA表达水平逐渐升高.而通过N-乙酰半胱胺酸干预后,可显著降低病毒感染诱导内皮细胞促凋亡蛋白和TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达(P＜0.01).因此,本研究发现EV71感染通过线粒体途径诱导HMEC-1凋亡,且这一过程受ROS介导.

    肠道病毒71型人微血管内皮细胞凋亡线粒体膜电位活性氧

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    Ⅲa基因缺失的人7型腺病毒载体系统的建立

    王洋王永进侯文哲郭小娟...
    365-373页
    查看更多>>摘要：为了获得既能高效扩增外源基因,又不产生复制型子代病毒的腺病毒载体,我们构建了一个Ⅲa基因缺失的单周期腺病毒载体.本研究在前期已构建的E3区携带绿色荧光蛋白GFP的人7型腺病毒载体pK-Ad7E3GFP基础上进行.首先设计引物扩增包含氨苄青霉素抗性基因和质粒复制起点的AMP-ORI片段,利用限制性内切酶Asc I将pK-Ad7E3GFP切割为29.1kb与7.7kb的大小片段,其中,7.7kb小片段与AMP-ORI片段组装,获得第一个中间质粒pA-Ad7E3GAscI;经重叠延伸PCR、酶切、DNA组装等方法,将pA-Ad7E3GAscI上的Ⅲa基因进行删除,获得第二个中间质粒pA-AscDⅢa;经Pme Ⅰ酶切的pA-AscD Ⅲa与上述29.1kb大片段经DNA组装后,得到重组腺病毒质粒pK-Ad7D ⅢaE3GFP.同时,构建携带Ⅲa基因的真核表达载体pTPL-Ⅲa,转染293细胞,经G418筛选构建细胞系293-Ⅲa.结果发现,经Pme Ⅰ线性化的pK-Ad7DⅢaE3GFP质粒转染293-Ⅲa细胞,7d后可见荧光聚集,且逐渐增大,表明重组腺病毒Ad7DⅢaE3GFP拯救成功;提取病毒基因组进行PCR鉴定,结果与预期相符;细胞培养上清经负染后,在电镜下可见腺病毒典型的正二十面体形态,培养细胞中也可见病毒呈晶格排列;以上结果均表明Ad7DⅢaE3GFP拯救成功.本研究成功建立了 Ⅲa基因缺失的单周期人7型腺病毒载体系统,为该载体的研究与应用奠定基础.

    Ⅲa基因人7型腺病毒载体单周期载体DNA组装病毒拯救

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    2018-2023年新疆维吾尔自治区风疹流行病学特征及病毒基因特征分析

    玛合木提江·库尔班钱程凯赛尔·吾斯曼孙璐...
    374-382页
    查看更多>>摘要：为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶基因序列(位于E1基因的739个靶核酸片段,E1-739).基于E1-739,将本研究RuV株与WHO基因分型代表株以及已报道的1E和2B基因亚型代表株构建系统发育树,鉴定其基因型/亚型.同时,与同时期我国其他省份流行RuV代表株进行比对,了解新疆流行RuV的分子差异.结果显示,2018-2023年,新疆共计报告风疹病例599例,除外2019年风疹发病有小幅回升(414例,1.66/10万),其余年份发病率均维持在较低水平(年均发病率为0.17/10万),并在2023年降低到了历史最低水平(8例,0.03/10万);2018-2023年间,病例主要集中在北疆的阿勒泰和塔城等地区;病例年龄分布显示,2018年和2021-2023年间,＜10岁儿童病例占比均较高(52.8％～62.5％),而2019年和2020年则以10-19岁年龄组人群为主(72.4％和51.9％).病毒学监测数据显示,2022年从新疆4个地(州、市)共获得7株RuV病毒株的靶基因,分属于1E-L2(6株)和2B-L2c(1株),与同期我国其他省份流行的RuV病毒株具有较高的亲缘性.本研究为新疆地区优化风疹防控策略提供了基础科学数据.

    风疹流行病学基因特征新疆维吾尔自治区

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