查看更多>>摘要:冶炼排放、矿物燃烧和工业废水排放等工业活动都可能导致环境中的铜污染.铜污染可能通过直接或间接接触对水生生物、植物和动物产生有害影响.然而,目前对铜的毒性的认识相当有限,部分研究表明铜负荷会扰乱细胞内稳态,引起氧化应激甚至细胞死亡.最近,一种新的细胞死亡形式被发现并命名为"铜死亡",这是一种依赖铜的线粒体氧化应激诱导的细胞死亡类型.本研究发现锌离子转运蛋白1(zinc transporter 1,ZNT1)在铜死亡过程中是一个重要的调节因子.首先,研究通过在HeLa细胞中过表达铜转运载体SLC31A1蛋白,构建了铜过载细胞模型.利用该细胞模型,进行了全基因组CRISPR-Cas9筛.研究结果显示,在A和B质粒库中,ZNT1基因都显著富集,经验证,敲除HeLa细胞中的ZNT1可显著抑制铜死亡.随后在ZNT1缺失细胞中敲除金属转录因子1(metal transcription factor 1,MTF1),细胞几乎丧失了抵抗铜死亡的能力.然而,在双敲除细胞中,过表达金属硫蛋白1X(metallothionein 1X,MT1X)部分恢复对铜死亡的抗性.从机制上讲,敲除ZNT1蛋白后铜暴露会显著激活MTF1转录活性,促进MT1X的表达,此时,MT1X与自由态铜离子的相互作用增强,减少了进入线粒体的铜,消除了线粒体损伤.综上所述,本研究揭示了ZNT1在铜死亡中的重要作用,并显示了MTF1-MT1X轴介导的铜死亡抵抗机制.此外,本研究将有助于了解铜过载时细胞和全身铜稳态的调节机制,并为遗传性铜过载疾病和环境铜污染引起的铜中毒疾病提供新的治疗方法.