查看更多>>摘要:目的 探究褪黑素通过抑制PTEN/AKT/FOXO3a通路在小鼠卵巢中的激活遏制慢性应激下小鼠卵泡发育不良的机制.方法 选取60只6周龄雌性C57BL/6N小鼠,随机分为正常对照组、慢性应激组和褪黑素组,每组各20只.使用实验室称重仪记录小鼠的身体和卵巢的质量.通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测小鼠血清激素水平.通过组织学分析计算小鼠卵巢不同阶段的卵泡数量.通过ELISA和实时定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测小鼠血清抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)的表达.通过蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase)/蛋白激酶 B(protein kinase B,AKT)/叉头框转录因子 3a(forkhead box transcription factor 3a,FOXO3a)信号通路的表达.通过PCR检测小鼠卵巢PI3K/AKT/FOXO3a的转录水平.统计学方法采用LSD-t检验、x2检验、单因素方差分析或重复测量资料方差分析.结果 慢性应激组与正常对照组的初级卵泡数量[(174±30)个与(107±17)个,t=-148.098]、磷酸化张力蛋白同源物(p-phosphatase tensin homolog deleted on chromosome ten,p-PTEN)蛋白(2.03±0.19 与 1.26±0.16,t=-32.207)、p-AKT 蛋白(1.99±0.18 与 1.07±0.05,t=-70.021)、p-FOXO3a 蛋白(2.18±0.20 与 1.18±0.11,t=-64.621)、皮质醇稳定蛋白(cortistatin,CORT)(137±12 与 83±7,t=-124.235)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)[(13.1±1.9)IU/L与(8.2±1.6)IU/L,t=-25.388]比较,慢性应激组水平高于正常对照组(P值均<0.05).慢性应激组与正常对照组的小鼠身体质量[(22.5±2.5)g与(28.4±4.7)g,t=12.906]、卵巢质量[(9±3)mg 与(23±5)mg,t=45.302]、雌二醇水平[(36±8)μg/L 与(75±10)μg/L,t=88.937]、雄激素水平[(0.13±0.01)μg/L 与(0.20±0.02)μg/L,t=23.123]、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平[(3.2±0.3)IU/L 与(4.6±0.5)IU/L,t=31.170]以及原始卵泡数量[(87±9)个与(143±27)个,t=111.829]、次级卵泡数量[(92±11)个与(150±21)个,t=130.837]和窦卵泡数量[(43±5)个与(96±8个),t=144.851]比较,慢性应激组低于正常对照组(P值均<0.001).褪黑素组与慢性应激组的p-PTEN/PTEN(1.15±0.14与2.03±0.19,t--4.983)、p-AKT/AKT(1.21±0.13与1.99±0.18,t=-12.108)、p-FOXO3a/FOXO3a(1.35±0.17 与 2.18±0.20,t=-11.274)、CORT[(106±10)μg/L 与(137±12)μg/L,t=-50.392]和FSH水平[(10.2±1.5)IU/L与(13.1±1.9)IU/L,t=-10.317]比较,褪黑素组低于慢性应激组(P值均<0.001).褪黑素组与慢性应激组的小鼠身体质量[(26.5±4.1)g与(22.5±2.5)g,t=5.182]、卵巢质量[(17±5)mg 与(9±3)mg,t=19.588]、雌二醇水平[(66±6)μg/L与(36±8)μg/L,t=20.485]、雄激素水平[(0.21±0.02)μg/L 与(0.13±0.01)μg/L,t=6.458]、LH 水平[(4.3±0.4)IU/L 与(3.2±0.3)IU/L,t=6.924]以及原始卵泡数量[(125±15)个与(87±9)个,t=38.784]、次级卵泡数量[(137±16)个与(92±11)个,t=29.063]和窦卵泡数量[(76±6)个与(43±5)个,t=49.447]比较,褪黑素组高于慢性应激组(P值均<0.001).结论 褪黑素通过抑制PTEN/AKT/FOXO3a通路成员的磷酸化,升高小鼠血清AMH水平,最终减轻慢性应激诱导的小鼠卵巢原始卵泡丢失和卵泡发育不良.