查看更多>>摘要:目的:基于磷脂酰肌醇(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)/低氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)信号通路与糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3 beta,GSK-3β)信号通路探讨骨坏死康复丸治疗激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)的作用机制.方法:从65只雄性大鼠中随机选取12只作为空白组,其余大鼠采用脂多糖(20 μg·kg-1)联合甲基强的松龙(40 mg·kg-1)注射法建立SONFH模型.将造模成功的大鼠随机分为模型组、仙灵骨葆胶囊组(0.315 g·kg-1)、骨坏死康复丸高剂量组(27.30 g·kg-1)及中剂量组(13.65 g·kg-1),每组12只,连续灌胃6周.采用Micro-CT观察大鼠股骨头结构,HE染色观察股骨头病理形态,ELISA法检测血清HIF-1α含量.骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的分组方式同动物实验,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测GSK-3 β、HIF-1 α、Akt蛋白表达水平.结果:Micro-CT显示,与空白组比较,模型组大鼠股骨头骨小梁短少、稀疏,组织微结构明显破坏.与模型组比较,药物组大鼠骨小梁结构得到改善,排列趋于规则.与空白组比较,模型组大鼠骨体积分数、骨矿物质密度、骨小梁厚度及骨小梁数量减少(P<0.01).与模型组比较,骨坏死康复丸高剂量组大鼠骨体积分数、骨矿物质密度、骨小梁数量增加(P<0.05).HE染色显示,空白组大鼠股骨头软骨层较厚,骨小梁排列整齐,髓腔内可见大量活跃的增生骨髓组织.模型组大鼠软骨层较薄,骨小梁稀疏,排列紊乱,髓腔内见大量坏死组织碎片,伴随大量空缺骨陷窝和骨坏死.与模型组比较,药物组大鼠骨小梁紊乱、断裂得到改善,空骨陷窝减少.与空白组比较,模型组大鼠血清HIF-1α含量减少;与模型组比较,药物组大鼠血清HIF-1α含量增加(P<0.01).CCK-8检测显示,与空白组比较,模型组BMSCs的增殖率降低(P<0.05).与模型组比较,仙灵骨葆胶囊组和骨坏死康复丸高剂量组BMSCs的增殖率升高(P<0.01).Western blot显示,与空白组比较,模型组BMSCs的GSK-3β、HIF-1α、Akt表达水平降低(P<0.01).与模型组比较,药物组BMSCs的GSK-3β、HIF-1α、Akt表达水平升高(P<0.01).结论:骨坏死康复丸可能通过调控PI3K/Akt/HIF-1α信号通路、GSK-3β信号通路发挥对SONFH的治疗作用.