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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    中间球海胆SiPFK基因的克隆及酸化-高温胁迫对其表达的影响

    焦仁和崔东遥武博琼宋坚...
    1962-1975页
    查看更多>>摘要：糖酵解途径中的关键酶磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFK)在棘皮动物调节和适应海洋环境变化中发挥重要作用.为明确中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)PFK基因的序列信息和表达规律,初步了解"酸化-高温"胁迫对其表达和生物活力的影响,本研究通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得中间球海胆磷酸果糖激酶基因SiPFK的全长cDNA序列(GenBank No.OM780114),并利用生物信息学软件分析其序列特征,在此基础上,比较分析了"酸化-高温"胁迫条件下,中间球海胆的肠和性腺组织中SiPFK基因的相对表达及其酶活力变化情况.结果表明,SiPFK基因的cDNA全长为2787 bp,编码840个氨基酸,SiPFK蛋白理论等电点为7.48,蛋白质分子质量为92.01 kD;生物信息学分析显示,SiPFK蛋白氨基酸序列与紫球海胆(S.purpuratus)PFK氨基酸序列最为相似,相似度为96.20％;qPCR和酶活力测定结果显示,SiPFK基因的相对表达和总酶活力的组织特异性较为明显,"酸化-高温"胁迫60 d后,与对照组相比,处理组中间球海胆的肠和性腺组织中SiPFK基因的相对表达量和SiPFK酶活力均发生了改变,推测"酸化-高温"胁迫可能通过调控糖代谢关键酶活力对海胆的物质代谢过程产生影响.本研究为探究棘皮动物响应未来海洋环境变化提供重要参考依据.

    中间球海胆磷酸果糖激酶(PFK)基因克隆"酸化-高温"胁迫表达模式酶活力

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    玉米大斑病菌蛋白激酶A催化亚基StPKA-C1/C2的表达与互作蛋白筛选

    武建颖张燕孙贺贺赵玉兰...
    1976-1986页
    查看更多>>摘要：蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)是真核细胞cAMP信号转导途径的核心元件,通过磷酸化多种活性蛋白调节丝状真菌的生长、发育及致病等生理过程.为明确玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)PKA可能的互作蛋白,进一步解析其作用的分子机制,本研究以玉米大斑病菌cDNA作为模板,扩增StPKA-C1/2基因编码区的完整序列,构建pGS21T-StPKA-C1/2原核表达重组载体.利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统以异丙基β-D-硫代腺苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)作为诱导物诱导表达并通过亲和层析法纯化获得融合蛋白GST-StPKA-C1/2.通过GST pull-down实验筛选玉米大斑病菌中与StPKA-C1/C2有互作关系的蛋白质,利用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对所得蛋白质进行分析.结果表明,与StPKA-C1/2互作的蛋白中已有功能注释的蛋白包括催化活性蛋白、酶调节活性蛋白、运输活性蛋白、电子载体蛋白、分子伴侣蛋白、结构分子蛋白及代谢酶等.Venn分析发现,与StPKA-C1与StPKA-C2共有互作蛋白52个,仅与StPKA-C1互作的蛋白有17个,仅与StPKA-C2互作的蛋白有18个.其中,靶蛋白SETTUDRAFT_168881作为延伸因子(elongation factor G,EFG)家族中的一员,可能调控菌丝生长.靶蛋白SETTUDRAF_37808属于丝束蛋白(Fimbrin)家族,可能参与调控肌动蛋白细胞骨架、氧化应激反应和形态发生,推测StPKA-C1/2通过与这些靶蛋白相互作用发挥重要生物学功能.本研究初步明确了玉米大斑病菌StPKA-C1/2的潜在互作蛋白,为进一步解析玉米大斑病菌PKA调控病菌致病性的分子机制提供了理论基础.

    玉米大斑病菌蛋白激酶A(PKA)原核表达GSTpull-down互作蛋白

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    基于基因缺失减毒单增李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗性疫苗效果评估

    汪枫婷孙静刘晨程茵...
    1987-1996页
    查看更多>>摘要：减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗.缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略.基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB(简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特菌肿瘤免疫治疗疫苗载体.本研究旨在ΔAB基础上,利用肿瘤相关抗原与重要毒力因子融合表达的创新手段,构建一种能高效表达和递呈宫颈癌相关抗原E7的肿瘤疫苗载体(ΔAB-E7),以肿瘤生物学方法评估ΔAB-E7在小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型中的免疫治疗效果.本研究利用细菌分子遗传操作技术构建ΔAB,在ΔAB基础上构建李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO)和肿瘤抗原E7融合表达的ΔAB-E7;通过Western blot验证ΔAB-E7菌株中的E7抗原能否与LLO融合表达;利用细菌体外培养以及吞噬细胞内增殖实验研究体外生长能力,细胞内复制和增殖能力;通过小鼠脏器内细菌增殖实验评估ΔAB及ΔAB-E7在小鼠体内的增殖能力;构建小鼠宫颈癌模型,通过记录肿瘤模型在小鼠体内的生长趋势评价ΔAB-E7的免疫治疗效果.结果显示,ΔAB-E7菌株的E7抗原能与LLO融合表达并正常分泌;ΔAB及ΔAB-E7菌株在体外生长能力与野生型无显著差异,并且在吞噬细胞中保持稳定的增殖能力;ΔAB及ΔAB-E7感染小鼠后致病力显著下降,在小鼠脏器中的增殖能力显著降低,表明其毒力减弱,在小鼠感染模型中具有安全性;在小鼠宫颈癌模型中,ΔAB-E7免疫治疗组小鼠肿瘤的生长趋势明显较对照组更慢,表明ΔAB-E7抑制肿瘤生长,展现了良好的免疫治疗效果.本研究制备了一种基于减毒李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗载体疫苗,为人类宫颈癌及其他恶性肿瘤的免疫治疗提供技术支持.

    减毒单增李斯特菌宫颈癌免疫疗法疫苗载体ΔAB-E7

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    一株高效好氧反硝化菌DS2的分离鉴定及脱氮特性

    王贺衣萌萌王淼高风英...
    1997-2008页
    查看更多>>摘要：养殖水体中过量的氮元素会引起养殖环境恶化并严重影响养殖效益,生物脱氮是处理养殖水体氮污染的经济有效方法之一.为了获得高效的好氧反硝化菌,本研究以循环水养殖系统生物滤池填料为材料,分离获得1株高效好氧反硝化菌DS2(GenBank No.PRJNA838789),经16S rRNA基因序列分析,结合生理生化特性鉴定,确定菌株DS2为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).采用单因素实验、脱氮实验和全基因组测序技术,研究菌株DS2的最佳生长条件、脱氮性能和脱氮机制.结果表明,菌株DS2在30℃、pH 7、250 r/min和盐度为10‰～20‰条件下生长状况最好;在异养硝化培养基(heterotrophic nitrification medium,HNM)、短程反硝化培养基(short-cut denitrification medium,SDM)、反硝化培养基(denitrification medium,DM)和同步硝化-反硝化培养基(simultaneous nitrification and denitrification medium,SNDM)中培养24 h后,总氮去除率分别为93.50％、55.60％、65.98％和90.10％;此外,菌株DS2基因组中存在narB、nirK、nirA、norB和nirB等与氮代谢相关的功能基因.最后,在实际养殖废水处理实验中,菌株DS2在12 h获得99.72％的硝酸氮去除率和89.52％的总氮去除率.本研究结果表明,恶臭假单胞菌DS2是一株高效的好氧反硝化菌,在养殖废水处理方面具有良好的应用前景.

    恶臭假单胞菌生物脱氮好氧反硝化全基因组

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    内质网应激与氧化应激

    张雨欣周小杰于浩然董婉玉...
    2009-2024页
    查看更多>>摘要：内质网是蛋白折叠的重要场所,对细胞稳态的变化十分敏感.蛋白折叠的环境发生变化会导致未折叠或错误折叠蛋白的聚集并影响细胞内信号通路,如Ca2+,氧化还原,炎症,凋亡等.当内质网发生应激,未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通过一系列适应性反应来缓解蛋白错误折叠并恢复细胞稳态,如果不能重塑稳态,则会诱导凋亡.活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生被证实与内质网应激和未折叠蛋白反应有着密切的联系.ROS具有一定的毒性但也能作为信使分子介导生理过程.细胞质和不同的细胞器包括内质网和线粒体都会产生ROS.内质网中氧化还原状态的改变能够引起内质网应激,而内质网应激又能在内质网和线粒体诱导产生ROS.持续的氧化应激和内质网应激会启动凋亡程序.这些细胞反应在病毒感染中发挥了重要的作用.本文对内质网应激和氧化应激发生的机制、在诱导细胞凋亡中的相互联系、以及在动物病毒感染中发挥的作用进行了综述和展望.

    内质网应激(ERS)未折叠蛋白反应(UPR)氧化应激活性氧(ROS)凋亡病毒感染

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    去泛素化修饰在病毒侵染中的作用研究进展

    赵添羽韩成贵
    2025-2035页
    查看更多>>摘要：去泛素化修饰是泛素化修饰的逆进程,通过去泛素化酶(deubiquitinase,DUB)去除底物的泛素化修饰,进而调控各种生命进程.近年来,越来越多的报道表明去泛素化修饰能够调控病毒的侵染.本文从DUB的类型、作用特点、在体内的调控作用和在病毒侵染中的作用四个方面,综述了当前关于去泛素化修饰在植物病毒和动物病毒侵染中作用的研究进展,并就进一步深入研究去泛素化修饰在病毒侵染中的作用提出了对策建议.

    去泛素化修饰去泛素化酶(DUB)病毒侵染调控作用

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    超表达CD163的猪诱导性多能干细胞系构建

    岳威张炬庆杨昕淳吴晓龙...
    2036-2044页
    查看更多>>摘要：CD163作为清道夫受体蛋白,是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的最重要细胞受体.诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是将外源转录因子导入体细胞后,经重编程获得的具有胚胎干细胞生物学特性的多能干细胞.本研究首先通过慢病毒载体系统将猪(Sus scrofa)源CD163基因转导入猪iPSCs(piPSCs),建立稳定表达CD163的诱导性多能干细胞系,将其命名为CD163OE-piPSC.病毒侵染实验证实,该细胞株对PRRSV高度易感.碱性磷酸酶染色和细胞群体倍增时间检测及5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)细胞增殖检测证实,CD163基因过表达不影响iPSCs的多能性与增殖能力.本研究获得的细胞株可有效应用于PPRSV与宿主互作的致病机理研究及病毒性疾病的靶标分子筛选.

    基因编辑猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导性多能干细胞(iPSCs)CD163

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    茄匍柄霉LAMP快速检测体系的建立及应用

    谢学文刘世程石延霞张胜丰...
    2045-2052页
    查看更多>>摘要：匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌,可侵染多种作物.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点,在病原菌检测领域有广泛应用.本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehy-drogenase,gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP,2条外引物F3/B3,环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增,同时通过环引物加速反应,建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系.特异性验证结果显示,仅16株茄匍柄霉有阳性扩增,具有较高的特异性.灵敏度检测结果显示,该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL,显著高于普通PCR检测技术.环引物加速LAMP反应结果表明,加入环引物能使反应时间缩短至27 min,可有效加速LAMP反应.通过钙黄绿素进行显色反应,在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色,其余反应液均为橙色.采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化,接种病原菌12 h时,该体系即有阳性显色反应,接种后颜色随时间推移逐渐加深,与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同.该反应结果不借助其他仪器即可观察,环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min,能够快速、准确反应病原菌含量.该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势,可用于病害潜伏、未显症期的快速检测,对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义.

    茄匍柄霉环介导等温扩增(LAMP)快速分子检测

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    兔出血症病毒2型VP60蛋白特异性单克隆抗体的制备

    曾红梅庞雪晴唐诗杨泽晓...
    2053-2060页
    查看更多>>摘要：兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)又称兔瘟,是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)感染引起的兔(Oryctolagus cuniculus)急性出血性传染病.为制备RHDV2的特异性单克隆抗体(McAb),进而探索其与经典兔瘟病毒(RHDV)鉴别诊断技术,本研究原核表达纯化RHDV2 VP60蛋白(pET-32a-R2VP60蛋白)和RHDV VP60蛋白(pET-32a-R1VP60蛋白),以pET-32a-R2VP60蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),并分别以pET-32a-R1VP60蛋白与pET-32a-R2VP60蛋白为包被原建立特异性的RHDV2单克隆抗体筛选间接ELISA方法,采用常规杂交瘤细胞融合技术,通过克隆、亚克隆、腹水制备、效价测定、Western blot分析、血凝-血凝抑制试验以及亚型鉴定成功筛选出一株抗RHDV2的杂交瘤细胞株,命名为2A1.结果显示,2A1融合细胞的染色体约为100条,分泌IgG3亚型McAb,轻链为Kappa亚型;杂交瘤2A1的抗体分泌稳定,腹水纯化McAb效价高,特异性良好,其间接ELISA效价高达1:128000.Western blot分析显示McAb 2A1仅与RHDV2病毒粒子和pET-32a-R2VP60蛋白反应,与RHDV1病毒粒子和pET-32a-R1VP60蛋白反应阴性.血凝(hemagglutination,HA)与血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)实验表明2A1纯化McAb可有效抑制RHDV2的血凝作用,HI效价高达10log2.本研究制备的RHDV2特异性McAb 2A1,为RHDV2特异快速的血清学诊断方法建立和试剂盒研发提供了科学材料.

    兔出血症病毒2(RHDV2)VP60蛋白单克隆抗体Westernblot

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