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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    瓦氏雅罗鱼Commd9基因的克隆及其在碱度胁迫下的表达分析

    罗亮常玉梅孙博张立民...
    1771-1782页
    查看更多>>摘要：铜转运Murr1结构域(copper metabolism Murr1 domain,COMMD)蛋白家族在生物体中广泛存在,参与机体核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性调节、钠转运、铜代谢以及缺氧的适应性调节等生物学过程.为研究Commd9在碱度胁迫下的作用,本研究采用cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术,首次对具有耐高碱特性的瓦氏雅罗鱼(Leuciscus waleckii)Commd9基因cDNA全长进行了克隆,命名为LwCommd9基因(GenBank No.MT013199).该序列全长为938 bp,5'和3'非编码区分别为5和339 bp,开放阅读框为594 bp,编码蛋白含197个氨基酸,预测分子量为21.79 kD,理论等电点为5.63.系统发育分析显示,瓦氏雅罗鱼COMMD9氨基酸序列与鲤科鱼类的相似性较高,其中与鱇浪白鱼(Anabarilius grahami)相似性高达93.37％.qPCR发现,LwCommd9基因在各组织中均有分布,在肝和肾组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05).高碳酸盐碱度胁迫下,LwCommd9基因在碱水种群瓦氏雅罗鱼肝组织中的表达量极显著下调(P<0.01),而在淡水种群瓦氏雅罗鱼肝组织中的表达量极显著上调(P<0.01),在肾组织中也有相同变化趋势.综上所述,LwCommd9基因在瓦氏雅罗鱼高碱适应过程中可能起到了关键作用,这将为后续鱼类耐高碱机制研究提供参考.

    瓦氏雅罗鱼铜转运Murr1结构域9(Commd9)基因基因表达碱度胁迫

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    转录组测序揭示棘胸蛙棘刺季节性变化的分子机制

    胡一斌蒋泽元周奕言赵晓蕊...
    1783-1796页
    查看更多>>摘要：棘胸蛙(Quasipaa spinosa)作为我国特有的经济两栖动物,兼具食用和药用价值.雄性棘胸蛙胸部的棘刺作为蛙类的性二态特征,对于提高抱对成功率有着重要意义,同时也是棘蛙类群的重要鉴别特征,对其产生和变化的分子机制研究,有助于阐明两栖动物棘蛙类群的系统进化关系.为了探究棘胸蛙棘刺季节性变化的分子机制,并挖掘棘刺形成的相关功能基因,本研究对雄性棘胸蛙繁殖期和繁殖后期胸部皮肤以及繁殖期腹部皮肤3组样本进行了高通量转录组测序,结果共获得100312条Unigenes,进行注释后发现多种角质化蛋白基因在繁殖期雄性棘胸蛙的胸部皮肤中表达量显著升高.在繁殖期与繁殖后期胸部棘刺皮肤的差异表达基因(differentially expressd genes,DEGs)中含有与细胞凋亡、细胞增殖、性激素合成等相关的基因,KEGG通路富集分析显示,多个差异表达基因富集于皮肤角质层胞间脂质代谢相关通路中.推测繁殖期角蛋白基因表达增加是棘刺形成的主要原因之一,皮肤角质层中的脂类物质合成减少以及细胞增殖减慢会促使棘刺形态变小.另外,性激素合成相关的基因在繁殖期到繁殖后期中表达减少,说明棘胸蛙棘刺的季节性变化可能受激素变化的调节.通过qPCR技术验证15个差异表达基因,结果表明转录组结果可靠.本研究阐明了棘胸蛙棘刺形成和季节性变化的分子机制,研究结果为棘蛙类群分类提供依据,相关候选基因和代谢通路为其他脊椎动物皮肤衍生物的季节性变化和性二态特征的分子机制研究提供参考.

    棘胸蛙棘刺转录组测序差异表达基因

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    GST-pull Down和免疫共沉淀联合质谱鉴定埃及伊蚊中肠的Cry4Ba和Cry11Aa互作蛋白

    王焌翔杨小祯何欢张灵玲...
    1797-1809页
    查看更多>>摘要：晶体蛋白(crystal protein,Cry)毒素是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的主要杀虫蛋白,其中Cry4Ba和Cry11Aa对埃及伊蚊(Aedes aegypti)幼虫具有特异的毒杀活性.Cry毒素作用于昆虫肠道上皮细胞需要细胞膜受体的介导,而昆虫肠道的免疫应答因子通过识别Cry毒素,进而驱动免疫系统抵御毒素的侵染.为了系统探究Cry4Ba和Cry11Aa毒素与埃及伊蚊的分子互作机制,本研究通过制备GST-Cry4Ba和GST-Cry11Aa融合蛋白,提取Cry4Ba和Cry11Aa晶体蛋白,利用GST-pull down和免疫共沉淀技术挖掘埃及伊蚊中肠刷状缘膜泡囊蛋白中与Cry4Ba和Cry11Aa互作的结合蛋白.通过液相色谱串联质谱鉴定和数据库比对,发现133个与Cry4Ba互作蛋白和237个与Cry11Aa互作蛋白.通过生物信息学分析,从中筛选到16个膜结合或跨膜蛋白,包括5个氨肽酶N、1个碱性磷酸酶、1个钙黏蛋白、2个α-淀粉酶、1个B型清道夫受体、2个电压依赖性阴离子通道以及4个肌动蛋白.此外,筛选到7个与免疫或维持细胞稳态相关蛋白,包括1个肽聚糖识别蛋白、1个载脂蛋白、1个血粘蛋白、1个丝氨酸蛋白酶抑制剂以及3个热激蛋白.本研究为后续埃及伊蚊Bt受体的功能验证以及免疫应答机制的研究提供必要的靶标参考.

    苏云金芽胞杆菌埃及伊蚊GST-pulldown免疫共沉淀Cry互作蛋白

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    植物病原真菌RNA甲基转移酶的筛选与分析

    贾明轩周贺王茂存孙菡笛...
    1810-1822页
    查看更多>>摘要：RNA甲基化是最主要的RNA修饰方式,而N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是真核生物mRNA最常见的一种转录后修饰,在生物生长发育过程中发挥重要的调控作用.作为RNA甲基化修饰的重要蛋白,RNA甲基转移酶在植物病原真菌中的功能尚未见报道.本研究利用生物信息学方法,对植物病原真菌RNA甲基转移酶的结构及功能进行了初步探究.结果表明,在106种植物病原真菌中,共鉴定到159个RNA甲基转移酶基因,通过理化性质分析可知,159个植物病原真菌RNA甲基转移酶编码氨基酸的平均长度约为470 aa(变化范围:179～1206 aa),平均相对分子量约为52.64 kD(变化范围:20.04～134.35 kD),平均等电点约为7.26(变化范围:4.90～10.28).植物病原真菌RNA甲基转移酶的进化关系较为保守,相同门的植物病原真菌RNA甲基转移酶大体聚集在同一进化枝,且同一进化枝中蛋白保守基序的相似性较高.利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法对玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)中编码RNA甲基转移酶(S.turcica RNA methyltransferases 1,StMETTL1)的基因在病菌不同发育时期的表达量进行分析发现,StMETTL1在侵染钉时期的表达量显著升高(P<0.05),推测StMETTL1可能在玉米大斑病菌侵染宿主过程中发挥了重要的作用.本研究为进一步了解m6A在植物病原真菌中的作用提供了数据支持.

    植物病原真菌mRNA甲基化RNA甲基转移酶生物信息学分析

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    鸭源鸡杆菌tolC基因序列特征分析、原核表达及免疫原性分析

    史姿聪刘盼盼王新卫翟雪滢...
    1823-1833页
    查看更多>>摘要：tolC基因广泛存在于革兰氏阴性菌中,其表达的TolC蛋白(TolC family protein,TolC)是一种外膜通道蛋白,介导多种不同类型化合物的胞外转运过程,在细菌的生物学功能中发挥着重要作用.解析鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)tolC基因特征及TolC蛋白的特性对于该病防控具有重要意义.为研究鸭源鸡杆菌tolC基因及其编码蛋白的结构特征和其作为抗原的潜能,本研究对28株鸭源鸡杆菌分离株tolC基因序列进行测定及系统发育分析;以PDS-RZ-1-SLG菌株为研究对象,利用生物信息学方法对TolC蛋白的理化性质及结构进行预测,并进行克隆、表达及抗原特性分析.结果表明,tolC基因在鸭源鸡杆菌中国分离株中普遍存在,全长1371 bp,核苷酸序列高度保守,同源性为92.1％～100％,与鸡杆菌复合群(Gallibacterium genomosp)1和2亲缘关系最近;TolC蛋白由456个氨基酸编码,理论分子质量为51.1 kD,是一个稳定的、亲水的α型分泌性膜蛋白,无跨膜结构域,但有1个信号肽序列和10个主要B细胞表位.SDS-PAGE和Western blot结果表明获得了约45 kD的重组蛋白,且该重组蛋白与鸭源鸡杆菌阳性血清可发生特异性反应,且能与TolC多克隆抗体兔血清发生特异性结合,证实了TolC的反应原性与免疫原性.本研究为进一步研究TolC蛋白生物功能提供基础信息,同时为鸭源鸡杆菌新型疫苗的开发提供理论依据.

    鸭源鸡杆菌TolC蛋白生物信息学分析原核表达免疫原性

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    基因编辑在家禽转基因研究中的应用进展

    张宛玉郑喜邦
    1834-1844页
    查看更多>>摘要：家禽是重要的模式生物,在农业和生物医学研究领域发挥重要作用.近年来基因编辑工具TALEN和CRISPR/Cas9在家禽转基因领域得以成功应用.这些基因编辑技术可望用于提高家禽生产性能、研究病毒与受体之间的相互作用、研发病毒载体疫苗、改善动物福利、改善禽蛋消费的安全性、在卵白中生产药用蛋白和抗体等.本文综述了家禽基因编辑的途径及CRISPR/Cas9在家禽生产与育种以及基础研究领域的应用现状,并展望了未来家禽基因编辑的应用前景.本综述对利用基因编辑手段提高家禽生产性能和预防禽类病毒性疾病具有指导意义.

    家禽基因编辑CRISPR/Cas9TALEN原始生殖细胞(PGCs)

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    侵染西番莲的三种马铃薯Y病毒属病毒的广谱单克隆抗体制备及检测应用

    李雪李晋海王兰花戚朵...
    1845-1854页
    查看更多>>摘要：马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TelMV)、东亚西番莲病毒(East Asian passiflora virus,EAPV)和西番莲重型斑驳相关病毒(Passion fruit severe mottle-associated virus,PFSMaV)严重危害我国西番莲(Passiflora edulis)产业.迄今植物病毒没有有效的防治药剂,而病毒检测技术是植物病毒防控手段建立的关键.本研究利用田间采集的TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒复合侵染的西番莲,从病叶提纯病毒粒子,以混合病毒粒子作为BALB/c小鼠(Mus musculus)的免疫原,通过杂交瘤技术获得能特异、广谱检测这3种病毒的单克隆抗体.Western blot检测发现,研制的4株单克隆抗体能同时识别TelMV、EAPV和PFSMaV的衣壳蛋白.进一步以制备的病毒单抗为检测抗体,建立用于快速检测这3种病毒的血清学检测方法,即斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA).特异性和广谱性测定结果表明,建立的2种血清学方法均能简单快速、特异灵敏、广谱高效地检测西番莲中的TelMV、EAPV和PFSMaV,而检测感染同属的李痘病毒(Plumpox virus,PPV)、马铃薯Y病毒(Potato Virus Y,PVY)、马铃薯A病毒(Potato Virus A,PVA)和芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)病叶、感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和西番莲潜隐病毒(Passiflora latent virus,PLV)的病叶及健康西番莲叶片均呈阴性反应.灵敏度测定结果表明,Dot-ELISA方法检测病叶粗提液的灵敏度高达1:20480(W/V,g/mL)倍稀释,即绝对检出量为0.0976 ng感病植物组织.田间样品的检测结果表明,建立的2种血清学方法能准确、广谱、灵敏地用于检测侵染西番莲的3种马铃薯Y病毒属病毒,其结果与RT-PCR的符合率达到100％.本研究为TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒的检测诊断、无毒种子种苗生产及其科学防控提供技术支持.

    马铃薯Y病毒属夜来香花叶病毒(TelMV)东亚西番莲病毒(EAPV)西番莲重型斑驳相关病毒(PFSMaV)单克隆抗体斑点ELISA(Dot-ELISA)组织印迹ELISA(Tissueprint-ELISA)

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