查看更多>>摘要：目的 为探讨陈皮在异功散治疗慢性病贫血(ACD)中的作用,通过网络药理学分析异功散中陈皮与四君子汤活性成分治疗ACD的不同作用靶点及信号通路,并进行动物实验明确陈皮活性成分在异功散治疗ACD中的作用机制.方法 ①网络药理学研究:基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、本草组鉴数据库(HERB)、草药成分目录平台(HIT)获取异功散方的组分,符合口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18,或经瑞士生物信息研究所药代动力学(SwissADME)数据库筛选,符合吸收、分布、代谢和排泄标准的为最终获取的异功散活性成分.通过TCMSP、化合物靶点预测(Swisstarget prediction)数据库获得活性成分的作用靶点.再通过人类基因综合数据库(Genecards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、疾病相关基因与突变位点数据库(DisGeNETt)获取ACD的疾病靶点.借助韦恩(Venny)2.1在线平台获得药物靶点和疾病靶点的交集,运用蛋白互作关系数据库平台(STRING)和Cytoscape v3.9.1软件构建蛋白质网络,通过Cytoscape中MCC算法筛选前30位的核心靶点,核心靶点经京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行信号通路富集分析.最终通过Cytoscape构建"异功散活性成分-ACD-靶点"网络和"核心靶点-信号通路"网络.②分子对接验证:比较陈皮区别于异功散方中其他活性成分的作用靶点,进行分子对接验证.③动物实验验证:建立ACD小鼠模型,进行药物干预,干预1周后检测比较各组白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血清铁蛋白(SF)、血清铁(SI)水平,苏木精-伊红(HE)染色脾组织观察病理学变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测脾组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK/MEK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(1/2)/细胞外信号调节激酶(1/2)[p-ERK(1/2)/ERK(1/2)]、磷酸化逆转录病毒癌蛋白网状内皮增生病毒癌基因同源物A/逆转录病毒癌蛋白网状内皮增生病毒癌基因同源物A(p-P65/P65)蛋白表达,验证陈皮活性成分对ACD的治疗作用及机制.结果 ①网络药理学分析结果显示,异功散活性成分为135种,作用于1 006个靶点,ACD疾病靶点1 474个,与异功散活性成分共同靶点为235个,计算筛选前30位核心靶点,构建得到"异功散活性成分-ACD-核心靶点"网络和"核心靶点-信号通路"网络,发现陈皮的活性成分柚皮素及其作用靶点丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)及其作用的丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(1/2)-核因子-κB[MEK-ERK(1/2)-NF-κB]通路可能在异功散治疗ACD中发挥重要作用.②动物实验结果表明,与模型组比较,柚皮素组小鼠的外周血WBC、SF明显降低(P<0.05),Hb、RBC、SI明显升高(P<0.05);Western blot检测显示,柚皮素组脾组织p-MEK/MEK、p-ERK(1/2)/ERK(1/2)、p-P65/P65表达均明显下降(P<0.05);HE染色结果提示,柚皮素组脾组织坏死区域、中性粒细胞浸润明显减少.结论 在异功散方中,陈皮的有效成分柚皮素通过减少MAPK3蛋白活化来下调MEK-ERK(1/2)-NF-κB通路,降低ACD小鼠炎症状态,恢复RBC稳态,调节铁代谢,改善贫血.
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