查看更多>>摘要:目的 研究淋巴细胞激活基因3(Lymphocyte activation gene 3,LAG3)对多房棘球蚴慢性感染小鼠CD8-T细胞免疫功能的调节作用.方法 取C57BL/6野生型(Wild-type,WT)和LAG3缺陷型(Knock-out,KO)小鼠各10只,每只小鼠经肝门静脉接种3 000个多房棘球蚴原头节建立多房棘球蚴感染模型.感染12周后,分别取两组小鼠肝脏和脾脏组织,采用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝脏病灶周围炎性细胞浸润和病理表现,通过免疫组织化学观察肝脏病灶周围"炎症微环境"与脾脏中CD8+T的比例.收集两组小鼠肝脏与脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术筛选不同CD8+T细胞亚群,检测CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞(Ef-fector memory CD8+T cell,CD8+Tem)、中心记忆 CD8+T 细胞(Central memory CD8+T cell,CD8+Tcm)、初始CD8+T细胞(Naive CD8+T cell,CD8+Tn)比例与绝对数,以及分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素17A(IL-17A)的比例.通过多房棘球蚴虫体蛋白体外刺激两组小鼠肝脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测CD8+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-17A的比例.结果 HE染色结果显示,与野生型小鼠比较,LAG3缺陷型小鼠肝脏形成的炎性病灶数量增多,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学结果显示,与野生型小鼠比较,LAG3缺陷型小鼠肝脏病灶周围CD8+T细胞募集升高,差异有统计学意义(P<0.05);LAG3缺陷型小鼠脾脏CD8+T细胞募集有降低的趋势,差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示,与野生型小鼠比较,LAG3缺陷型小鼠肝脏效应记忆型CD8+T细胞比例有升高的趋势,差异无统计学意义(P>0.05);脾脏CD8+T细胞比例降低,脾脏CD8+Tem表型比例升高,差异均有统计学意义(P<0.01).LAG3缺陷型小鼠肝脏和脾脏CD8+T细胞分泌TNF-α和IL-10能力均增强,差异均有统计学意义(P<0.05).多房棘球蚴的虫体蛋白体外刺激肝脏淋巴细胞实验结果显示,与野生型小鼠比较,LAG3缺陷型小鼠CD8+T细胞分泌IFN-γ、IL-10比例升高,差异均有统计学意义(P<0.05);LAG3缺陷型小鼠CD8+T细胞分泌IL-17A的能力有升高趋势(P>0.05).结论 在小鼠多房棘球蚴慢性感染中,LAG3可抑制肝脏和脾脏CD8+T细胞免疫应答能力,调节炎症反应.