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畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会
畜牧兽医学报

中国畜牧兽医学会

文杰

月刊

0366-6964

xmsyxb@263.net

010-62815987 62816996 62893836

100193

北京海淀区圆明园西路2号

畜牧兽医学报/Journal Acta Veterinaria Et Zootechnica SinicaCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是中国畜牧兽医学会主办，《畜牧兽医学报》编委会、中国农业科学院畜牧研究所编辑出版的全国性的畜牧兽医学术刊物。创刊于1956年7月，刊登较高水平的学术论文和企业研究报告以及对生产实践具指导性、启发性的文章。为全国中文核心期刊、中国自然科学核心期刊，并被国内外重要引文数据库及文摘性期刊收录。主要栏目包括畜牧和兽医两大学科。
正式出版
收录年代

    KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响

    韩杰熊显荣熊燕吴锦波...
    2433-2442页
    查看更多>>摘要：旨在探讨KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响.本研究在体外成熟液中添加不同浓度的KDM1A特异性抑制剂GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养过程中卵母细胞内KDM1A的表达模式;采用实时荧光定量PCR检测体外培养卵母细胞内Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表达水平;体外培养成熟后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察其卵裂率与囊胚形成率.结果 显示,体外培养24 h后,GSK-KDM 1A组的卵丘细胞扩展程度显著低于对照组(P＜0.05),而320 nmol·L-1组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率均显著低于160 nmol·L-1组(P＜0.05).在卵母细胞体外成熟过程中,Kdm1a呈现动态表达模式,MⅠ期的表达水平显著低于GV和MⅡ期(P＜0.05);添加GSK-KDM 1A能显著抑制卵母细胞中KDM1A蛋白的表达(P＜0.05),320nmol·L-1组各时间点KDM1A的表达量均显著低于160nmol·L-1组(P＜0.05).GSK-KDM1A组卵母细胞内Oct-4与Sox-2的表达水平显著高于对照组(P＜0.05),但Nanog的表达水平无显著差异(P＞0.05).牦牛卵母细胞体外成熟后,GSK-KDM1A组的卵裂率显著低于对照组(P＜0.05),但囊胚形成率无显著变化(P＞0.05).综上表明,KDM1A参与调控牦牛卵母细胞减数分裂成熟过程,GSK-KDM1A能有效抑制KDM1A的表达,影响卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能,揭示KDM 1A在此过程中扮演重要角色.

    牦牛卵母细胞KDM1A成熟发育

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    兔原始生殖细胞体外培养的研究

    吕海淼朱邯豫彭展闫琛博...
    2443-2452页
    查看更多>>摘要：旨在探索兔原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)体外分离培养的最佳条件,从而建立成熟稳定的兔PGCs体外分离培养方法.本研究首先通过两种不同的体外分离法(胰酶消化法、机械法)和3种不同的传代法(胰酶消化法、机械法、连同饲养层消化法)探索第14～18天胎兔的PGCs体外分离传代的最佳方式,另将培养液分为A、B、C、D4组,以D组为对照组,探究不同细胞因子浓度对兔PGCs形态变化及集落形成的影响.其次,利用碱性磷酸酶染色(alkaline phosphatase staining,AKP)法对兔PGCs进行鉴定染色;实时荧光定量(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测转录因子Oct-4的表达.结果 表明,机械法分离得到的兔PGCs集落数量是酶消化法分离的2.2倍,而兔PGCs经不同的消化法传代发现,酶消化法、连同饲养层消化法、机械法在兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)饲养层上分别成功传至P2、P2、P4代.B组PGCs培养液(基础液+10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)+2 ng· mL-1转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)+4 ng·mL-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)+ 10 ng·mL-1白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF))所获得的集落数量最多,具有较好的集落形态,保持未分化的时间较长.AKP染色结果显示,PGCs集落呈红黑色;RT-PCR结果显示,体外分离培养的兔PGCs表达转录因子Oct-4.结果 显示,兔原代PGCs最适采用机械分离法和机械传代法进行体外分离传代,适宜浓度的细胞因子添加至兔PGCs培养液中有利于兔PGCs在体外保持较多的集落数量和较长时间的未分化状态.本研究通过筛选和优化兔PGCs体外培养方法,为进一步建立稳定成熟兔PGCs细胞系奠定技术基础.

    兔原始生殖细胞分离方法传代方法细胞因子

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    低水平聚天门冬氨酸锌对生长猪生长性能、血液指标、组织器官锌沉积及锌排放的影响

    芦春莲安亚辉孟宪华闫恒普...
    2453-2462页
    查看更多>>摘要：本试验旨在通过研究聚天门冬氨酸锌(PASP)对生长猪的生长性能、营养物质表观消化率、血清指标、组织器官锌沉积及锌排放的影响,探讨聚天门冬氨酸锌对硫酸锌的替代效果.试验选用体重相近[(31.73±3.50) kg]的(杜×长×大)三元杂交猪90头,随机分为3组,每组6个重复,每个重复5头猪.对照组锌水平及锌源为80 mg·kg-1一水硫酸锌(ZnSO4·H2O),试验Ⅰ组与Ⅱ组锌水平及锌源分别为60与40 mg·kg-1聚天门冬氨酸锌;试验预试期7d,正试期30 d.结果 表明:1)试验组与对照组平均日增重、料重比及腹泻率均无显著差异(P＞0.05).2)试验Ⅰ组和Ⅱ组钙(Ca)消化率显著高于对照组(P＜0.05),粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、粗纤维(CF)、粗灰分(Ash)及磷(P)表观消化率在各组间无显著差异(P＞0.05),试验Ⅰ组锌表观消化率显著高于对照组和试验Ⅱ组(P＜0.05).3)试验Ⅰ组和Ⅱ组粪锌水平分别比对照组降低了21.65％和30.87％,差异显著(P＜0.01).4)对照组血清中谷丙转氨酶(ALT)活性显著高于试验Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05),试验Ⅰ组球蛋白(GLB)水平显著高于对照组和试验Ⅱ组(P＜0.05),血糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)及碱性磷酸酶(AKP)等指标在各组间差异不显著(P＞0.05).5)各组间肝、肾、胰、脾、骨骼、毛发、背最长肌中锌的沉积量均无显著差异(P＞0.05),试验Ⅰ组和Ⅱ组血清锌浓度显著高于对照组(P＜0.05).综上所述,本试验条件下,饲粮中添加40 mg·kg-1聚天门冬氨酸锌即可满足该阶段猪的生长需要,并显著降低粪中锌的含量,进而证明聚天门冬氨酸锌在生长猪饲粮中可替代高剂量硫酸锌且有一定的减排作用.

    聚天门冬氨酸锌生长性能粪锌营养物质表观消化率血液指标组织器官锌沉积减排

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    1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析

    程增青范根成窦小龙刘红祥...
    2463-2471页
    查看更多>>摘要：旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析.本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究.结果 显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100％;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株.该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达107.5TCID50·0.1 mL-1.动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100％ (10/10)表现出发病症状.以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL-1.将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性.本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考.

    Ⅰ群禽腺病毒鉴定Fiber-2蛋白亚单位疫苗

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    非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用

    周晓慧肖景景张鑫宇张泉...
    2472-2480页
    查看更多>>摘要：旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件下进行融合蛋白纯化,利用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定,利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法,与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测.结果 显示,ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC条件为28℃和1.5 mol·L-1 NaCl,在0.2％ Triton X-100存在下进行ITC,纯化的融合蛋白纯度为76.3％;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7％,能被ASFV抗体识别;根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品,用重组CD2v抗原ELISA进行检测,结果显示,15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性,15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性.这些研究结果表明,ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位,其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测.

    非洲猪瘟病毒CD2v蛋白强免疫原性抗原初步应用

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    口蹄疫灭活疫苗的免疫效果及其对鉴别诊断的干扰

    孙普何伟付元芳李冬...
    2481-2489页
    查看更多>>摘要：灭活疫苗免疫是防控口蹄疫的重要措施,但是灭活疫苗的免疫效果及其对感染与免疫鉴别诊断的干扰一直是口蹄疫免疫无疫区建设评估需要明确的重要问题.本研究中选择了3个企业(代号A、B与C)的4组口蹄疫O型与A型二价灭活疫苗,分别免疫口蹄疫抗体阴性健康未成年牛,免疫3～4次,测定免疫前后结构蛋白和非结构蛋白抗体的应答水平.结果 显示:(1)结构蛋白抗体合格率:a1组(A企业多批次疫苗)4次免疫后O型和A型均为100％;a2组(A企业同批次疫苗)一～三免O型为36.7％、98.3％与100％,A型为15％、86.7％与100％;b组(B企业疫苗)一～三免O型为18.3％、97％与100％,A型为1.7％、45％与53.3％;c组(C企业疫苗)一～三免O型为26.7％、96.7与100％,A型为21.7％、71.7与100％.(2)非结构蛋白3ABC抗体阳性率(两种方法复核结果):a1组一～四免分别为0.7％、1.4％、9.5％与4.8％;a2组和c组三次免疫均未检测到阳性;b组仅三免后阳性率为0.6％.3组灭活疫苗首次免疫牛的抗体合格率远不及70％,但加强免疫后抗体合格率均显著提高;非结构蛋白抗体检测结果表明有3组疫苗的抗原纯净度符合OIE的要求,但a1组灭活疫苗免疫后,仍然对感染与免疫鉴别诊断存在干扰;采用两种非结构蛋白抗体检测方法进行复核检验,可以提高感染与免疫鉴别诊断的准确性.本研究为口蹄疫免疫无疫评价方案的制定提供了科学依据.

    口蹄疫灭活疫苗免疫效果抗原纯净度鉴别诊断

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    区分犬瘟热病毒Asia-Ⅰ型野毒株及疫苗株的AS-PCR方法

    张雪婷陈峥嵘赵雯雯韩丽...
    2490-2499页
    查看更多>>摘要：犬瘟热是一种接触性传染病,可侵害免疫系统、呼吸系统、消化系统,甚至神经系统,导致全身性的病理变化,对宠物犬、毛皮动物等存在巨大威胁.目前常用的胶体金检测法不能有效区分疫苗免疫与动物自然感染.为建立一种高效准确的鉴别犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的检测方法,本试验对从武汉地区收集已确诊犬瘟热的6只犬分离得到的野毒株以及3株广泛使用的CDV疫苗株进行全基因组测序,从氨基酸水平和碱基水平比对分析后,确定H基因为AS-PCR引物设计的靶基因.通过对H基因进行分型,发现武汉地区流行的CDV均为Asia-Ⅰ型,而疫苗株Y2为America-Ⅰ型,疫苗株Y1和Y3均为America-Ⅱ型.对比179株Asia-Ⅰ型(6株野毒株样品+173株GenBank Asia-Ⅰ型)与3株疫苗株的CDV-H基因序列,采用AS-PCR技术(3'端错配)设计出1对能有效区分犬瘟热Asia-Ⅰ型野毒株和疫苗株的特异性引物,上游引物序列为5'-TTAAATGATAATGACATAGTG-3',下游引物序列为5'-CCTGGCAAGGCAAGA-3'.结果 显示该引物有较强的特异性,6株样品野毒株均可扩增出长894 bp的片段,疫苗株不能扩增,且野毒株的H基因上存在9个较为规律的碱基(氨基酸)变异位点,而疫苗株在第277位氨基酸上均为天冬酰胺,这些变异可能导致N-糖基化位点的增加,从而对犬瘟热病毒疫苗株的毒力产生影响.本研究建立的AS-PCR方法能有效区分犬瘟热疫苗和Asia-Ⅰ型野毒株.

    犬瘟热病毒检测H基因AS-PCR

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    小反刍兽疫病毒疫苗毒株N75-1感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响

    褚云馨陈燕马雨晴曾巍...
    2500-2508页
    查看更多>>摘要：淋巴细胞信号活化分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体.本研究旨在探索PPRV感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响.通过荧光定量PCR法、流式细胞术和Western blot技术检测PPRV疫苗毒株N75-1感染山羊外周血单核细胞(PBMCs)源外泌体(Exo-PPRV)共育对接纳细胞(正常山羊PBMCs)中SLAM表达水平和细胞因子分泌水平的影响.结果 表明,与正常细胞分泌外泌体(Exo-Mock)共育组相比,Exo-PPRV共培养组细胞SLAM mRNA和细胞表面表达水平均显著上调(P＜0.05),TNF-α、IL-10和IFN-y表达水平升高,而IFN-α水平降低(P＜0.05).进一步研究表明,Exo-PPRV中荷载高水平的PPRV H蛋白且可以将其传递至接纳细胞中,同时pcDNA3.1-H转染组中SLAM表达水平较pcDNA3.1对照转染组和未转染组明显升高.以上结果表明,PPRV感染PBMCs源外泌体对接纳细胞中SLAM表达水平具有显著正调控作用,外泌体中载荷高水平PPRV H蛋白是其调控接纳细胞SLAM表达的关键分子之一.

    外泌体小反刍兽疫病毒山羊PBMCs淋巴细胞信号活化分子

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    重组结核分枝杆菌CFP10蛋白对A549细胞TLR信号途径介导的炎症反应的影响

    徐兆坤王健宏李武王玉炯...
    2509-2517页
    查看更多>>摘要：本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白(culture filtrate protein 10,CFP10)对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体(TLRs)信号途径及其介导的炎症反应的影响.PCR扩增cfp10目的基因片段,构建重组质粒载体pCzn1-CFP10.将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21 (DE3)大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白CFP10 (rCFP10)并鉴定,纯化rCFP10,去除内毒素及脱盐备用.设置对照组,利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响;通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术,分别在转录和翻译水平检测rC FP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响.结果 显示,成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10.MTT结果显示,随着rCFP10浓度增加和处理时间延长,A549细胞存活率显著降低.与空白对照组相比,rCFP10分别从转录和翻译水平显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平.rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据.

    重组CFP10蛋白A549细胞TLRs信号途径炎症因子

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    新疆部分地区牛羊源产志贺毒素大肠埃希菌菌株检测与分析

    郑晓风张妍刘英玉朱明月...
    2518-2527页
    查看更多>>摘要：产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类携带了前噬菌体编码的一种或两种志贺毒素基因的新发高致病性食源性病原菌,已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题.为了解新疆部分地区牛、羊源各个环节产志贺毒素大肠埃希菌的感染情况及其遗传多样性,以及分离株对17种常见抗生素的敏感性,笔者采用PCR方法对STEC分离株进行了4种毒力基因(stx1、stx2、eae、 hlyA)的检测和ERIC-PCR基因分型研究.结果 表明:从屠宰场、养殖场和市场共431份样品中分离出产志贺毒素的大肠埃希菌64株,其中,编码stx1+stx2的STEC有31株(48.4％),只编码stx1的STEC有29株(45.3％),只编码stx2的STEC有4株(6.3％),4种毒力基因同时存在的有1株.药物敏感性检测发现STEC菌株对麦迪霉素(61％)、头孢噻吩(4.7％)、头孢西丁(4.7％)、氨苄西林(3.1％)、哌拉西林(1.6％)、妥布霉素(1.6％)、头孢唑啉(1.6％)等7种抗生素存在耐药.ERIC-PCR检测结果呈多态性分布,分为A(36株)和B(28株)两个簇.STEC菌株在新疆部分地区牛、羊源各个环节被检出,其中一些菌株可能会增加对食物的污染,从而引起人发病.

    产志贺毒素大肠埃希菌毒力基因耐药性ERIC-PCR

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