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中国生物制品学杂志
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封多佳

月刊

1004-5503

zgsw1988@163.com

0431-87923344；87910140

130062

长春市西安大路3456号

中国生物制品学杂志/Journal Chinese Journal of BiologicalsCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《中国生物制品学杂志》为中华预防医学会系列杂志，国家卫生部主管，国内外公开发行。本刊为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域，如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。优先报道基金项目及各种基金赞助课题的文章，并适当照顾边远地区和基层单位。本刊可承接国内外与生物制品及生物技术产品有关的设备、试剂广告业务，以刊物所具有的最广泛和最有效的传播能力做好客户的产品宣传。
正式出版
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    重组腺相关病毒装载目的核酸完整性分析

    黄天治秦玺于雷郑祖亮...
    641-645页
    查看更多>>摘要：目的 探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)装载目的核酸完整性检测方法,并初步建立分析算法.方法 消化rAAV外游离DNA片段,提取病毒基因组,设计5对搭接引物,采用正交排列方式,分别用数字PCR仪进行检测,常规条件采用EveGreen和模板4 μL的20 µL反应体系,数字PCR条件:95 ℃ 5 min;95 ℃15 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 90s,45个循环.超长核酸片段增强条件采用Mix B-2 000 bp和模板2 µL的25 μL反应体系,采用仪器附带软件定量.最小二乘法拟合分析共有的全长片段数量,进而解读目的核酸完整性分布情况.结果 引物间距离不大于1 200 nt的片段可得到有效扩增,经系统分析得到一系列片段长约1 000 nt的有效片段拷贝数,最小二乘法拟合分析共有片段拷贝数量,估计样本中全长片段不多于1 234 copies/μL,该值与测得的最大值(1 443 copies/µL)之间差异有统计学意义(P＜0.05),差异占比约16.9％.结论 初步建立了 rAAV装载目的核酸完整性的检测方法,并分析出供试品中存在一定数量的不完整目的核酸,为后续深入研究奠定了基础.

    重组腺相关病毒核酸完整性数字PCR重叠

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    重组腺相关病毒感染细胞后目的蛋白表达水平检测方法的建立及验证

    裴德宁闫书美史新昌胡倩...
    646-650,655页
    查看更多>>摘要：目的 建立重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)感染细胞后目的蛋白表达水平的检测方法,并进行方法验证,以期用于rAAV9生产过程中不同阶段产物的质量监控.方法 将rAAV9供试品用感染增强剂Envirus-AAV处理后,感染经羟基脲(hydroxyurea,HU)作用的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87-MG,以rAAV9参考品为标准,采用ELISA法检测细胞中目的蛋白戊二酰辅酶A脱氢酶(glutaryl-CoA dehydrogenase,GCDH)的表达水平,并验证方法的专属性、准确性、精密性、线性范围、定量限及耐用性.采用建立的方法检测8批rAAV9供试品.结果 供试品缓冲液的A45.-A63.为0.3,略低于蛋白定量四参数标准曲线最低稀释点(1 ng/mL);150％、100％、50％理论相对效价水平样品平均回收率均在100.0％～107.3％范围内;同1名实验员重复3次及不同实验员检测3个理论相对效价水平样品的目的蛋白表达水平RSD均＜25％;rAAV9供试品在50％～150％理论相对效价水平范围内,与相应的目的蛋白表达水平呈良好的线性关系,直线回归方程为y=1.077 x-0.022,R2为0.984;方法的定量限为0.59,即6.0× 1012 vg/mL;U87-MG细胞用HU孵育不同时间(18、21、24 h)、细胞培养上清液于不同条件(室温放置0.5 h、-60 ℃以下放置12 h、-60 ℃以下放置24 h)保存后,目的蛋白表达水平RSD均＜25％.1～8批rAAV9供试品目的蛋白表达水平分别为 111％、121％、72％、65％、86％、75％、102％、91％.结论 建立的rAAV感染细胞后目的蛋白表达水平检测方法具有良好的专属性、准确性、精密性及耐用性,可用于rAAV9生产过程中不同阶段产物的质量监控.

    重组腺相关病毒人脑星形胶质母细胞瘤细胞目的蛋白羟基脲感染增强剂酶联免疫吸附试验

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    生产场地变更对水痘减毒活疫苗质量的影响

    王晓琴邱平刘东来刘大维...
    651-655页
    查看更多>>摘要：目的 评价生产场地变更对水痘减毒活疫苗质量的影响.方法 采用新一代基因测序技术(next-generation sequencing,NGS).将生产场地变更前后的水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株毒种(VW-前、SYVW-后)与水痘减毒活疫苗原液(P-前、YZP-后)经DNA抽提、纯化、建库和测序,并对测序结果进行质量评价.以GenBank中登录的Dumas株基因序列(NC_001348)作为位置参考基因组,将生产场地变更前后4个样品全基因序列进行对比,从突变位点、碱基组成及突变频率(variant allele frequency,VAF),评价生产场地变更前后样品的一致性.结果 4个样品的测序深度均＞1 500 ×,毒种及疫苗原液GC含量均约46％,测序质量较高.生产场地变更前后毒种及疫苗原液的突变位点和碱基组成一致,且VAF接近,4个样品两两比较,均呈高度相关(R2均≥0.990,P均＜0.001).结论 经NGS检测,工艺变更对水痘减毒活疫苗质量无影响.

    水痘-带状疱疹病毒水痘减毒活疫苗新一代基因测序技术生产场地变更Oka株

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    小鼠品系对狂犬病疫苗效价检测的影响

    张芸畅武艳春邵宏秋黄晓娜...
    656-659,665页
    查看更多>>摘要：目的 探讨小鼠品系(KM和ICR小鼠)对狂犬病疫苗效价检测的影响.方法 将狂犬病疫苗及人用狂犬病疫苗效力检定国家标准品(简称国家标准品)用PBS按1∶25、1∶125、1∶625、1∶3 125稀释,分别经腹腔免疫KM和ICR小鼠(雌雄各半),每个品系小鼠每个稀释度免疫16只,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,免疫剂量及途径同上.分别于初次免疫后0、7、14d对各组小鼠进行称重;初次免疫后14 d,用狂犬病病毒(rabies virus,RABV)攻击毒株CVS2(5～100 LD50),经脑腔攻毒,0.03 mL/只,统计攻毒5 d后发生死亡和呈典型狂犬病脑症状的小鼠数量,根据获得的国家标准品ED50,采用Reed-Muench法计算狂犬病疫苗相对效力.结果 两个品系的小鼠在免疫阶段体质量均呈上升趋势,KM比ICR小鼠体质量增长更快.采用KM小鼠检测国家标准品的lgED50均在期望范围(2.10-2.75)内,而ICR小鼠的lgED50则高于其范围.采用KM小鼠检测狂犬病疫苗的效价均显著低于ICR小鼠(t=2.887-6.619,P均＜0.05).结论 小鼠品系可显著影响狂犬病疫苗效价的检测结果,针对不同品系小鼠应采用不同标准,以确保疫苗检测结果的准确性.

    狂犬病疫苗效价KM小鼠ICR小鼠

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    水痘-带状疱疹病毒Oka-7S株的免疫原性分析

    张树杰戴龙范滢周宏达...
    660-665页
    查看更多>>摘要：目的 比较水痘-带状庖疹病毒(varicella-zostervirus,VZV)Oka-7S与Oka株免疫原性.方法 用高、中、低(1 000、250、62.5 PFU/剂)剂量VZV Oka-7S及Oka株皮下分别免疫雌性BALB/c小鼠,每组12只,共免疫2次,每次间隔14 d.基于膜抗原荧光抗体试验(fluorescent antibody to membrane antigen assay,FAMA)进行VZV特异性体液免疫评价,酶联免疫斑点(ELISPOT)试验进行VZV特异性细胞免疫评价.结果 VZV Oka-7S和VZV Oka株均可引起特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,且具有相当的免疫效果;随免疫次数增加和免疫剂量升高,Oka-7S-2.2组小鼠血清中抗VZV特异性IgG抗体水平均明显升高.结论 VZV Oka-7S株免疫原性与VZV Oka株相当.

    水痘-带状疱疹病毒酶联免疫斑点试验膜抗原荧光抗体试验免疫原性

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    乙硫氨酸引起小鼠神经管畸形的机制探讨

    王文卓李美宁张丽李丹丹...
    666-671页
    查看更多>>摘要：目的 利用甲硫氨酸结构类似物——乙硫氨酸制备小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,并探讨NTDs发生对神经细胞增殖、凋亡及迁移的影响.方法 建立小鼠NTDs胚胎模型,C57BL/6J小鼠有孕至7.5d(E7.5)时,经腹腔注射500 mg/kg乙硫氨酸,对照组注射等剂量生理盐水,E11.5时取小鼠胚胎,体式显微镜下观察胚胎形态;ELISA检测孕鼠血浆中S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)、S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethio-nine,SAM)水平;Western blot及RT-PCR法检测胚胎脑组织迁移蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达及基因mRNA的转录,Western blot法检测细胞增殖蛋白PCNA、凋亡蛋白cleaved-Caspase3及Wnt/β-catenin信号通路标志蛋白β-catenin、TCF4、C-myc的表达.结果 乙硫氨酸干预后,孕鼠体内SAM含量减少,SAH含量增加,SAM/SAH降低.与对照组比较,NTDs组小鼠E-cadherin、cleaved-Caspase3高表达,细胞凋亡增多;N-cadherin、PCNA低表达,细胞增殖、迁移减少;且Wnt/β-catenin信号通路标志蛋白β-catenin、TCF4、C-myc均低表达,表明通路被抑制.结论 乙硫氨酸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路及神经细胞的增殖与迁移,促进细胞凋亡,进而引起NTDs.

    神经管畸形乙硫氨酸迁移Wnt/β-catenin信号通路

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    重组人白细胞介素-1受体拮抗剂卡那霉素抗性菌种的构建、表达、纯化及质量鉴定

    殷婷婷朱秋媚张宇王江林...
    672-678,686页
    查看更多>>摘要：目的 构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antago-nist,rhIL-1Ra)菌 种,并进行rhIL-IRa蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险.方法 分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化.收集纯化产物,15％SDS-PAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质.结果 经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确.表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30％以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97％和99％,单体含量分别为99.33％和100％,色谱纯度分别为91.86％和96.96％,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29 × 105U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致.结论 成功构建了 K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础.

    重组人白细胞介素-1受体拮抗剂同源重组抗性基因菌种变更

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    用于自然感染低龄绵羊抗体检测的禽分枝杆菌副结核亚种抗原筛选与评价

    沈克飞余远迪付利芝徐登峰...
    679-686页
    查看更多>>摘要：目的 分析禽分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis,MAP)10个血清反应性抗原(MAP 1138c、MAP2121c、MAP0150c、MAP0862、MAP0209c、MAP2120c、MAP0038、MAP3420c、MAP 2154c 和 MAP-2751)在自然感染低月龄绵羊体内的抗体反应,评估其诊断价值.方法 采集有副结核(paratuberculosis,PTB)病史羊群中无明显PTB症状的6月龄绵羊血清和肛拭子样品,采用PTB抗体检测ELISA试剂盒检测血清,基于MAP F57元件的荧光定量PCR检测肛拭子,根据检测结果对羊只进行分组.采用PCR检测阳性肛拭子中的MAP 10个抗原基因.将抗原基因克隆至pET-28a载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,Ni-Sepharose纯化重组抗原.将纯化的重组抗原包被ELISA板,用于检测采集的血清,以分析所选抗原在自然感染绵羊体内的抗体反应.分析不同抗原血清抗体的检出率,以评估其诊断价值.结果 所采样的72只绵羊被分为肛拭子阳性-抗体阳性(34只)、肛拭子阳性-抗体阴性(23只)、肛拭子阴性-抗体阴性(15只)3组.10个抗原基因均能在阳性肛拭子中检测到,且每个基因序列高度一致.经ELISA检测,MAP1138c、MAP2121c、MAP0150c、MAP0862在感染绵羊体内产生了抗体反应.在57只感染羊中,分别有30、34、24和31只检测到针对MAP1 138c、MAP2121c、MAP0150c和MAP0862的抗体.在肛拭子阳性-抗体阳性组中,抗MAP1138c的抗体检出率(76.47％)最高;在肛拭子阳性-抗体阴性组中,抗MAP2121和MAP0862的抗体检出率(52.17％和47.83％)高于其他2种蛋白.在72份血清样品的检测中,包被MAP2121c和MAP0862的ELISA检测结果的符合率超过91％.结论 MAP1 138c、MAP2121c和MAP0862可能是诱导自然感染低龄绵羊产生MAP抗体反应的显性生物标志物,MAP2121c和MAP0862可弥补商品化ELISA试剂盒在PTB早期诊断上敏感性不足的缺陷.

    禽分枝杆菌副结核亚种抗原血清反应性副结核反刍动物

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    低温乙醇法和硫酸铵盐析法制备的抗人T细胞猪免疫球蛋白与同类型兔源性制品体外活性的比对

    杨帆杜洪桥邹浩勇王智...
    687-695,702页
    查看更多>>摘要：目的 比较低温乙醇法和硫酸铵盐析法制备的抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immu-noglobulin,P-ATG)与市售的抗人胸腺细胞及抗人T细胞兔免疫球蛋白的体外活性,以评价两种工艺制备的P-ATG的性能.方法 采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测4种制品杀伤靶细胞的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)效应;CCK-8法检测4种制品杀伤靶细胞的补体依赖性细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)效应;细胞双重免疫荧光标记法检测4种制品与不同T细胞抗原(CD3、CD4、CD8)的共定位情况.结果 4种制品中,仅抗人胸腺细胞兔免疫球蛋白在高浓度(1mg/mL)下对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)有较弱的ADCC效应;4种制品均可介导人PBMC产生CDC效应,且呈剂量依赖性,其中抗人胸腺细胞兔免疫球蛋白的活性较高,为两种工艺制备的P-ATG或抗人T细胞兔免疫球蛋白的3～4倍,抗人T细胞兔免疫球蛋白的活性与P-ATG相当;4种制品与T细胞表面抗原CD3、CD4的共定位细胞比例相近,抗人胸腺细胞及抗人T细胞兔免疫球蛋白与CD8抗原共定位的细胞比例略低于两种工艺制备的P-ATG.结论 低温乙醇法与硫酸铵盐析法制备的P-ATG体外活性具有良好的一致性,且在临床剂量下不低于进口同类型制品.

    低温乙醇法硫酸铵盐析法抗人T细胞免疫球蛋白体外活性

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    2010-2021年陕西省疑似预防接种异常反应监测分析

    吕亚可王锐泽李永东周天天...
    696-702页
    查看更多>>摘要：目的 分析2010-2021年陕西省疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)监测情况及发生特征.方法 通过中国免疫规划信息管理系统和AEFI信息管理系统,收集2010-2021年陕西省各类疫苗接种数据和AEFI个案信息,并进行描述性分析.结果 2010-2021年陕西省共报告24057例AEFI,2014-2021年均AEFI报告发生率为18.998/10万剂次,其中一般反应17.998/10万剂次、异常反应0.702/10万剂次、严重AEFI 0.112/10万剂次;5-8月AEFI发生率较高,平均为26.304/10万剂次;≤1岁的个案占69.83％;免疫规划疫苗中百白破疫苗(无细胞)AEFI报告发生率最高(57.948/10万剂次),含麻类疫苗异常反应报告发生率最高(1.875/10万剂次);非免疫规划疫苗中百白破-Hib联合疫苗AEFI报告发生率最高(37.073/10万剂次),ACYW135流脑多糖疫苗异常反应报告发生率最高(2.392/10万剂次);一般反应分类中临床诊断主要为高热/局部红肿/局部硬结(22.481/10万剂次),异常反应分类中临床诊断主要为过敏性皮疹(0.473/10万剂次).结论 陕西省AEF1监测系统敏感性逐年上升,各疫苗安全性良好,以一般反应为主,严重异常反应罕见,不同地市AEFI监测水平存在差异,仍需加强培训.

    疑似预防接种异常反应监测发生特征

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