查看更多>>摘要:目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路,建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,观察不同时间点小鼠肺损伤情况,根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达,综合筛选出最佳造模时间点,为后续实验奠定动物模型基础.方法 54 只 6~8 周龄SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为 9 组,空白对照组(Con组)和造模时间组(1、3、6、12、18、24、48 和 72h组),分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评分、肺指数、肺含水量及湿干重比;取肺泡灌洗液检测白细胞计数,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18 及BCA蛋白浓度;使用Western Blot检测肺组织中经典焦亡通路相关NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达.结果 根据体重统计,各组均有下降,24 及 48h组下降最为明显;通过肺组织大体、病理观察及评分发现,24~72 h肺组织损伤严重,每组与Con组比较均有统计学意义;肺指数、肺含水量及湿干重比在 24~72h明显升高;肺泡灌洗液中白细胞从造模后 6h开始升高,48 h可达峰值,至72h均维持上升状态;灌洗液中IL-18 在24h开始升高,72 h仍然持续升高;TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子在 6h时均保持最高水平状态,在 48h明显降低;灌洗液中蛋白浓度在 24、48及 72h与Con组相比均有明显升高;通过Western Blot检测发现,ALI模型各个时间组焦亡通路蛋白NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1与GSDMD蛋白表达均有上调,24~72 h组的通路蛋白表达与Con组相比明显增强.结论 综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及Western Blot中通路蛋白的表达,发现焦亡机制与ALI的发生与进展密切相关,并随时间迁移.从实验结果得知 24~48h肺损伤程度严重,肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究意义,可作为造模时间参考.也为后续研究ALI的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础.