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中国兽医学报
中国兽医学报

王哲

月刊

1005-4545

xbcjvs@163.com

0431-87836534

130062

长春市西安大路5333号

中国兽医学报/Journal Chinese Journal of Veterinary ScienceCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是由解放军军需大学主办的兽医专业学术性期刊，是国内兽医界最有影响的权威性核心期刊之一。被CA、CAB、AGRIS、中国生物学文摘、中国农业文摘及中国科学引文索引等近20种国内外数据库或检索性刊物收录。《中文核心期刊要目总览》列为中国兽医科学核心期刊。中科院医学信息研究所确定其为中国生物医学核心期刊。
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    猪δ冠状病毒感染猪树突状细胞及对免疫因子分泌能力的影响

    胡亚婷舒祥力赵福杰郝晨琳...
    223-230页
    查看更多>>摘要：以猪树突状细胞(porcine dendritic cells,pDCs)为模型,探究猪 δ 冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是否能够对pDCs进行有效感染及对抗病毒细胞因子分泌的影响.采集猪外周抗凝血,分离获得猪外周血单核细胞,经白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)诱导培养获得未成熟树突状细胞,利用倒置显微镜和透射电镜观察其生物学形态,通过蛋白质免疫印迹和激光共聚焦试验检测病毒是否可以对pDCs进行感染,qRT-PCR检测抗病毒因子IFN-α和ISG56的表达.结果显示,成功分离培养得到具有典型树突状细胞形态的pDCs,将PDCoV接种至分离培养得到的pDCs中,PDCoV可以有效感染,可以在pDCs中进行复制并产生感染性的子代病毒颗粒,病毒滴度达到4.4 lgTCID50/0.1 mL.同时检测PDCoV感染pDCs时对抗病毒因子表达的影响,结果表明,在病毒感染pDCs后48 h产生了高水平的IFN-α和ISG56.本研究成功诱导培养得到pDCs,首次证实PDCoV可以在体外感染pDCs,并在细胞中进行有效地复制,pDCs在病毒感染后促进IFN-α、ISG56的分泌来发挥抗病毒免疫效应,为后续研究PDCoV的致病机制提供了新的思路.

    猪δ冠状病毒猪树突状细胞病毒感染抗病毒因子

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    PRRSV、SS和Pm多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

    詹存林王庚孙秀秀冯贺龙...
    231-236页
    查看更多>>摘要：为了建立一种可同时检测并鉴别猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌(SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pm)多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,本试验通过MEGA7.0分析NCBI上已登录的3种病原体基因序列,分别根据PRRSV的ORF6基因、SS的GDH基因和Pm的KMT1基因设计出特异性引物和探针,并对反应条件进行优化.结果显示,该方法能够特异性地检测PRRSV、SS和Pm,对其他病原无交叉反应;对PRRSV、SS和Pm的最低检测浓度分别为9.93×102、1.10×102和1.07× 102拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1.85％.结果表明,该方法特异性强、灵敏性高、稳定性好,可应用于临床检测.

    猪繁殖和呼吸综合征病毒猪链球菌猪多杀性巴氏杆菌多重TaqMan荧光定量PCR

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    共表达TGEV AD蛋白和PEDVS蛋白CS区重组伪狂犬病病毒的构建及纯化

    赵丽吕玉金徐通许瑞勤...
    237-243页
    查看更多>>摘要：根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的CS中和表位区(499～789 aa)序列设计1对特异性引物,在其5'端分别引入BamH Ⅰ和HindⅢ,PCR扩增PEDV CS区.将扩增的CS片段插入至pBApo-EF1α_Pur_DNA真核表达载体的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ位点,然后扩增含CS区表达盒,将其插入至含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)AD基因的PRV转移质粒pG-AD-EGFP中,构建转移质粒pG-AD-CS-EGFP.利用转染试剂ZLip2000将伪狂犬病病毒(PRV)三基因缺失毒株rPRV NY-gE-/gI-/TK-基因组与转移质粒pG-AD-CS-EGFP共转染ST细胞,获得携带有TGEV AD、PEDV CS区和绿色荧光蛋白标记基因的重组病毒rPRV-AD-CS-EGFP.扩增重组病毒rPRV-AD-CS的表达盒,测序后进行遗传稳定性评价,同时将重组病毒rPRV-AD-CS、亲本株Bartha-K61和PRV强毒株分别接种小鼠,进行安全性评价.将该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经3轮病毒空斑纯化获得无绿色荧光标记的重组病毒rPRV-AD-CS.经 Western blot和IFA证实rPRV-AD-CS在ST细胞中能表达CS外源蛋白,具有良好的遗传稳定性和安全性.结果表明,成功构建共表达TGEV AD蛋白和PEDV S蛋白CS区的重组病毒株rPRV-AD-CS,该重组病毒具有遗传稳定性和安全性,为开发安全、有效的预防TGEV、PEDV和PRV感染的三联苗奠定基础.

    PEDVCS中和表位区TGEVAD抗原表位区PRV

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    猪轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立及初步应用

    林正丹涂军詹存林孙秀秀...
    244-248页
    查看更多>>摘要：为了对早期猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染情况进行监测,根据GenBank中已有的A型PoRV VP6序列,设计2对引物和荧光定量探针,建立了 TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法特异性、灵敏性和重复性进行评价.结果显示所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可检测到101拷贝/μL.经对2 366份腹泻仔猪的粪便样品进行检测,所建立的方法检出率(5.92％,140/2 366)高于常规RT-PCR(4.95％,117/2 366),两者的符合率为98.58％.结果表明,本研究建立的PoRV TaqMan荧光定量RT-PCR方法可用于猪轮状病毒病的临床检测.

    猪轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法

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    一种新型电化学免疫传感器检测血清4型禽腺病毒

    黄娇玲谢芝勋罗思思李孟...
    249-257页
    查看更多>>摘要：将多壁碳纳米管-壳聚糖-铂纳米粒子复合材料(MWCNT-Chi-PtNP)修饰金电极(GE),并吸附血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)蛋白单克隆抗体(MAb/FAdV-4),构建一种新型的电阻型电化学免疫传感器用于检测FAdV-4.对传感器的测试底液及样品孵育时间进行优化后,在最优条件下,对所构建的传感器的敏感性、特异性和稳定性进行检测.并对36份临床样品进行检测,以验证该传感器的实用性.结果显示,所建立的FAdV-4电化学免疫传感器的测试底液最佳pH值为7.0,样品的最佳孵育时间为30 min,检测线性范围101.46～104.46 EID50/mL FAdV-4,最低检出限为101,89 EID50/mL FAdV-4(S/N=3);敏感性试验结果显示该免疫传感器灵敏度比常规PCR方法(103.46 EID50/mL)FAdV-4高37倍,且该传感器特异性高,稳定性好;该传感器对36份临床样品进行检测,结果与PCR方法和测序结果相符.结果表明,所建立的FAdV-4电化学免疫传感器具有检测快速、特异性好和敏感性高等优点,为FAdV-4的诊断提供一种新型的快速检测技术.

    多壁碳纳米管电化学免疫传感器铂纳米粒子血清4型禽腺病毒

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    血清Ⅲ型马立克病病毒单克隆抗体的制备及在疫苗蚀斑计数中的应用

    李文超刘丹杨承槐李启红...
    258-263页
    查看更多>>摘要：通过制备马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)血清Ⅲ型特异性单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立鸡马立克病(Marek's disease,MD)二价活疫苗间接免疫荧光蚀斑计数方法奠定基础.以纯化的MDV血清Ⅲ型HVT Fc-126株免疫BALB/c小鼠,采用常规单克隆抗体技术,经间接免疫荧光方法筛选杂交瘤细胞株;选取1株制备MDV Ⅲ型单克隆抗体,建立MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法.结果筛选出2株稳定分泌抗MDV血清Ⅲ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并选择1D2株单抗建立了检测MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法,可快速准确地计数二价活疫苗中血清Ⅲ型病毒的蚀斑形成单位数(Plaque forming unit,PFU),与琼脂覆盖法相比,敏感性和特异性大大提高.因此,制备的MDV单克隆抗体具有良好的血清型特异性,可用于MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数.

    马立克病病毒血清型单克隆抗体二价疫苗蚀斑计数

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    鸭短喙矮小综合征灭活疫苗的研制及免疫效力评价

    陈仕龙程晓霞肖世峰江丹丹...
    264-267页
    查看更多>>摘要：鸭短喙矮小综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)是近年来在我国鸭群中流行的一种新传染病,为研制SBDS灭活疫苗,本研究将SBDSV M15株在番鸭胚增殖,收获病毒尿囊液经灭活后制备了 3批灭活疫苗,并对疫苗的安全性、免疫原性及免疫效力进行检验.结果显示,3 日龄樱桃谷鸭超剂量接种1.0 mL/羽,未见不良反应,表明疫苗的安全性好;3批灭活疫苗免疫20日龄雏半番鸭,免疫后28 d血清的胶乳凝集抑制试验(LPAI)抗体效价均值为4.3 log2;130日龄樱桃谷鸭种鸭免疫1次灭活疫苗后60 d血清LPAI抗体平均效价为6.9 log2;种鸭免疫后60 d所产种蛋卵黄抗体的LPAI效价均值为6.5 log2;对种鸭免疫后的3日龄子代雏鸭进行攻毒获得100％免疫保护.结果表明,本研究研制的SBDS灭活疫苗具有良好的免疫原性,种鸭1次免疫后可提供子代雏鸭保护性母源抗体,保护雏鸭度过最易感的危险窗口期,为SBDS的防控提供了有效手段.

    鸭短喙矮小综合征灭活疫苗抗体效价母源抗体免疫效力

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    重组腺病毒表达牛纽布病毒VP1蛋白及免疫效果评价

    陈涛云朱庆保志鹏喻琦胜...
    268-275页
    查看更多>>摘要：旨在构建一种表达牛纽布病毒(bovine nebovirus,BNeV)VP1蛋白的人5型复制缺陷型重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1,并评价其免疫效果.以优化合成的BNeV VP1基因序列构建重组穿梭质粒pDC316-VP1,利用AdMax腺病毒包装系统包装重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1,并在小鼠中评价其免疫效果.结果显示,通过比对国内BNeV VP1氨基酸序列,根据HEK293细胞密码子偏嗜性优化合成国内流行毒株Bo/LN-13/18/CH株的BNeV VP1序列,序列大小为1 650 bp.将pDC316-VP1与骨架载体pBHGIox_E1,3Cre共转染入HEK293细胞包装出重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1.RT-PCR扩增出1 650 bp的BNeV VP1基因条带,Western blot及间接免疫荧光反应证实rAd5-BNeV_VP1能够成功表达VP1蛋白,蛋白大小约为57.5 kDa,表明成功包装出rAd5-BNeV_VP1且VP1基因能在重组腺病毒中稳定表达,其TCID50为10-5.34/0.1 mL.通过肌肉注射和滴鼻2种途径免疫小鼠均能产生较高的特异性抗体水平,二免7 d后肌肉注射组抗体效价最高可达1∶105,滴鼻组抗体效价最高可达1∶104;滴鼻组可产生高于PBS组2倍的INF-γ和IL-2(P＜0.05).结果表明,本研究构建表达BNeV VP1蛋白的重组腺病毒rAd5-BNeV_VP1具有良好的免疫原性,可刺激小鼠快速产生针对BNeV VP1的特异性抗体,为今后BNeV疫苗的研发奠定了基础.

    重组腺病毒牛纽布病毒免疫原性VP1蛋白

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    基于E2蛋白BVDV腺病毒载体疫苗的制备及对小鼠的免疫原性分析

    张家祺李格格朱庆杨洋...
    276-282页
    查看更多>>摘要：选用牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)SWU-Z6株的E2基因序列为模板,针对HEK293细胞密码子偏嗜性优化合成全长E2基因,利用AdMax腺病毒包装系统制备Ad5-BVDV-E2.采用PCR、间接免疫荧光(IFA)和 Western blot验证了 E2蛋白在HEK293细胞中成功表达,并通过肌注、滴鼻和口服免疫途径来免疫小鼠,同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组.结果显示,经酶切鉴定和测序验证表明,优化后的E2基因已正确克隆至腺病毒穿梭载体pDC316中,并获得重组质粒pDC316-E2,将pDC316-E2和腺病毒骨架质粒共转染至HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad5-BVDV-E2.PCR验证了 E2基因成功插入到腺病毒载体基因组中,IFA和Western blot证实了重组腺病毒能够正确表达E2蛋白,并具有良好的生物学活性.通过肌注、滴鼻和口服均能产生较高的抗体水平,其中Ad5-BVDV-E2肌注组小鼠加强免疫1周后抗体滴度最高达到1∶102 400.结果表明,成功制备了 Ad5-BVDV-E2,能诱导机体产生较强的体液免疫反应,表明Ad5-BVDV-E2具有临床应用的潜力.

    牛病毒性腹泻病毒E2蛋白重组腺病毒载体疫苗免疫原性

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    副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性

    李军星余斌徐丽华苏菲...
    283-289页
    查看更多>>摘要：副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要.本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法,并验证了重组三聚体毒素的生物学活性.结果显示,CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时,按0.1 g/L等体积混合,在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好.构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基,并且均以包涵体形式存在,经包涵体离心粗纯化后,即可用于重组三聚体CDT的组装.组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化,得到高纯度的完整毒素.完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀,且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加.结果表明,本研究建立了 一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法,所制备的CDT具有良好的生物学活性.

    副猪嗜血杆菌细胞致死性膨胀毒素三顺反子质粒完整毒素

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