查看更多>>摘要：目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用.方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以 25、50、100 μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞 48 h,分别设置为 25 μg/ml组、50 μg/ml组、75 μg/ml组,同时设置空白对照组.采用细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞存活率;光镜检测细胞内线粒体损伤情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测动力相关蛋白 1(Drp1)、线粒体融合蛋白 1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)和视神经萎缩因子 1(Opa1)微小核糖核酸(mRNA)表达和蛋白表达水平.分析LPS对SH-SY5Y细胞存活率和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量,SH-SY5Y细胞线粒体形态,SH-SY5Y细胞内SOD、MDA、NO和TNF-α,SH-SY5Y细胞内mRNA表达的影响.结果 CCK-8法检测结果显示,与空白对照组相比,在 48 h给药时间下,25、50、100 μg/ml组中SH-SY5Y细胞存活率明显下降,Aβ含量显著升高;随着LPS剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率呈剂量依赖性降低,Aβ含量呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05).光镜结果显示,与空白对照组相比,在 48 h给药时间下,25、50、100 μg/ml组中SH-SY5Y细胞内线粒体出现明显变大变圆,体积增大,线粒体出现肿胀和线粒体空泡化等改变,并伴有线粒体自噬的发生.ELISA结果显示,与空白对照组相比,在 48 h给药时间下,25、50、100 μg/ml组中SH-SY5Y细胞内SOD表达分别显著降低 24.16%、69.08%和123.78%,MDA表达分别显著增加 37.65%、52.13%和 101.85%,NO表达分别显著增加 54.34%、119.08%和 167.78%,TNF-α表达分别显著增加 54.34%、119.08%和 167.78%,随着LPS剂量的增加,SOD含量变化具有剂量依赖性降低,NO、MDA、TNF-α含量变化呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05).Real-Time PCR结果显示,与空白对照组相比,在 48 h给药时间下,25、50、100 μg/ml组中SH-SY5Y细胞内Drp1、Mnf1 和Mnf2 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著增加,SH-SY5Y细胞内Opa1 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 LPS可明显加速SH-SY5Y细胞线粒体融合分裂,降低细胞的存活率,在阿尔茨海默病的发病机制中具有重要作用.
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