查看更多>>摘要:目的 探讨核因子E2 相关因子 2(Nrf2)蛋白对小鼠脓毒症相关性肝损伤(SALI)铁死亡的作用.方法 按随机数字表法将雄性SD小鼠分成 6 组,每组 6 只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建小鼠SALI模型,假手术(Sham)组仅开腹处理.CLP+Fer-1 组、CLP+Erastin组、CLP+ML385 组、CLP+Curcumin组分别于术后经腹腔注射铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)10 mg·kg-1·d-1、铁死亡激活剂Erastin 20 mg·kg-1·d-1、Nrf2 抑制剂ML385 30 mg·kg-1·d-1、Nrf2 激活剂Curcumin 100 mg·kg-1·d-1 进行干预;Sham组、CLP组予生理盐水10 mg·kg-1·d-1,均连续给药10 d.术后10d收集小鼠血清和肝组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),以及肝组织匀浆液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和Fe2+水平;苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织病理学改变;透射电镜下观察肝细胞线粒体形状和长度;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肝组织Nrf2、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、前列腺素-内过氧化物合酶 2(PTGS2)的蛋白表达.结果 与Sham组比较,CLP组小鼠血清ALT、AST水平明显升高;镜下可见肝索排列紊乱,细胞肿胀、坏死,线粒体长度明显变短;肝组织中MDA、Fe2+水平明显上升,GSH含量明显下降,Nrf2、GPX4 蛋白表达下降,PTGS2蛋白表达明显升高.与CLP组比较,CLP+Fer-1组和CLP+Curcumin组血清ALT、AST水平明显降低[ALT(U/L):80.65±19.44、103.45±20.52 比 283.50±37.12,AST(U/L):103.33±11.90、127.33±15.79 比 288.67±36.82,均P<0.05];镜下可见肝索欠规整,细胞轻微肿胀,线粒体长度明显增加(μm:1.42±0.09、1.43±0.21 比1.07±0.25,均P<0.05);肝组织中MDA、Fe2+水平明显下降,GSH含量明显升高[MDA(mol/g):0.87±0.23、1.85±0.43 比 4.47±0.95,Fe2+(μg/g):63.80±7.15、67.48±6.28 比 134.52±14.32,GSH(mol/g):1.95±0.29、1.95±0.45 比 0.55±0.29,均P<0.05];肝组织Nrf2、GPX4 蛋白表达明显升高,PTGS2 蛋白表达明显下降(Nrf2/GAPDH:1.80±0.28、2.10±0.43 比 0.70±0.24,GPX4/GAPDH:0.80±0.06、0.93±0.07 比 0.48±0.02,PTGS2/GAPDH:0.76±0.05、0.84±0.01 比 1.02±0.09,均P<0.05);而CLP+Erastin组、CLP+ML385 组上述指标结果则相反,血清ALT、AST水平明显升高[ALT(U/L):344.52±40.79、321.70±21.10 比 283.50±37.12,AST(U/L):333.50±27.90、333.00±16.67 比 288.67±36.82,均P<0.05];镜下可见肝索排列紊乱,细胞明显肿胀、坏死,线粒体长度明显变短(μm:0.78±0.13、0.67±0.07 比 1.07±0.25,均P<0.05);肝组织中MDA、Fe2+水平明显升高,GSH含量明显下降[MDA(mol/g):5.92±1.06、5.62±0.56 比 4.47±0.95,Fe2+(μg/g):151.40±8.03、151.88±8.68 比 134.52±14.32,GSH(mol/g):0.25±0.08 和 0.23±0.11 比 0.55±0.29,均P<0.05];肝组织Nrf2、GPX4 蛋白表达明显下降,PTGS2 蛋白表达明显升高(Nrf2/GAPDH:0.46±0.09、0.46±0.11 比 0.70±0.24,GPX4/GAPDH:0.34±0.05、0.40±0.01 比 0.48±0.02,PTGS2/GAPDH:1.24±0.13、1.16±0.11 比 1.02±0.09,均P<0.05).结论 CLP诱导的SALI可导致小鼠肝细胞铁死亡,肝组织Nrf2 蛋白可通过调节铁死亡介导SALI.