查看更多>>摘要:目的 探讨ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)开放剂尼可地尔对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)所致BV2小胶质细胞焦亡和炎性反应的影响及作用机制.方法 将BV2细胞分为对照组、OGD/R组和OGD/R+尼可地尔组.BV2细胞氧糖剥夺3 h后复氧24 h建立OGD/R细胞模型,OGD/R+尼可地尔组细胞在氧糖剥夺3 h后加入5 μg/mL尼可地尔培养液孵育24 h.采用CCK8法检测细胞增殖活性;钙黄绿素/碘化丙啶(calce-in/PI)试剂盒检测各组细胞膜成孔破裂率;Western blot检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、磷酸化 NF-κB(phosphorylated NF-κB,p-NF-κB)、NF-κB 抑制蛋白 α(inhibitor of nuclear factor-κB α,IκB-α)、磷酸化 IκB-α(phosphorylated IκB-α,p-IκB-α)、黑色素瘤缺乏因子 2(absent in melanoma 2,AIM2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-1(cleaved-caspase-1)、消皮素D N-末端片段(gasdermin D-N,GSDMD-N)、白细胞介素 18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素 1β(interleukin-1β,IL-1β)的蛋白表达情况;细胞免疫荧光检测各组AIM2、GSDMD-N蛋白表达情况.使用SPSS 26.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验.结果(1)3组细胞膜成孔破裂率差异有统计学意义(F=615.882,P<0.05),OGD/R+尼可地尔组细胞膜成孔破裂率低于OGD/R组[(41.50±3.04)%,(59.44±3.66)%,P<0.05].(2)Western blot 结果显示,3 组细胞 p-NF-κB、NF-κB、p-IκB-α和IκB-α的蛋白表达水平均差异有统计学意义(F=10.000,62.652,67.121,101.023,均 P<0.05).OGD/R+尼可地尔组细胞 p-NF-κB、NF-κB、p-IKB-α 蛋白水平[(0.60±0.13),(0.87±0.06),(0.55±0.06)]均低于 OGD/R 组[(1.02±0.09),(1.03±0.09),(0.86±0.04)](均 P<0.05),OGD/R+尼可地尔组细胞 IκB-α[(0.63±0.05),(0.46±0.06)]表达水平高于 OGD/R 组(P<0.05).(3)3组细胞AIM2、cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β的蛋白表达水平均差异有统计学意义(F=65.926,12.428,66.447,44.831,52.960,均 P<0.05).OGD/R+尼可地尔组细胞 AIM2、cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-18 和 IL-1β 蛋白水平[(0.78±0.04),(0.71±0.09),(0.54±0.04),(0.72±0.07),(0.50±0.08)]均低于 OGD/R 组[(0.94±0.09),(0.89±0.09),(0.85±0.04),(0.90±0.07),(0.99±0.03)](均P<0.05).(4)免疫荧光结果显示,3组细胞焦亡特征性蛋白分子AIM2和GSDMD-N的荧光强度均差异有统计学意义(F=36.353,46.817,均P<0.05).OGD/R+尼可地尔组AIM2[(124.36±7.91),(140.19±5.63)]和 GSDMD-N[(134.16±5.18),(147.45±5.63)]的蛋白荧光强度均低于OGD/R组(均P<0.05).结论 尼可地尔可以减轻氧糖剥夺后BV2细胞损伤,抑制促炎因子释放,其机制可能与其下调NF-κB相关蛋白表达,抑制AIM2炎性小体介导的细胞焦亡有关.