查看更多>>摘要:利用UPLC-Q-TOF-MS技术分析三妙丸化学成分,通过网络药理学和动物实验研究三妙丸治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机制.利用UPLC-Q-TOF-MS技术检测三妙丸所含化学成分,结合DisGeNET、SwissTargetPrediction等数据库筛选类风湿关节炎与三妙丸化学成分的交集靶点,构建蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络.将关键靶点导入MATESCAPE平台进行基因本体论(Gene Ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路注释,结合成分、靶点和通路,利用Cytoscape 3.8 软件构建"成分-靶点-通路"网络,预测三妙丸治疗类风湿性关节炎的主要活性成分、关键靶点及通路.建立HPLC-DAD法同时测定三妙丸中小檗碱、苍术内酯-Ⅰ、苍术内酯-Ⅱ、人参皂苷Ro、三七皂苷R1 的含量.建立大鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,进行行为学实验,HE检测SMP对大鼠滑膜病理形态的影响,Western blot检测磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(pro-tein kinase B,Akt)通路的变化.结果鉴定出三妙丸化学成分共 126 个.化学成分与疾病共有交集靶点 332 个,根据PPI网络结果筛选排名前十的为核心靶点,其中包括AKT1、肿瘤坏死因子(TNF)等,KEGG富集结果显示主要涉及PI3K/AKT样受体通路等 20 条典型通路.5 种成分在各自范围内线性关系良好,RSD≤2%.动物实验研究结果显示,三妙丸有效改善CIA大鼠滑膜异常增生,降低滑膜PI3K和p-AKT蛋白表达水平.综上所述,三妙丸可能通过调控PI3K/AKT通路,缓解RA病情.