查看更多>>摘要:目的 探究CD226基因敲除(CD226-/-)对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化模型的影响.方法 选取雄性野生型C57BL/6小鼠和CD226-/-C57BL/6小鼠各8只,6~8周龄,体重分别为(22.16±2.24)g和(21.84±2.50)g.从野生型和CD226-/-小鼠中各取4只予以腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,即肝纤维化组和CD226-/-肝纤维化组,剩余的各4只分别作为对照组和CD226-/-对照组.观察CD226-/-对肝质量、肝脏指数及Ishak纤维化评分的影响.HE、Masson及天狼猩红染色观察肝脏损伤和肝纤维化情况.免疫组织化学、蛋白质印迹法检测肝脏组织Ⅰ 型胶原(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平.流式细胞术分析外周血和肝脏T淋巴细胞比例及其胞内IFN-γ分泌水平.实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠肝脏组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达水平.结果 与肝纤维化组相比,CD226-/-肝纤维化组小鼠的肝质量[(2.00±0.14)g比(1.41±0.16)g]及肝脏指数(7.25±0.59 比5.33±0.30)均增加,Ishak 纤维化评分[(6.75±0.96)分比(10.00±1.41)分]降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05).HE染色结果显示,肝纤维化组和CD226-/-肝纤维化组小鼠的肝脏组织均显示肝组织结构紊乱,肝细胞变性坏死,但CD226-/-肝纤维化组小鼠的炎症细胞募集程度轻于肝纤维化组.天狼猩红、Masson染色发现,与肝纤维化组相比,CD226-/-肝纤维化组小鼠胶原纤维沉积减少.免疫组化染色结果显示,与肝纤维化组相比,CD226-/-肝纤维化组小鼠肝脏组织中 Collagen Ⅰ[(4.38±0.51)%比(6.55±1.40)%]和α-SMA[(0.77±0.20)%比(1.20±0.24)%]的表达均减少,差异均具有统计学意义(均P<0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,与肝纤维化组相比,CD226-/-肝纤维化组小鼠肝组织中Collagen I蛋白的相对表达降低(0.35±0.14比1.66±0.73),差异具有统计学意义(P<0.05).流式细胞术结果显示,与肝纤维化组相比,CD226-/-肝纤维化组小鼠外周血T淋巴细胞胞内IFN-γ分泌增加.qPCR检测结果显示,与肝纤维化组相比,CD226-//-肝纤维化组小鼠肝脏中TGF-β1 mRNA[(0.38±0.18)比(0.61±0.28)]的相对表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CD226-/-可减轻CCl4诱导的肝脏炎症浸润状态和肝纤维化,这可能与其对肝内T淋巴细胞及胞内IFN-γ分泌的影响有关.