查看更多>>摘要:目的 探讨清解化攻方调节环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHipk3)减轻急性胰腺炎(AP)腺泡细胞焦亡并保护肠屏障的机制.方法 将60只小鼠随机分为空白组、模型组、乌司他丁组、清解化攻方组、基因沉默组、基因沉默联合中药组,每组10只;基因沉默和基因沉默联合中药组尾静脉注射circHipk3基因沉默腺相关病毒;模型组、各干预组腹腔注射50μg/kg雨蛙素,每小时1次,连续7次;清解化攻方、基因沉默联合中药组中药2g/kg灌胃,空白组、模型组予等量蒸馏水,乌司他丁组予腹腔注射乌司他丁 5U/kg,每天2次,连续3天.观察小鼠胰腺、回肠病理情况;检测血清内毒素(Endotoxin)、TNF-α、IL-18、IL-1β水平,胰腺消皮素D(GSDMD)表达,回肠闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)表达;Western Blot法检测胰腺半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、GSDMD、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、IL-1β及回肠ZO-1、Occludin、封闭蛋白1(CLDN1)表达;聚合酶链反应检测胰腺circHipk3、微小RNAmiR-193a-5p、caspase-1、GSDMD mRNA水平及肠黏膜通透性.结果 与空白组比较,模型组胰腺湿/干比重和腹水增多,胰腺和回肠组织评分增加,血清Endotoxin、TNF-α、IL-18、IL-1β水平升高,GSDMD阳性表达增强,GSDMD、caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白表达升高,ZO-1、Occludin、CLDN1 表达降低,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA表达升高,miR-193a-5p降低,ZO-1、Occludin阳性表达减少,肠道通透性升高(P<0.05).与模型组比较,各干预组胰腺湿/干比重降低,乌司他丁组、清解化攻方组、基因沉默联合中药组腹水减少,胰腺和回肠组织评分降低,Endotoxin、TNF-α、IL-18、IL-1β水平下降,GSDMD阳性表达减弱,GSDMD、caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,回肠蛋白表达升高,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA表达降低,miR-193a-5p升高,ZO-1、Occludin阳性表达增多,肠道通透性升高(P<0.05).与基因沉默组比较,基因沉默联合中药组胰腺湿/干比重、腹水、胰腺和回肠组织评分降低,Endotoxin、TNF-α、IL-18 降低,GSDMD 阳性表达减弱,GSDMD、caspase-1、NLRP3、IL-1β 蛋白表达降低,ZO-1、Occludin、CLDN1 蛋白表达增加,circHipk3、caspase-1、GSDMD mRNA降低,miR-193a-5p升高,ZO-1、Occludin阳性表达增多,肠道通透性降低(P<0.05).结论 清解化攻方可下调circHipk3、caspase-1基因,上调miR-193a-5p基因表达水平,降低胰腺焦亡蛋白表达,减轻胰腺损伤保护肠屏障.