查看更多>>摘要:目的 探究通道开结方对食管癌(esophageal cancer,EC)细胞生物学行为的影响及其与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调节作用.方法 2022年6月至2023年7月,将SD大鼠随机分为低、中、高剂量组和正常组,低、中、高剂量组分别灌胃1.05 g/(kg·d)、2.1 g/(kg·d)和4.2g/(kg·d)的通道开结方,采集血清,保存备用.常规培养人食管癌细胞株Ecal09,将其随机分为对照组(10%对照组血清处理)、低浓度中药组(10%低剂量含药血清)、中浓度中药组(10%中剂量含药血清)、高浓度中药组(10%高剂量含药血清)和高浓度中药+Wnt激活剂BS216763组(10%高剂量含药血清+20 μmol/L SB216763).CCK-8法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法测定细胞 Wnt3a、β-catenin mRNA 表达;蛋白免疫印迹法(western blot)测定Wnt3a、β-catenin和凋亡标志蛋白表达情况.构建裸鼠EC移植瘤模型,并将无胸腺裸鼠(Balb/c)分为模型组、低剂量中药组[1.58g/(kg·d)]、高剂量中药组[3.16 g/(kg·d)]和高剂量中药+SB216763组[3.16 g/(kg·d)中药+2 mg/kg SB216763],每组12只.观察记录裸鼠的肿瘤生长情况,比较肿瘤体积的大小.结果 与对照组[(148.26±16.07)个]相比,中浓度中药组[(119.49±13.20)个]、高浓度中药组[(85.66±9.38)个]Ecal09细胞的侵袭数目下降(P<0.05);与高浓度中药组相比,高浓度中药+SB216763组Eca109细胞的侵袭数目[(128.06±13.25)个比(85.66±9.38)个]增高(P<0.05).与对照组相比,中浓度中药组、高浓度中药组48 h 和 72 h 光密度(OD)450(0.40±0.04,0.22±0.02 比 0.58±0.06,0.71±0.07,0.53±0.05 比0.97±0.10)下降(P<0.05);与高浓度中药组相比,高浓度中药+SB216763组48 h和72 h光密度(OD)450(0.43±0.04比0.22±0.02,0.76±0.08比0.53±0.05)增高(P<0.05).与对照组相比,中浓度中药组、高浓度中药组划痕愈合率[(33.65±3.88)%、(14.49±1.83)%比(57.24±5.36)%]下降(P<0.05);与高浓度中药组相比,高浓度中药+SB216763组划痕愈合率[(37.50±3.40)%比(14.49±1.83)%]增高(P<0.05).与对照组相比,中浓度中药组、高浓度中药组凋亡率[(19.56±2.13)%、(37.49±4.02)%比(6.50±0.80)%]增高(P<0.05);与高浓度中药组相比,高浓度中药+SB216763组凋亡率[(21.33±2.08)%比(37.49±4.02)%]下降(P<0.05).与对照组相比,中浓度中药组、高浓度中药组Wnt3a、3-catenin的mRNA(0.64±0.06、0.31±0.03比1.00±0.00,0.70±0.07、0.36±0.04 比 1.00±0.00)和蛋白(0.54±0.05、0.26±0.03 比 0.89±0.09,0.67±0.07、0.34±0.03 比0.95±0.10)表达及 Bcl-2 蛋白(0.58±0.06、0.28±0.03 比 0.83±0.08)表达下降,Bax 蛋白(0.56±0.06、0.78±0.08比0.27±0.03)表达增高(P<0.05);与高浓度中药组相比,高浓度中药+SB216763组Wnt3a、3-catenin的mRNA(0.57±0.06 比 0.31±0.03,0.65±0.07 比 0.36±0.04)和蛋白(0.50±0.05 比 0.26±0.03,0.62±0.06 比0.34±0.03)表达及 Bcl-2 蛋白(0.55±0.06 比 0.28±0.03)表达增高,Bax 蛋白(0.61±0.06 比 0.78±0.08)表达下降(P<0.05).与模型组相比,高剂量中药组裸鼠肿瘤体积[(603.27±85.41)mm2比(862.46±134.22)mm]显著减小(P<0.05);与高剂量中药组相比,高剂量中药+SB216763组裸鼠肿瘤体积[(362.44±54.66)mm2比(603.27±85.41)mm]显著增高(P<0.05).结论 通道开结方可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制EC细胞的恶性生物学行为.