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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    INHβB、FSHR和LHR在牦牛有腔卵泡中的表达与分布

    王军乾赵凌潘阳阳王萌...
    334-340页
    查看更多>>摘要：抑制素(inhibin,INH)、促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)和促黄体素(luteinizing hormone,LH)对于卵泡发育具有重要影响.本研究通过qPCR和Western blot技术分别检测INHβB、FSH受体(FSH receptor,FSHR)和LH受体(LH recepter,LHR)基因及蛋白在健康牦牛(Bos grunniens)不同直径有腔卵泡中的表达,同时采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测三者在牦牛有腔卵泡中的分布.结果显示,INHβB基因和蛋白表达量随着卵泡直径的增大呈先上升后下降的趋势,在大卵泡(直径5～8 mm)中表达量最高(P<0.05);FSHR在大卵泡中的基因和蛋白表达量显著高于其他直径的卵泡(P<0.05),在其他不同直径卵泡中的表达差异不显著;LHR基因和蛋白表达量随着卵泡直径的增大而不断上升,在极大卵泡(直径>8 mm)中表达量最高(P<0.05).IHC结果显示,INHβB、FSHR和LHR主要分布于卵泡颗粒细胞、卵丘细胞和卵泡膜.上述结果提示,INHβB可能对牦牛卵泡发生、闭锁或排卵有重要影响,FSHR和LHR可能增强FSH和LH对卵泡生长发育的作用.本研究为提高牦牛繁殖效率提供参考依据.

    牦牛有腔卵泡抑制素βB(INHβB)促卵泡素受体(FSHR)促黄体素受体(LHR)

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    湖羊GLP2R基因多态性及其与内脏重量的关联分析

    黄永亮王维民汪晓娟王国秀...
    341-349页
    查看更多>>摘要：胰高血糖素样肽-2受体(glucagon-like peptide-2 receptor,GLP2R)是调控机体能量平衡的关键分子,可能对绵羊(Ovis aries)器官发育和生长性能具有重要影响.本研究旨在研究湖羊GLP2R基因单核苷酸多态性与屠宰性能以及心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等内脏器官重量的关联性.首先利用qPCR分析GLP2R基因在不同组织中的表达谱,进一步利用竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)分型技术对1351只具有完整系谱的湖羊公羔GLP2R基因位点多态性进行检测,并与羔羊的屠宰性能和内脏器官重量进行关联分析.结果表明:GLP2R基因在湖羊多种组织中广泛表达,且在肾脏和瘤胃组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05).在GLP2R基因外显子g.34409249 G>A位点存在3种基因型GG、GA和AA,表现为中度多态(0.25<PIC<0.50),群体中该位点并未处于哈代温伯格平衡状态(P<0.05).GLP2R基因的单核苷酸多态性与湖羊的心脏、肺脏和肾脏重量关系密切,GG基因型群体心脏、肺脏和肾脏重显著高于AA基因型群体(P<0.05).综上所述,GLP2R基因在外显子g.34409249 G>A的突变位点可作为心脏、肺脏和肾脏器官发育的候选分子标记位点,为湖羊的选育工作提供了理论支持.

    湖羊胰高血糖素样肽-2受体(GLP2R)基因多态性内脏重量关联分析

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    稳定表达兔ANXA2的RK13细胞系的建立及其对RHDV吸附研究

    龙翠琴武小椿岳亚辉张宏燕...
    350-360页
    查看更多>>摘要：兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是兔(Oryctolagus cuniculus)的一种高致死性传染病,其由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起.膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)与多种病毒的感染过程密切相关.为探究兔ANXA2在RHDV侵染兔肾细胞(rabbit kidney cell,RK13)过程中的作用,本研究利用PCR扩增获得兔ANXA2基因片段,构建真核表达载体pCD513B-ANXA2,并将其与包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG转染至293T细胞,包装出含ANXA2基因的慢病毒颗粒并感染RK13,利用嘌呤霉素筛选稳定过表达ANXA2蛋白的细胞株RK13-513B-ANXA2;应用qPCR和Western blot检测ANXA2基因及其蛋白的表达情况;设计合成siRNA并转染RK13,进而分析基因表达情况;以RHDV感染RK13-513B-ANXA2细胞株2 h后,采用qPCR、免疫荧光(immunological fluorescence assay,IFA)和Western blot检测RHDV吸附量的相对变化.结果表明,利用慢病毒载体包装获得滴度较高的病毒颗粒,其滴度达5.0×107～1.0×108 TU/mL;RK13-513B-ANXA2细胞中ANXA2基因及其蛋白表达量均极显著增加(P<0.01);过表达ANXA2蛋白的RK13对RHDV的吸附作用明显增加(P<0.01),干扰ANXA2蛋白表达可显著下调RHDV对RK13的吸附作用(P<0.05).本研究结果提示ANXA2可能参与RHDV对宿主细胞的感染,为进一步探究RHDV感染宿主细胞的机制提供了参考.

    兔出血症病毒慢病毒载体膜联蛋白A2(ANXA2)兔肾细胞(RK13)

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    鸡VVD候选基因ST3GAL4甲基化水平与ALP活性和基因表达的关系

    马岩超李建增张露洁蔡春霞...
    361-369页
    查看更多>>摘要：肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity,VVD)是肉鸡(Gallus gallus)养殖业中最常见的腿病.为了探究VVD相关基因ST3β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶4(ST3β-galactosideα-2,3-sialyltransferase 4,ST3GAL4)启动子区甲基化水平与血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和基因表达的关系,选用VVD和正常肉鸡检测其血清ALP活性,采用qPCR技术检测ST3GAL4基因在不同组织中的差异表达,筛选差异表达组织,进一步利用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测ST3GAL4基因在血液和差异表达组织中的甲基化水平.结果表明,VVD组ALP活性显著低于正常组(P<0.05),腿肌ST3GAL4基因的表达量显著高于正常组(P<0.05).甲基化水平检测结果表明:在血液中,VVD组ST3GAL4启动子区总体甲基化水平高于正常组(P=0.051),CpG25甲基化差异显著(P<0.05);在腿肌组织中,VVD组ST3GAL4启动子区总体甲基化水平极显著低于正常组(P<0.01),CpG11、CpG14、CpG15甲基化差异达到显著水平(P<0.05).ST3GAL4启动子区转录因子预测结果显示:关键位点CpG15可能与转录因子CRE结合蛋白1(cAMP response element binding protein 1,CRE-BP1)、cAMP应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白(cytoplasmic polyadenylation element binding protein,CPE bind)相结合,关键位点CpG25可能与转录因子特异蛋白1(specificity protein 1,Sp1)和激活蛋白-2α(activator proein-2α,AP-2α)相结合.相关性分析结果表明,血液ST3GAL4启动子区关键位点CpG25甲基化水平和血清ALP活性呈负相关,腿肌组织ST3GAL4启动子区关键位点CpG15甲基化水平和基因表达量也呈负相关.本研究揭示了VVD肉鸡ST3GAL4基因启动子区甲基化水平与血清ALP活性、基因表达水平存在一定联系,为肉鸡抗病育种工作提供参考数据.

    鸡肢体内外翻畸形(VVD)ST3β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶4(ST3GAL4)甲基化碱性磷酸酶(ALP)基因表达

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    小管福寿螺HSF和HSP基因家族鉴定及其在温度胁迫下的表达模式

    曹梦宇范月圆尹传林俞晓平...
    370-382页
    查看更多>>摘要：小管福寿螺(Pomacea canalicata)是全球性入侵生物,对环境胁迫的耐受力强,目前已经入侵并扩散到我国16个省市和地区.热激蛋白(heat shock protein,HSP)是生物体响应环境胁迫而产生的一类重要的分子伴侣蛋白,环境因子刺激能诱导其表达以应对机体产生的不良影响,而热激因子(heat shock factor,HSF)是调节热激蛋白基因转录的关键因子.为了探讨HSF和HSP基因在福寿螺温度耐受性调节中的作用,本研究利用生物信息学方法,从小管福寿螺及其同属的斑点福寿螺(P.maculata)、或同科大羊角螺(Lanistes nyassanus)和非洲螺(Marisa cornuarietis)中各鉴定出1个HSF1基因,分别鉴定出63、66、67和64个HSP基因.其中,HSF1基因在4种螺中氨基酸长度和基因结构类似,基因分化较低;HSP基因家族成员数量在4种螺基因组中差异不明显,但是亚家族组成差异较大,其中HSP90基因在4种螺中比较保守,HSP20基因变化较大,HSP40基因在家族中成员最多.针对小管福寿螺不同温度胁迫下的鳃、足肌、肝和卵巢4个组织的转录组数据进行分析,结果显示,HSF1基因在4种组织中表达量从高到低依次是鳃、足肌、肝和卵巢,在高温胁迫下(40℃)不同组织中均高表达,在足肌和肝组织中表达模式较为一致.HSP基因表达热图显示有17个HSP基因在高温胁迫下在4个组织中均出现特异性高表达,其中12个基因与qPCR结果一致.本研究为深入解析小管福寿螺HSF和HSP基因参与其温度耐受的分子机制提供了基础资料.

    福寿螺热激转录因子(HSF)热激蛋白(HSP)温度胁迫

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    用于灰茭鉴别的菰黑粉菌SNP位点挖掘及验证

    吴骏成葛鑫涛杨梦飞叶子弘...
    383-392页
    查看更多>>摘要：茭白作为我国重要的水生蔬菜,田间近20％的灰茭比例对其产量造成了严重影响.研究表明,田间正常茭和灰茭两种表型的产生与菰黑粉菌(Ustilago esculenta)菌株分化密切相关,由T型菰黑粉菌侵染菰(Zizania latifolia)所致.由此,本研究通过重测序技术,经SNP calling和SNP的过滤获得在MT型和T型菰黑粉菌中具有差异性的129494个SNP位点后,通过哈德-温伯格平衡检测和短片段筛除策略,得到了具有T型菰黑粉菌特异性的SNP位点647个.最后采用随机化原则挑选48个位点,设计特异性引物并用等位基因特异性PCR(allele specific PCR,AS-PCR)鉴定筛选出了其中准确率高的8个位点用于田间测试.结果表明,采用8个特异性位点组合分析茭白种苗的T型菰黑粉菌并剔除灰茭鉴别结果阳性的种苗,可将灰茭比例降低37.59％.此研究为进一步提高良种繁育中种苗纯度及后续种苗质量检测提供了技术支持.

    茭白菰黑粉菌SNP等位基因特异性PCR(AS-PCR)灰茭鉴别

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    猪脂肪沉积和脂肪酸组成营养调控及相关机制研究进展

    蒋苏苏张国华卢建雄
    393-403页
    查看更多>>摘要：体脂含量和分布是决定猪(Sus scrofa)经济性状的主要因素之一.皮下脂肪影响胴体品质,肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)与猪肉嫩度、多汁性和风味等肉质性状密切相关.皮下脂肪与肌内脂肪形成遗传相关,因此,通过营养途径在保持或降低背膘厚的同时,改善肌内脂肪含量和脂肪酸组成,提高猪肉感官品质和营养价值,受到人们的广泛关注.本文就日粮能量和蛋白质水平、氨基酸、多不饱和脂肪酸等对猪皮下和肌内脂肪沉积和脂肪酸组成的影响及其差异调控的机制进行综述,为采取营养措施改善猪肉品质提供参考.

    营养调控脂肪能量蛋白质不饱和脂肪酸

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    畜禽微生物-肠-脑轴调节机制研究进展

    耿丹丹李潇凡毕瑜林江勇...
    404-415页
    查看更多>>摘要：微生物-肠-脑轴(microbiota-gut-brain axis,MGBA)是动物机体最主要的生理代谢调节机制之一.肠道菌群在肠道与大脑通过神经和内分泌等物质介导的双向应答系统中发挥着关键作用.目前,MGBA在畜禽营养代谢方面的研究已有不少报道,但在畜禽生产应用和功能性疾病方面研究较少.本文从微生物及其代谢物与宿主肠道、神经内分泌系统、免疫系统之间的联系入手,综述了畜禽MGBA调节机制的研究进展,以期为畜禽MGBA的研究应用提供新思路,达到科学高效养殖的目的,从而提高畜禽经济效益与动物福利,促进畜禽养殖业高效健康发展.

    畜禽肠道微生物肠-脑轴调节机制

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    CRISPR/Cas9介导敲除小鼠胚胎成纤维细胞IGF-1R基因的方法建立与验证

    于志勇刘萌萌姚枭洋胡学远...
    416-424页
    查看更多>>摘要：胰岛素样因子1型受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)基因在哺乳动物的生长发育和代谢中发挥着重要作用.本研究通过Gibson无缝链接(Gibson assembly)和重叠延伸PCR(genes plicing by overlap extension PCR,SOE PCR),利用pSMART LCKan载体将向导RNA(small guide RNA,sgRNA)插入lentiCRISPR v2质粒进行改造,构建IGF-1R基因敲除载体,通过菌液PCR、双酶切、基因测序对敲除载体进行评估;将该载体转染至小鼠(Mus musculus)胚胎成纤维细胞中,通过Western blot比较敲除组和对照组细胞IGF-1R蛋白表达量.结果表明,IGF-1R基因敲除载体构建成功;敲除组细胞IGF-1R蛋白表达量极显著降低(P<0.01),表明成功敲除了小鼠胚胎成纤维细胞中IGF-1R基因.本研究改进了CRISPR/Cas9敲除系统表达载体的构建过程,为进一步在细胞层次研究IGF-1R基因的作用机制提供有力工具.

    CRISPR/Cas9胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)载体构建

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    双向启动子探针载体的构建及其在谷氨酸棒杆菌中的应用

    曹煜余心宇刘秀霞白仲虎...
    425-435页
    查看更多>>摘要：双向启动子(bidirectional promoters,BDPs)为自然界常见表达元件之一,能够为遗传电路设计、代谢途径组装和优化提供新工具,但目前缺乏针对BDPs的高通量筛选手段.为了高通量筛选性能优越的BDPs,用于代谢工程中的多基因调控,本研究构建了一种BDPs活性探针载体p19BDP.该探针基于绿色荧光瞬时表征蛋白传感器蛋白1(green fluorescent sensor for transiently expressed proteins 1,gSTEP1)和瞬时表征蛋白传感器蛋白质标签(sensor for transiently expressed proteins tag,STEPtag)相互作用后会产生荧光的原理,以"头对头"的方式将gSTEP1基因与STEPtag基因连入p19-0质粒(删除tac启动子的pXMJ19质粒改造获得)获得探针载体,在两个基因中间插入BDPs序列后,通过检测荧光信号初步表征BDPs活性.通过转录组数据分析筛选出了8个谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中的BDPs,利用探针载体p19BDP对其活性进行表征,其中两个诱导型启动子BDPcat和BDPicl的荧光值较诱导前分别提高了15.9倍和6.2倍,且在一定范围内荧光强度与诱导剂浓度呈正相关;其他6个内源BDPs(BDP1～BDP6)中,BDP6的荧光强度是对照启动子BDPcat(未诱导)的6.8倍.该探针载体不影响菌体生长,且gSTEP1/STEPtag复合物形成后其荧光值保持稳定.以上结果表明,探针载体p19BDP能够灵敏、有效地表征谷氨酸棒杆菌中BDPs强度.本研究为谷氨酸棒杆菌高通量挖掘天然BDPs提供了有效工具,同时为原核生物中BDPs筛选提供了新的思路.

    谷氨酸棒杆菌探针载体双向启动子诱导型启动子

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