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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    长江刀鲚FABP7基因遗传多态性及其与生长性状的相关分析

    于爱清施永海严银龙
    1899-1913页
    查看更多>>摘要：长江刀鲚(Coilia ectenes)是我国重要的经济鱼类,目前其自然种质资源急剧衰退,探究其脂肪酸结合蛋白7(C.ectenes fatty acid-binding proteins 7,CeFABP7)基因连锁SNP位点与其生长性状的相关性,对于其生长性状的遗传改良及新品种的培育具有重要作用.本研究基于长江刀鲚的转录组数据,利用基因克隆技术获取CeFABP7基因的cDNA全长序列和基因组DNA序列,对其核心选育F3代群体的20个具有极端生长表型个体的CeFABP7基因全长序列直接测序,筛选获得该基因上的SNP位点后,再利用直接测序法或SnaPshot法对同批次随机选取的100尾长江刀鲚进行基因分型,最后通过最小二乘法分析基因多态性与长江刀鲚生长性状的相关性.结果显示,该基因cDNA全长1295 bp,ORF由399个核苷酸组成,编码132个氨基酸;基因组DNA全长1899 bp,包括4个外显子和3个内含子;共检测到5个SNP突变位点和1个TGT插入/缺失突变(I/D),分布于5′-非编码区、第1内含子和第3内含子;位点g.276C＞G与长江刀鲚的体长、体高和体质量性状均显著相关(P＜0.05),位点g.306A＞C、g.747C＞T和g.825C＞T与长江刀鲚的体质量和体高性状显著相关(P＜0.05),位点g.1447A＞T和g.1532I＞D由于部分基因型个体数量较少,显示与生长性状的相关性不显著;6个位点对长江刀鲚养殖群体遗传分析显示,长江刀鲚养殖群体的平均观测杂合度(observed heterozygosity,Ho)、平均期望杂合度(expected heterozygosity,He)和平均多态信息含量(polymorphic information of content,PIC)分别为0.257、0.339和0.275.长江刀鲚FABP7基因上的位点g.276C＞G有望成为剔除劣质长江刀鲚繁育亲本的重要候选分子标记,本研究对长江刀鲚的分子标记辅助育种具有理论指导意义.

    长江刀鲚脂肪酸结合蛋白7(FABP7)基因生长性状单核苷酸多态性关联分析

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    福寿螺SOX9L基因的克隆与表达分析

    张爽苏靖景王欣慧张颖...
    1914-1923页
    查看更多>>摘要：福寿螺(Pomacea canaliculata)是中国的16种危害最大的外来入侵物种之一.SOX9(SRY-related HMG box gene 9)是一类与早期胚胎发育有关的SOXE亚族基因.为探究福寿螺SOX9基因的功能,以不同发育阶段的福寿螺—仔螺(rankⅡ)、中螺(rankⅢ)和雌雄成螺(rankⅣ)为材料,在转录组测序的基础上,采用RT-PCR技术克隆得到福寿螺SOX9类似物基因的cDNA序列,命名为PcSOX9L(GenBank No.OP564918),并对其进行生物信息学和表达特性分析.结果表明,PcSOX9L基因包含1个1701 bp的开放阅读框,编码566个氨基酸的假定蛋白,并含有2个保守结构域,分别是Sox-N和HMG-box-domain;PcSOX9L与其他动物SOX9蛋白的氨基酸序列相似性为52.72%～82.84%.qRT-PCR分析显示,PcSOX9L基因在雌雄成螺的性腺、肝脏、鳃、外套膜、腹足和雌性成螺的蛋白腺组织中均有表达,其中,在雄性成螺肝脏中表达量最高,且极显著高于雌性成螺的肝脏组织(P＜0.01);在性腺组织中,雄性成螺的精巢比雌性成螺卵巢中的表达量高,但是差异不显著;PcSOX9L在从仔螺、中螺到性成熟成螺的3个不同发育阶段中均有表达,在仔螺中表达量最高;同时,PcSOX9L表达量在向雄性成螺发育的3个阶段中依次为仔螺＞雄性成螺＞中螺;在向雌性成螺发育的3个阶段中依次为仔螺＞中螺＞雌性成螺,提示该基因可能在福寿螺早期胚胎发育和性别决定中发挥作用.本研究为进一步分析SOX9基因在福寿螺性腺发育和性别决定中的作用机制提供基础资料.

    福寿螺SOX9(SRY-relatedHMGboxgene9)胚胎发育性别决定

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    NbMVKa与新竹番茄曲叶病毒AV2蛋白互作对病毒致病性的影响

    李丁山韩星林文忠查晴辰...
    1924-1934页
    查看更多>>摘要：单组分双生病毒V2蛋白在病毒侵染过程中行使重要功能,而双组分双生病毒AV2蛋白功能的研究相对较少.为揭示双组分双生病毒新竹番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Hsinchu virus,ToLCHsV)AV2蛋白功能,本研究利用邻近依赖的生物素鉴定(proximity-dependent biotin identification,BioID)-质谱联用技术,在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中初步筛选出与AV2邻近的多个寄主蛋白.利用酵母双杂交(yeast two hybrid,YTH)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)验证了本氏烟甲羟戊酸激酶a(N.benthamiana mevalonate kinase a,NbMVKa)和ToLCHsV-AV2存在互作.利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默技术,将ToLCHsV侵染性克隆接种NbMVKa沉默的本氏烟,接种10d后,NbMVKa沉默的本氏烟症状不明显,而未沉默植株表现叶片卷曲,同时利用Southern blot分析发现,沉默植株的病毒DNA积累量相对减少;接种20d后,NbMVKa沉默的本氏烟和未沉默植株症状基本一致.结果表明,NbMVKa可能通过与ToLCHsV-AV2互作而对病毒致病起正调控的作用.本研究结果为进一步阐明双组分双生病毒AV2蛋白功能提供理论依据.

    新竹番茄曲叶病毒(ToLCHsV)AV2蛋白邻近依赖的生物素鉴定(BioID)本氏烟甲羟戊酸激酶a(NbMVKa)

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    广东番木瓜曲叶病毒和一品红曲叶病毒致病性分析

    李景远林文忠李丁山马崇欢...
    1935-1943页
    查看更多>>摘要：近年来,广东番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl Guangdong virus,PaLCuGDV)和一品红曲叶病毒(Euphorbia leaf curl virus,EuLCV)经常在百香果(Passiflora edulis)上被鉴定.本研究从福建地区表现典型双生病毒危害症状的百香果上扩增得到该2种病毒的全长序列,分别为2732和2745 bp;为明确PaLCuGDV和EuLCV的致病性,利用同源重组技术构建了 2 种病毒的侵染性克隆,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法接种本氏烟(Nicotiana benthamiana),结果发现,接种EuLCV的本氏烟表现出明显矮化且顶端叶片畸形卷曲症状,受病害危害明显重于接种PaLCuGDV,后者仅表现新叶稍微卷曲和叶片黄化;2种病毒混合侵染,受病害危害重于单独接种EuLCV或PaLCuGDV.Southern blot结果显示,PaLCuGDV和EuLCV单独及混合接种的烟草均有较高的病毒积累量.本研究首次构建了PaLCuGDV的侵染性克隆,并发现EuLCV和PaLCuGDV复合侵染会加重病害症状.本研究为解析PaLCuGDV和EuLCV的致病机制提供参考.

    广东番木瓜曲叶病毒(PaLCuGDV)一品红曲叶病毒(EuLCV)侵染性克隆百香果

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    分子伴侣TF促进塞内卡病毒VP2蛋白在大肠杆菌表达

    杨锐茹毅郝荣增李亚军...
    1944-1955页
    查看更多>>摘要：A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新近流行的小RNA病毒,严重危害着全球养猪业的健康发展.SVA病毒结构蛋白2(viral structural protein 2,VP2)在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用.为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2,并系统分析其免疫原性,本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础,构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2.然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,利用分子伴侣TF(trigger factor)在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性,诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白.纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后,免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),通过间接ELISA检测血清抗体水平,病毒中和试验测定中和抗体滴度,流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群,以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况.结果表明,利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白,并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应,免疫组小鼠的血清抗体效价可达1∶32000,中和抗体水平可达1∶128,免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组(P＜0.001),干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组(P＜0.001).本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白,且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性,能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据.

    A型塞内卡病毒(SVA)病毒结构蛋白2(VP2)原核表达分子伴侣可溶性表达免疫原性

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    miRNA调控畜禽附睾生物功能的研究进展

    郭世浩曹骏逸盖凯丛百林...
    1956-1964页
    查看更多>>摘要：公畜禽的繁殖性能和精液品质对畜牧生产具有重要意义,与母畜禽受胎率、产仔数、成活率等密切相关.附睾作为重要的繁殖器官,负责精子的浓缩、成熟(包括精子活力的获得和受精能力)、保护和储存.miRNA(microRNA)是一类长度约22 nt的非编码单链RNA分子,与畜禽附睾的一系列生理过程密切相关,参与调控精子活力、精子成熟、精子细胞凋亡、离子通道活性、铜离子解毒等在内的不同生物过程.本文总结了哺乳动物与禽类附睾组织结构和功能的异同,综述了miRNA在调控畜禽附睾中精子活力、成熟、细胞凋亡、离子转运等生物学功能研究进展,为miRNA在附睾中的调控机制研究和种公畜繁殖性能的遗传育种研究提供参考.

    畜禽附睾miRNA精子成熟

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    种子内生菌促生机制和抗病机理研究进展

    翟凯辉张影影高夕全
    1965-1979页
    查看更多>>摘要：在植物-微生物互作过程中,由病原微生物引起的病害严重影响作物的产量和品质,而植物组织中的有益内生菌则在植物促生和抗病反应中发挥着重要作用,其中,丰富多样的种子内生菌正越来越受到人们的关注和重视.研究表明,内生菌通过与宿主植物的共进化,在种子中定植并进行世代间垂直传播,与宿主植物形成互惠共生体,在植物生命过程的各个阶段发挥促生和抗病等作用.但相比于根际微生物,种子内生菌受宿主遗传和环境因素等影响的机制、参与植物促生、抗病的功能和机制等方面的研究还不够深入.本文在介绍种子内生菌的种类和传播特征等内容的基础上,对种子内生菌在植物促生、与病原菌的互作机制、种子内生菌在植物抗病中的功能和应用等方面的研究进展进行了阐述,并针对当前种子内生菌研究中可能存在的问题对将来的可能研究方向提出建议,以期为在作物改良中开发和利用种子内生菌资源提供理论参考.

    微生物组种子内生菌内生菌-病原菌互作促生抗病反应植物-内生菌共生体

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    基于农杆菌介导的茄子枯萎病菌遗传转化体系建立及GFP标记菌株的构建

    严亚琴胡天华王五宏胡海娇...
    1980-1988页
    查看更多>>摘要：由尖孢镰刀菌茄子专化型(Fusarium oxysporum f.sp.melongenae)引起的茄子(Solanum melongena)枯萎病严重制约茄子的生产,其致病机制尚不明确.本研究以茄子枯萎病菌的分生孢子为转化受体,利用携带GFP表达载体pCAMsgfp的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化茄子枯萎病菌,建立并优化了农杆菌介导的茄子枯萎病菌遗传转化体系.结果表明,当农杆菌光密度(optical density)值为0.5时,在200 μmol/L乙酰丁香酮诱导条件下,与浓度为1×106个/mL的病原菌分生孢子悬浮液等体积混合后,在共培养温度为25℃～28℃条件下共培养48h,茄子枯萎病菌的转化效率最高可达319±10.21个转化子/106个孢子.GFP的特异性引物PCR鉴定结果以及荧光观察表明GFP基因能够正常表达.本研究建立并优化了根癌农杆菌介导的茄子枯萎病菌的遗传转化体系,并获得了遗传稳定的GFP标记菌株,为病原菌与茄子互作的机制研究提供技术支撑.

    茄子枯萎病尖孢镰刀菌茄子专化型农杆菌介导的遗传转化GFP

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    浙贝母干腐病病原真菌分子鉴定

    张羽加李吉二温思思徐云飞...
    1989-1998页
    查看更多>>摘要：道地药材浙贝母(Fritillaria thunbergii)是浙江省金华市、丽水市等地重要的经济作物之一.近年来真菌性病害频发,其中干腐病发病严重,影响浙贝母产量和质量.本研究采用病组织分离法在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上分离纯化浙贝母干腐病病原真菌;采用菌落形态、菌丝及孢子形态观察法初步鉴定病原真菌;分别用核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、翻译延伸因子基因(translation elongation factor 1 alpha,TEF-1α)、RNA聚合酶Ⅱ亚基(the second largest subunit of the nuclear RNA polymerase enzymeⅡ,RPB2)、热激蛋白60(heat shock protein,HSP60)、3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,G3PDH)和茄病镰刀菌特异性序列(ITS-specific fragment of Fusarium solani,SOL)等6个基因的序列对病原真菌基因组DNA进行PCR扩增并测序,在GenBank中进行同源性比对并构建系统发育树,确定菌种种类.采用有创菌饼法和无创菌饼法检测真菌的致病性.结果表明,从浙贝母干腐病病株中分离得到14株真菌分离物,通过PCR扩增和测序分析,最终鉴定出4种病原真菌;通过构建发育树以及致病性实验证明了致病菌分别为茄病镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、变红镰刀菌(F.incarnatum)和木贼镰刀菌(F.equiseti).本研究明确了浙贝母干腐病致病菌亦可为变红镰刀菌和木贼镰刀菌,并经PCR扩增获得了变红镰刀菌(MN386064)和木贼镰刀菌(MN386065)的G3PDH基因的部分序列,丰富了2种镰刀菌的基因序列,同时也为后续相关研究提供比对基础.

    浙贝母干腐病病原真菌分子鉴定

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