查看更多>>摘要:目的:探讨Toll样受体4(TLR4)-核因子κB(NFκB)-P38及C-C趋化因子受体5(CCR5)-(三磷酸肌醇)IP3信号通路对丙泊酚药物依赖大鼠胶质细胞神经免疫的影响.方法:体外实验:使用细胞计数试剂-8(CCK-8)试剂盒检测并比较丙泊酚药物依赖对BV2(小鼠小胶质细胞)细胞活性的影响;流式细胞术比较丙泊酚药物依赖对BV2细胞凋亡率的影响;比较不同浓度丙泊酚对BV2细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子配体2(CCL2)和CCL5]的影响.采用免疫蛋白印记法(WB)检测并比较TLR4、p65、磷酸化-p65(p-p65)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和p-ERK1/2蛋白表达.动物实验:利用24只SD大鼠建立丙泊酚药物依赖模型分为三组:空白组(注射等量生理盐水,n=8),丙泊酚药物依赖模型组(注射40mg/kg丙泊酚+生理盐水,n=8),异丁司特(IBU)预处理+丙泊酚干预组(注射7.5mg/kgIBU,n=8).采用条件性位置偏爱(CPP)和移动距离评估丙泊酚所致的成瘾效应.检测并比较SD大鼠模型血清细胞因子(CCL2、CCL5和TNF-α)水平以及前额叶皮质组织中相关蛋白表达.结果:与空白组比较,丙泊酚15μM干预组CCL2、CCL5和TNF-α水平升高(P<0.05);丙泊酚20 µM干预组CCL2、CCL5和TNF-α水平升高(P<0.05).与空白组比较,丙泊酚干预组CCL2、CCL5和TNF-α水平升高(P<0.05),与丙泊酚干预组对比,IBU预处理+丙泊酚干预组的CCL2、CCL5和TNF-α水平显著下降(P<0.05).与空白组比较,丙泊酚干预组和IBU预处理+丙泊酚干预组的TLR4蛋白表达显著增加,p-p65和p-ERK1/2蛋白表达显著上调(P<0.05),而p65和ERK1/2的蛋白表达变化差异无统计学意义(P>0.05).与丙泊酚干预组比较,IBU预处理+丙泊酚干预组TLR4、p-p65和p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05).与空白组比较,丙泊酚干预组CPP值显著升高(P<0.05),与丙泊酚干预组比较,IBU预处理+丙泊酚干预组CPP值显著降低(P<0.05).与空白组比较,丙泊酚干预组的移动距离组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);与丙泊酚干预组比较,IBU预处理+丙泊酚干预组也表现出降低移动距离趋势(P<0.05).在大鼠前叶额皮质组织中,与空白组比较,丙泊酚干预组CCL2、CCL5和TNF-α水平显著增加(P<0.05).与丙泊酚干预组比较,IBU预处理+丙泊酚干预组CCL2、CCL5和TNF-α水平显著降低(P<0.05).与空白组比较,丙泊酚干预组前额叶皮质组织中TLR4蛋白表达、p-p65、p-ERK1/2显著升高(P<0.05).与丙泊酚干预组比较,IBU预处理+丙泊酚干预组的前额叶皮质组织中TLR4蛋白表达、p-p65、p-ERK1/2显著降低(P<0.05).结论:TLR4-NFκB-P38及CCR5-IP3信号通路可能参与神经免疫调节在丙泊酚药物依赖中的作用.