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生物技术通讯
生物技术通讯

黄培堂

双月刊

1009-0002

swtx@263.net

010-66948856

100071

北京丰台东大街20号

生物技术通讯/Journal Letters in BiotechnologyCSTPCD
查看更多>>本刊主要报道生物技术（生物工程）及相关学科如分子生物学，分子遗传学等领域的最新科研成果与进展。设有研究报告、技术方法、综述、经验交流、专论研究快报、生物药园及知识介绍等栏目。
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    嵌合新抗原Adpgk的乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒的构建及表达

    赵振伯杨怡姝马洪涛盛望...
    1-6页
    查看更多>>摘要：目的:制备嵌合结肠癌新抗原Adpgk的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLP).方法:通过重叠PCR将新抗原编码序列插入截短型HBcAg(1～149 aa)第78、79位氨基酸编码序列之间,并将融合基因克隆至原核表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用亲和层析与超滤管纯化浓缩目的蛋白,通过Western印迹、粒径分析与透射电镜成像鉴定嵌合病毒样颗粒.结果:构建了pET-22b(+)重组表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE结果显示在30℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h即可获得高浓度的可溶性蛋白,通过亲和层析与超滤浓缩得到了纯度良好的目的蛋白;Western印迹结果表明连有His标签的目的蛋白获得表达且浓度较高;透射电镜成像可见密集的大小均一、空心的球形病毒样颗粒结构.结论:制备出浓度与纯度良好且组装正确的嵌合HBcAg VLP.

    结肠癌新抗原乙肝病毒核心抗原原核表达

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    绿原酸对人骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响

    何家恒张雨刘波施勤...
    7-11页
    查看更多>>摘要：目的:探讨绿原酸对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响.方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,细胞侵袭实验(Transwell)及细胞划痕实验检测细胞侵袭性及迁移性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞干性基因及凋亡相关基因,凋亡试剂盒检测细胞凋亡比例.结果:在100μg/mL绿原酸干预的实验组中MG63细胞增殖减慢,细胞干性基因较对照组表达降低,侵袭性及迁移性经绿原酸处理后也相应降低,抗凋亡基因Bcl-2表达下降,细胞凋亡比例增加.结论:绿原酸对MG63人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移具有抑制作用并促进MG63细胞的凋亡,有望成为治疗骨肉瘤的有效药物.

    绿原酸骨肉瘤MG63细胞凋亡

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    寨卡病毒NS2B蛋白的表达纯化及单克隆抗体制备

    吴钰彬李姝璇侯汪衡杨宏伟...
    12-18页
    查看更多>>摘要：目的:应用大肠杆菌重组表达并纯化寨卡病毒NS2B蛋白,制备抗NS2B蛋白的单克隆抗体.方法:构建携带NS2B基因的重组原核表达质粒,采用大肠杆菌ER2566作为表达菌株,以IPTG诱导表达,通过亲和层析纯化获得NS2B目的蛋白.用纯化后的NS2B蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选制备抗NS2B蛋白的单克隆抗体,并初步分析抗体的反应活性和特异性.结果:表达并纯化获得寨卡病毒NS2B蛋白,筛选获得可与NS2B蛋白结合并具有较好反应活性的单克隆抗体2H11,该单抗可识别寨卡病毒感染细胞后表达的NS2B蛋白.结论:筛选获得靶向寨卡病毒NS2B蛋白的单克隆抗体,可为后期深入开展寨卡病毒NS2B蛋白的功能和相关抗病毒药物研究提供支持.

    寨卡病毒NS2B蛋白原核表达单克隆抗体

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    沙眼衣原体CT135蛋白的表达与抗体制备

    孙志会罗声栋何泽民胡燕...
    19-23页
    查看更多>>摘要：目的:在原核表达系统中表达沙眼衣原体CT135蛋白,并制备抗体,建立CT135蛋白免疫检测方法.方法:将沙眼衣原体CT135基因(1083 bp)克隆入带有His标签的pET-32a(+)载体中,通过NdeⅠ/XhoⅠ双酶切构建CT135全长的重组质粒WT,CT135基因N端逐渐缩短的重组质粒MT1、MT2、MT3,以及CT135基因C端逐渐缩短的重组质粒MT4、MT5、MT6,在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,然后腹腔注射5周龄BALB/c雌鼠制备抗血清.结果:Western印迹使用高灵敏的二抗通过红外扫描系统检测到所有质粒可表达重组蛋白,但考马斯亮蓝染色结果显示只有MT6可高表达重组蛋白.制备纯化了MT6重组蛋白,通过腹腔注射免疫法制备了小鼠抗MT6血清.结论:大肠杆菌表达系统中,沙眼衣原体CT135蛋白的N端片段(1～374 bp)可以获得高表达.小鼠抗MT6血清的制备为后期检测沙眼衣原体CT135蛋白的表达奠定了基础.

    沙眼衣原体CT135基因蛋白表达

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    Slug慢病毒表达载体的构建及对ZR75-1细胞上皮间质转化的影响

    李华月刘婕韩洋丁丽华...
    24-28页
    查看更多>>摘要：目的:构建锌指蛋白Slug基因的慢病毒真核表达载体,研究Slug对ZR75-1乳腺癌细胞上皮间质转化及迁移的影响.方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Slug全长编码序列,将其插入pCDH表达载体,构建pCDH-Slug真核表达载体,转染293T细胞,Western印迹检测Slug的表达;将重组质粒包装慢病毒感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞,Western印迹和免疫荧光检测Slug对E-钙黏蛋白表达的影响,采用划痕实验检测Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中对细胞迁移的影响.结果:双酶切实验证明Slug慢病毒表达载体构建成功;West⁃ern印迹表明Slug在293T细胞内表达成功;稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞株构建成功;镜下观察发现,稳定表达Slug的ZR75-1乳腺癌细胞形态变为梭形;Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中可以抑制E-钙黏蛋白的表达;划痕实验发现Slug在ZR75-1乳腺癌细胞中可以促进细胞迁移.结论:构建了Slug慢病毒真核表达载体,Slug可以促进上皮间质转化,并通过调控E-钙黏蛋白表达促进细胞迁移.

    Slug基因E-钙黏蛋白真核表达乳腺肿瘤

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    F型肉毒毒素单克隆抗体的制备与鉴定

    许永亮王佳星李响孙志杰...
    29-33页
    查看更多>>摘要：目的:制备F型肉毒毒素(BoNT/F)鼠源单克隆抗体.方法:以BoNT/F重链C端(BoNT/FHc)为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后尾血效价最高小鼠的脾脏细胞与鼠骨髓瘤细胞Sp2/0在聚乙二醇作用下进行细胞融合,ELISA筛选阳性细胞孔,通过有限稀释法分离能稳定分泌抗体的细胞株.小鼠腹腔注射杂交瘤细胞制备的腹水利用Pro⁃tein G进行亲合层析纯化,SDS-PAGE检测抗体纯度,非竞争ELISA测定抗体亲和力常数,亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,PCR扩增抗体轻重链可变区基因并经Vbase软件分析抗体框架区与互补决定区(CDR)氨基酸序列.结果:经过3轮免疫后,5只小鼠尾血效价均达到1:16000,其中2号鼠尾血效价最高;杂交瘤细胞融合率为74.48％,阳性率为11.54％;2轮克隆化后筛选得到7株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,选择其中细胞培养上清效价最高的1F4制备抗体;腹水纯化后1F4抗体纯度超过95％,与BoNT/FHc抗原的亲和力常数为1.08×10-8 mol/L;亚型鉴定结果表明1F4重链和轻链分别为IgG1型和κ型,抗体可变区氨基酸序列分析显示1F4重链和轻链CDR3序列为TRHGYFPSWFAY和QQHYSTPWT.结论:筛选到一株高亲和力的鼠源单克隆抗体,为BoNT/F检测和中和抗体的研发奠定了基础.

    F型肉毒毒素单克隆抗体细胞融合抗体纯化

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    抗流感病毒单克隆抗体CR6261在糖基工程酵母中的表达及分析

    李响石萍萍王甜甜刘波...
    34-38页
    查看更多>>摘要：目的:在糖基工程酵母中表达抗流感病毒单克隆抗体CR6261,并对其进行结构分析和活性测定.方法:从GenBank获得CR6261抗体的全基因序列,构建轻重链表达载体pPICZα-CR6261-H-L,电转入糖基工程酵母,利用甲醇诱导型启动子AOX1表达CR6261抗体蛋白,通过SDS-PAGE、Western印迹筛选表达菌株,用Protein A亲和层析、Superdex200凝胶过滤柱分离纯化抗体蛋白,应用ELISA方法对纯化后的蛋白进行活性鉴定.结果:CR6261抗体蛋白分泌在培养上清中,且纯化后的蛋白与糖基工程酵母表达的流感病毒血凝素蛋白HA5、HA7有结合活性,与商业化三价流感病毒裂解疫苗亦有结合活性.结论:实现了抗流感病毒单克隆抗体CR6261在糖基工程酵母中的表达,并初步检测了其广谱活性,可为酵母表达抗体蛋白药物制备提供参考,ELISA初步评价还显示了其在诊断上的应用前景.

    流感病毒单克隆抗体CR6261糖基工程酵母流感病毒血凝素

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    乙醛脱氢酶在乳酸乳球菌中的表达与纯化

    张丹雨陈洋洋刘晓阳王佳星...
    39-43页
    查看更多>>摘要：目的:在乳酸乳球菌中重组表达乙醛脱氢酶(ALDH).方法:合成毕赤酵母ALDH基因,PCR扩增后通过重组构建pNZ8048-ALDH表达载体,电转至乳酸乳球菌NZ9000感受态,Nisin诱导表达后经Ni柱亲和层析纯化ALDH蛋白,比色法测定酶活.结果:构建了pNZ8048-ALDH表达载体,在乳酸乳球菌NZ9000中实现了ALDH的重组表达,目的蛋白占全菌蛋白的17.2％,其中可溶性表达比例为53％,重组菌株ALDH活力为0.638 U/mL,亲和层析纯化蛋白纯度约70％,比活为0.48 U/mg.结论:在乳酸乳球菌中表达并纯化获得了有活性的ALDH.

    乙醛脱氢酶乳酸乳球菌表达

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    马尔堡病毒GP蛋白C肽的抑制活性及作用机理研究

    陈文文郑文铝余硕花晨...
    44-50页
    查看更多>>摘要：目的:研究马尔堡病毒(MARV)包膜糖蛋白(GP)C肽的抗该病毒进入活性及初步作用机制.方法:选取MARV的GP2蛋白上CHR区域序列(611～637残基),合成该序列多肽(C肽)及突变体,利用pVAX1-MGP与pNL-4.3-Luc-R-E-质粒包装假病毒体系,测定各肽对马尔堡假病毒融合的抑制活性,利用圆二色谱、凝胶色谱分析C肽及其突变体对MARV的N肽的相互作用.结果:C肽对马尔堡假病毒融合抑制的IC50为32.67μmol/L,C肽突变体的IC50为9.61～33.47μmol/L,抑制活性高于C肽或与其相当;C肽与N肽形成双螺旋结构,在C肽的7元螺旋体的b、f、c、g位引入离子相互作用氨基酸可提高多肽本身的α螺旋结构含量,一些突变可提高复合物的α螺旋结构含量,但C肽与N肽混合后形成的复合物含量不高.结论:MARV的GP蛋白C肽与N肽相互作用较弱,C肽的抗病毒活性较弱,但改造后可提高活性.

    马尔堡病毒包膜糖蛋白(GP)C肽N肽抗病毒活性

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    转化生长因子β1诱导肺支气管上皮细胞发生上皮间质转化

    郭佳落继先
    51-55页
    查看更多>>摘要：目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对人肺支气管上皮细胞(HBEC)的细胞形态和上皮间质转化(EMT)标志基因表达的影响.方法:TGF-β1处理HBEC 0、1、2、3、4和5 d,观察细胞形态;运用免疫荧光实验,观察TGF-β1处理HBEC 4 d时的细胞骨架;TGF-β1分别处理0、1、3、6 h和0、1、2、3、4、5 d,提取总RNA后反转录并进行实时荧光定量PCR检测EMT标志基因α-SMA、β-catenin、SNAI1和E-cadherin的mRNA表达情况.结果:TGF-β1处理HBEC 2 d时就能够引起类似EMT的形态改变,在处理3、4和5 d时细胞形态改变尤为明显,大多数细胞变为纺锤形;免疫荧光实验结果显示,细胞骨架的分布随细胞形态发生改变;实时荧光定量PCR结果显示,SNAI1在3 h和E-cadherin在6 h的mRNA表达量显著升高;α-SMA和β-catenin的mRNA表达量在各时间点均显著降低;SNAI1和E-cadherin的mRNA表达量在1 d时显著升高,随后各时间点mRNA表达量都呈现不同程度的下降,SNAI1在3和4 d时mRNA表达量显著降低,α-SMA在2、4和5 d时mRNA表达量显著降低;E-cadherin各时间点mRNA表达量都呈现不同程度的降低,2、3和5 d的mRNA表达量显著降低;β-catenin的mRNA表达量在不同时间点均无显著变化.结论:TGF-β1刺激HBEC可观察到发生类似EMT的细胞形态改变,但EMT标志基因mRNA的表达量变化反复.

    肺支气管上皮细胞转化生长因子β1上皮间质转化基因表达细胞骨架

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