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时珍国医国药
时珍国医国药

朱保华 周虹

月刊

1008-0805

shizhenchina@163.com

0714-6224836;6225102

435000

湖北省黄石市黄石大道874号

时珍国医国药/Journal Lishizhen Medicine and Materia Medica ResearchCSCD北大核心
查看更多>>本刊以弘扬和发展中国中医药事业为特色，以探讨研究中医药传统学术及中医药在现代医学领域的最新应用成果为重点，坚持“二为”方向、理论与实践并重，普及与提高相结合，讲求科学性与实用性。是从事中医药临床、教学、科研和中医药生产专业人员发表学术见解、报道科研成果、交流工作经验的园地，是广大中医药工作者及中医爱好者的良师益友。
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    松郁安神方对失眠模型大鼠睡眠结构以及原代培养DRN 5-HT能神经元兴奋性的影响

    张娅黄俊山张一帆李星...
    1072-1076页
    查看更多>>摘要：目的 观察松郁安神方对失眠模型大鼠睡眠结构以及原代培养DRN5-HT能神经元兴奋性的影响，探讨其对失眠模型大鼠的治疗作用及机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为模型组、松郁安神方组、艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组，每组10只。松郁安神方组、艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组大鼠分别给予15。9g/(kg·d)松郁安神方、0。1mg/(kg·d)艾司唑仑、1mg/(kg·d)唑吡坦和10。3mg/(kg·d)曲唑酮灌胃，模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续14d。五组大鼠末次灌胃30min后采用电刺激法建立失眠动物模型。通过对各组大鼠脑电和肌电电极的埋藏及信号采集，进行睡眠结构分析。体外培养大鼠原代DRN 5-HT能神经元，采用免疫荧光法鉴定，分别加入模型组和松郁安神方组脑脊液，运用全细胞膜片钳实验技术记录两组原代培养DRN5-HT能神经元的内在膜特性(包括静息膜电位和膜输入阻抗)，电流诱发动作电位特征属性(包括阈值电位、幅度、超极化后电位幅度、半幅时程、上升速率和下降速率)和发放频率。结果 与模型组比较，松郁安神方组可以缩短失眠大鼠睡眠潜伏期(SOL)(P＜0。01)，延长总睡眠时间(TST)(P＜0。01)。在睡眠结构上主要表现为延长慢波睡眠(SWS)和快速动眼睡眠(REMS)(P均＜0。01)。与松郁安神方组比较，艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组均可缩短SOL(P均＜0。01)，艾司唑仑组、唑吡坦组可延长TST(P均＜0。01)，而曲唑酮组对TST影响不大(P＞0。05)，艾司唑仑组、唑吡坦组和曲唑酮组均可延长非快速动眼睡眠(NREMS)，缩短REMS(P＜0。05和P＜0。01)，但艾司唑仑组和唑吡坦组主要表现为延长快波睡眠(LS)，减少SWS(P均＜0。01)，而曲唑酮组则表现为延长SWS(P＜0。01)，对LS几乎不产生影响(P＞0。05)。与模型组相比，松郁安神方组5-HT能神经元静息膜电位(RMP)和膜输入阻抗(Rin)均明显降低(P均＜0。01)，电流诱发动作电位的阈值电压提高(P＜0。05)，动作电位的幅度、上升速率以及下降速率均降低(P＜0。05和P＜0。01)，而超极化后电位幅度和半幅时程两组比较差异无统计学意义(P均＞0。05)。与模型组相比，松郁安神方组亦能降低电流诱发的5-HT能神经元动作电位发放的频率(P＜0。01)。结论 松郁安神方可缩短SOL，延长TST。在睡眠结构上主要表现为延长SWS和REMS，在改善REMS以及恢复正常的睡眠结构方面具有明显优势，其改善睡眠的作用机制可能与抑制DRN5-HT能神经元兴奋性有关。

    松郁安神方失眠睡眠结构中缝背核5-HT能神经元兴奋性

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    4',5-二羟基-7-哌嗪甲氧基-8-甲氧基黄酮通过Bclaf1诱导肝癌细胞线粒体凋亡的作用机制研究

    孙曼卿付景皓程颢颐陈佳欣...
    1076-1082页
    查看更多>>摘要：目的 探讨 4'，5-二羟基-7-哌嗪甲氧基-8-甲氧基黄酮(4'，5-dihydroxy-7-piperazine methoxy-8-methoxy flavone，DMF)通过Bclaf1诱导肝癌细胞线粒体凋亡的作用机制。方法 利用CCK-8法检测DMF对人肝癌细胞增殖的影响;Annexin-V/FITC双染流式细胞仪检测DMF作用后人肝癌细胞凋亡率的变化;JC-1荧光探针探究DMF对肝癌细胞线粒体膜电位的作用;免疫荧光检测DMF对人肝癌细胞中Bclaf1表达情况和定位;CRISPR-Cas9技术敲除Bclaf1基因;Western blot检测DMF作用后人肝癌细胞线粒体凋亡相关蛋白的表达以及Bclaf1表达情况。结果 DMF对人肝癌细胞的增殖有抑制作用，并具有浓度-时间依赖性，DMF作用后肝癌细胞凋亡率增加，线粒体膜电位下降，线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值降低，Cleaved caspase 3、Cyt-c表达量增多。Bclaf1主要定位于细胞核内，在细胞质中有少量分布;DMF作用后Bclaf1的表达量降低，将Bclaf1敲除后，与空白对照组比较，DMF+sgRNA组线粒体凋亡现象明显，Bcl-2/Bax比值更低。结论 DMF抑制Bclaf1的表达，诱导肝癌细胞线粒体凋亡。

    4',5-二羟基-7-哌嗪甲氧基-8-甲氧基黄酮肝癌线粒体凋亡Bcl-2相关转录因子1

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    基于寄主植物影响的桑寄生胚胎发育毒性研究

    刘舒宁夏玉苹李炳昌柴子舒...
    1083-1087页
    查看更多>>摘要：目的 对桑树、柳树、油茶树、夹竹桃树、苦楝树和漆树6种寄主植物的桑寄生水提物进行斑马鱼胚胎发育毒性研究，探讨寄主植物对桑寄生药材胚胎毒性影响，为桑寄生安全用药提供理论参考。方法 以受精且发育正常6 hpf的斑马鱼胚胎为胚胎模型，采用桑树、柳树、油茶树、夹竹桃树、苦楝树和漆树6种寄主植物的桑寄生水提物梯度浓度处理斑马鱼胚胎，统计72 hpf斑马鱼胚胎的死亡率，采用Graphpad Prism 8。0软件绘制量-毒曲线，计算半数致死浓度(LC50)和10％致死浓度(LC10)。按低(1/2LC10)、中(LC0)、高(LC10)3个药物浓度组处理6 hpf斑马鱼胚胎，记录24 hpf斑马鱼胚胎在1 min内的自主运动次数，及72 hpf斑马鱼胚胎的孵化率、眼睛大小及体长。结果 桑树、柳树、油茶树、夹竹桃树、苦楝树和漆树寄主桑寄生水提物 LC50分别为:6。28、3。86、2。14、1。02、1。00、0。36 mg/mL，LC10分别为:4。77、2。76、1。16、0。67、0。62、0。25 mg/mL。与空白组相比，桑树寄主桑寄生水提物低、中、高药物浓度组斑马鱼的胚胎自主运动次数、孵化率和仔鱼眼睛大小、生长体长均没有明显变化(P＞0。05);其它5种寄主桑寄生水提物的中、高药物浓度组的斑马鱼胚胎自主运动次数明显减少，孵化率降低，仔鱼的眼睛出现明显或非常明显变小，体长明显或非常明显变短(P＜0。05，P＜0。01)。结论 除桑树寄主桑寄生水提物没有观察到明显胚胎发育毒性外，其它5种寄主桑寄生水提物对斑马鱼胚胎发育均表现出不同程度的毒性。

    桑寄生寄主斑马鱼胚胎发育毒性

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    茵陈水提物对阿霉素肾病大鼠保护作用的研究

    黄国顺雍晨祝一叶姚敏...
    1087-1091页
    查看更多>>摘要：目的 研究茵陈水提物(Water extract of Artemisiae Scopariae Herba，WAC)对阿霉素肾病(Adriamycin nephropathy，AN)大鼠的保护作用。方法 以雄性SD大鼠为研究对象，适应性喂养1周，24只大鼠随机均分为4组:空白组(Control组)、模型组(ADR组)、茵陈水提物干预组(WAC组)的低剂量组(WAC-L组)和高剂量组(WAC-H组)。除Control组外其余组建立AN模型(采用单次尾静脉注射阿霉素注射液6。5mg·kg-1)，WAC组给予茵陈水提物灌胃给药，WAC-L、WAC-H组剂量分别为1。35g/(kg·d)、4。05g/(kg。d)，所有SD大鼠均予以自由饮食、饮水，持续饲养5周。观察大鼠的一般情况;每周检测大鼠体质量;在建立模型后第3周末，采用代谢笼收集尿液，以尿蛋白定量测试盒检测尿蛋白浓度并计算24小时尿蛋白定量;麻醉处死后取肾脏拍照、称重并记录，计算肾脏指数，全自动生化分析仪检测血清生化指标(如肝、肾功能、脂质代谢以及电解质代谢等)，H&E和Masson染色观察大鼠肾组织的病理变化情况。结果 相比Control组，ADR组大鼠造模后出现精神疲倦、活动较少、毛色变黄、饮食减少、大便稀溏，且第2周出现一例死亡现象，WAC组相较于ADR组情况改善，WAC-H组明显。相比Control组，ADR组大鼠体质量增加缓慢(P＜0。05)，WAC组相较ADR组体质量增加明显，WAC-H组较为明显(P＜0。05)。相比Control组，ADR组大鼠肾重以及肾重指数增加(前者P＞0。05，后者P＜0。01)，WAC组相较模型组肾重降低(P＞0。05)，肾重指数降低(P＜0。01)，WAC-H组较为明显。与Control组相比，ADR组肾功能降低(SCR、BUN、Cys-C升高)、脂质代谢紊乱(TG，TC升高)、肝功能降低(TP、ALB降低)、电解质紊乱(K、Ca、P升高)(P＜0。01)，WAC组相较ADR组相关指标均有改善，WAC-H改善明显(P＜0。05)。HE和Masson染色结果显示ADR组大鼠肾脏结构改变，组织纤维化明显(P＜0。01)，WAC组相较ADR组均有不同程度的改善，WAC-H组改善明显(P＜0。05)。结论 茵陈水提物对AN大鼠具有保护作用，可以改善肝、肾功能以及脂质代谢、电解质代谢异常，改善肾脏病理以保护肾脏。

    茵陈肾脏保护阿霉素肾病

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    基于AGEs-RAGE轴探讨左归丸有效成分对衰老骨髓间充质干细胞的影响

    梁超杨暑晨许言午龚张斌...
    1092-1096页
    查看更多>>摘要：目的 观察左归丸中有效成分马钱苷、山奈酚对衰老骨髓间充质干细胞(BMSCs)的影响，并基于AGEs-RAGE轴进一步探讨其作用机制。方法 原代培养大鼠BMSCs，采用免疫荧光染色鉴定细胞表面标记物;MTT重复实验观察马钱苷、山奈酚对BMSCs增殖影响并确定最佳用药时间及浓度;D-半乳糖(D-gal)诱导建立衰老BMSCs模型，采用B-半乳糖苷酶染色确定最佳造模浓度并分别观察低、中、高浓度马钱苷、山奈酚对衰老BMSCs数目的影响;取P3代细胞，随机分为空白对照组、D-gal衰老造模组、D-gal+马钱苷组、D-gal+山奈酚组，采用Real-time荧光定量PCR检测衰老相关分泌表型(SASP，选取IL-6、HMGB1、GATA-4、TRAF3IP2)及衰老相关分子(p16、p21、p53)mRNA 表达，Western blot法检测RAGE、Glo1、NF-κB蛋白表达;ELISA法检测AGEs含量及Glo1活性。结果 实验浓度的马钱苷和山奈酚在24h和48h均有促进BMSCs增殖的作用，且与衰老造模组比较，低、中、高浓度的马钱苷和山奈酚都能不同程度地减少衰老BMSCs数目。与空白对照组比较，D-gal衰老造模组的IL-6、p53、p21、p16 mRNA表达都显著增高(P＜0。001，P＜0。01，P＜0。01，P＜0。05);与D-gal衰老造模组相比，马钱苷能明显降低IL-6、GATA-4 mRNA表达(P＜0。001，P＜0。05)，山奈酚则能显著降低IL-6、TRAF3IP2和p21 mRNA表达(P＜0。001，P＜0。01，P＜0。05)。与空白对照组比较，D-gal衰老造模组AGEs含量明显升高(P＜0。001)，Glo1活性显著降低(P＜0。001)，RAGE、NF-κB蛋白表达有升高的趋势;与D-gal衰老造模组比较，山奈酚能显著降低RAGE蛋白表达(P＜0。05)，马钱苷和山奈酚均能明显上调Glo1 的活性(P＜0。001)、降低 NF-κB 蛋白表达(P＜0。05，P＜0。01)及 AGEs 含量(P＜0。01，P＜0。001)。结论 左归丸中有效成分马钱苷、山奈酚均能促进BMSCs增殖，减少SASP和衰老相关分子的表达从而延缓BMSCs衰老，其机制可能与调节AGEs-RAGE轴及其下游分子表达有关。

    左归丸马钱苷山奈酚骨髓间充质干细胞衰老

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    小儿久咳合剂对感染后咳嗽大鼠肺组织MCP-1、MIP-1β表达的影响

    刘靖雷罗银河王孟清李霁航...
    1097-1100页
    查看更多>>摘要：目的 探讨小儿久咳合剂对感染后咳嗽大鼠肺组织MCP-1和MIP-1β表达的影响及作用机制。方法 SPF级SD雄性大鼠40只，随机分为空白组、模型组、中药组和西药组，每组各10只。除空白组外，其余组均采用烟熏+脂多糖滴鼻+辣椒素雾化连续干预20d，以建立感染后咳嗽模型。通过观察最后1次辣椒素雾化后大鼠行为变化判断造模是否成功。造模成功后，各组分别给予对应药物进行灌胃，剂量为1ml/100g，每天1次。空白组、模型组给予生理盐水，中药组给予组给予浓度为0。45g/mL的小儿久咳合剂水煎液，西药组给予浓度为0。08mg/mL的孟鲁司特钠稀释溶液。连续灌胃15d后处死大鼠，使用HE、PAS及Masson染色处理其肺组织，以明确大鼠肺组织气道炎症细胞浸润、气道黏液储备及气道胶原沉积情况;Elisa法检测大鼠血清中7-KC浓度;TBA法检测大鼠血清中MDA浓度;Western blot法检测大鼠肺组织中MCP-1、MIP-1β蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺组织周围炎症细胞浸润，上皮细胞化生，炎性黏液较多，气道壁增厚，气道胶原沉积广泛;血清中7-KC、MDA浓度及肺组织中MCP-1、MIP-1β蛋白表达水平均显著升高(P＜0。01)。与模型组相比，中药组及西药组肺组织病理情况均明显改善;血清中7-KC、MDA浓度及肺组织中MCP-1、MIP-1β蛋白表达水平均明显下降(P＜0。01)。与中药组相比，西药组肺组织病理改善情况与中药组相当，西药组血清中7-KC、MDA浓度及肺组织MCP-1、MIP-1β蛋白表达水平下降程度较为明显(P＜0。05)。结论 小儿久咳合剂能够抑制感染后咳嗽大鼠肺组织MCP-1、MIP-1β的表达，从而改善气道炎症，其机制可能为小儿久咳合剂通过抗氧化作用改善氧化应激，降低了血清7-KC的水平，进而使MCP-1、MIP-1β的表达受到抑制。

    感染后咳嗽氧化应激单核细胞趋化蛋白-1巨噬细胞炎症蛋白-1β气道炎症小儿久咳合剂

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    HPLC-DAD法同时测定褐变金银花中15种活性成分含量

    孙丹于晓段言峰范剑...
    1101-1105页
    查看更多>>摘要：目的 阐释褐变对金银花药材质量的影响。方法 采用HPLC-DAD法比较褐变和正常金银花样品中15种成分(5种酚酸类成分、4种黄酮类成分、6种环烯醚萜苷类成分)的含量，采用SIMCA14。1软件进行主成分(PCA)、正交偏最小二乘法分析(OPLS-DA)。结果 褐变后，金银花中酚酸类成分、黄酮类成分及15种成分的总含量均显著下降，环烯醚萜苷类成分中断氧化马钱子苷、莫诺苷和獐牙菜苷含量及6种环烯醚萜苷类成分总含量也显著下降。PCA和OPLS-DA分析结果表明，正常样品与褐变样品各聚为一类，差异显著，VIP分析结果表明，绿原酸、异绿原酸A、断马钱子酸是区别正常样品和褐变样品的主要差异成分。结论 褐变会导致金银花药材质量下降，在产地加工过程中应采用适宜方法降低褐变发生率，提升临床用金银花质量。

    金银花褐变环烯醚萜苷酚酸黄酮

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    葛根芩连汤含药血清对结直肠癌细胞增殖及其糖酵解关键酶的影响

    蔡蓉胡作为王上肖柳...
    1106-1109页
    查看更多>>摘要：目的 研究了葛根芩连汤(GQD)含药血清对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响，并结合其糖酵解关键酶的酶活变化，探讨GQD介导肿瘤葡萄糖代谢的可能性。方法 MTS和平板克隆探究不同剂量的GQD含药血清对SW480、HCT-116细胞的增殖影响，采用流式细胞术检测其细胞凋亡，试剂盒法检测葡萄糖消耗能力及糖酵解关键酶PFK和LDH的酶活变化。结果 MTS检测不同剂量的GQD含药血清对SW480、HCT-116细胞增殖均存在抑制效果，存活率随着剂量的上升而降低(P＜0。05)，且随着处理时间的延长抑制程度上升(P＜0。05);平板克隆结果进一步阐述SW480、HCT-116细胞增殖能力随着GQD含药血清的剂量的增加而愈加受到抑制;流式检测其凋亡率也随着GQD剂量的上升而上升;之后为探究GDQ含药血清介导肿瘤葡萄糖代谢的可能性，再结直肠癌细胞加入不同剂量的GDQ含药血清处理后发现，其葡萄糖消耗能力受到不同程度地抑制(P＜0。05);进一步检测其糖酵解关键酶PFK和LDH的酶活变化，发现相关酶活显著降低(P＜0。05)，且PFK的抑制程度显著，这可能与介导其相关通路有关。结论 GQD含药血清显著抑制结直肠癌细胞的增殖，并增加其凋亡，同时还降低其葡萄糖消耗能力并抑制了糖酵解关键酶PFK和LDH的酶活，GQD含药血清可能通过介导结直肠癌细胞葡萄糖代谢来调控其增殖及凋亡。该研究为葛根芩连汤治疗结直肠癌提供可靠的理论依据。

    葛根芩连汤含药血清增殖凋亡葡萄糖代谢

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    祛风润燥止痒溻渍方对慢性湿疹模型小鼠皮肤损伤及TLR4/NF-κB通路的影响

    金蕾王万春
    1110-1113页
    查看更多>>摘要：目的 探讨祛风润燥止痒溻渍方对慢性湿疹模型小鼠皮肤损伤及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-KB)通路的影响。方法 通过涂抹2，4-二硝基氯苯(DNCB)建立慢性湿疹模型小鼠模型。将造模后的小鼠按照随机数表法分为湿疹模型组、卤米松组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、中西医结合组，并以正常小鼠为正常对照组，共7组，每组7只。干预2周后，观察各组小鼠的一般状况;ELISA检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6水平;HE检测皮肤组织病理学变化并进行评分;qRT-PCR检测皮肤组织TNF-α、IL-4、IL-6基因表达;Western blot检测湿疹皮肤组织TLR4、NF-KBp65蛋白表达。结果 与正常对照组相比，湿疹模型组小鼠湿疹严重评分、血清中TNF-α、IL-4、IL-6水平、皮肤组织中TLR4、NF-KBp65表达、TNF-α、IL-4、IL-6 mRNA表达、病理学评分显著增加(P＜0。05);与湿疹模型组相比，中药低、中、高剂量组、卤米松组、中西医结合组小鼠湿疹严重评分、血清中TNF-α、IL-4、IL-6水平、皮肤组织中TLR4、NF-κBp65表达、病理学评分显著降低，中药中、高剂量组、卤米松组、中西医结合组皮肤组织中TNF-α、IL-4、IL-6 mRNA表达显著降低，以中西医结合组变化最为显著(P＜0。05)。结论 祛风润燥止痒溻渍方可通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻慢性湿疹模型小鼠皮肤损伤，且辅以西药治疗效果更佳。

    慢性湿疹模型祛风润燥止痒溻渍方TLR4/NF-κB通路皮肤损伤

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    基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨肉桂对糖尿病肾病大鼠的影响

    许强黄敏顾嘉琪苏榕...
    1114-1117页
    查看更多>>摘要：目的 探讨通过建立链脲佐菌素(streptozocin，STZ)诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)大鼠模型，观察肉桂通过 Toll 样受体4(Toll-like receptors 4，TLR4)/髓分化因子 88(Myeloid differentiation factor88，MyD88)/核转录因子-κB(Nuclear factor kappa-B，NF-κB)信号通路对DN大鼠的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(厄贝沙坦，15 mg/kg)及肉桂低、高剂量组(0。45、0。9 g/kg)。除空白组外采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(40 mg·kg-1)建立DN大鼠模型。给药期间观察大鼠一般情况;给药8周后，HE染色观察肾组织病理形态改变;检测各组大鼠肾指数、24小时尿蛋白(24 h urine protein，24 h-UTP)以及血清中肌酐(Serum creatinine，Scr)、尿素氮(Blood u-rea nitrogen，BUN)水平;免疫组化法检测TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的分布及表达水平;Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达水平。结果 与模型组比较，肉桂各剂量组大鼠肾组织病理损伤减轻，肾指数以及24小时尿蛋白水平显著降低(P＜0。01)，血清中肌酐和尿素氮水平显著降低(P＜0。01)，TLR4、MyD8和NF-κB蛋白的表达水平均有不同程度的降低(P＜0。05，P＜0。01)。结论 肉桂能够减轻糖尿病肾病大鼠肾组织病理损伤，其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。

    糖尿病肾病肉桂NF-κB肾损伤内分泌

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