查看更多>>摘要：目的 探讨桑叶水提物对高糖环境下MC3T3-E1细胞成骨分化的影响,为临床中糖尿病牙周炎(diabetic periodontitis,DP)的治疗提供一定的理论基础.方法 取第4代MC3TE-E1细胞,将用不同浓度的葡萄糖(5 mM、10 mM、20 mM、30 mM、40 mM、50 mM、60 mM、70 mM、100 mM)干预 MC3T3-E1 细胞 1 d、3 d、5d、7 d,用 CCK-8法筛选出合适的高糖浓度构建体外高糖环境.继续检测高糖环境下不同浓度的桑叶水提物(10 mg/mL、l mg/mL、100 μg/mL、10 μg/mL、l μg/mL、100 ng/mL、10 ng/mL、1 ng/mL)干预 MC3T3-E1 细胞后对细胞增殖的影响并筛选出合适的桑叶水提物浓度;通过细胞增殖毒性检测(cell dountingkit-8,CCK-8)、流式细胞技术、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测炎性、凋亡和糖尿病等相关指标的表达,用以评价桑叶水提物在高糖环境下对MC3T3-E1的影响.成骨诱导后,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性、茜素红染色(alizarin red staining,ARS)及定量以及RT-PCR用以评价桑叶水提物在高糖环境下对MC3T3-E1成骨分化的影响.结果 ①CCK8结果表明,在葡萄糖浓度为50 mM以上时对细胞的增殖有明显的抑制作用,故选用50 mM的葡萄糖用以构建体外高糖细胞模型.在高糖环境下,与其他组相比,1、10、100 μg/mL的桑叶水提物为促进MC3T3-E1细胞增殖的适宜浓度;②凋亡结果表明,高糖组的凋亡率明显高于对照组,加入桑叶水提物后能缓解因高糖刺激引起的细胞凋亡(P＜0.05).③活性氧(reactive oxygen species,ROS)结果表明,桑叶水提物均可在一定程度上抑制高糖环境下细胞内的ROS的产生(P＜0.05);④ELISA结果表明,与对照组相比,高糖组相关炎症因子的表达明显高于对照组,加入桑叶水提物后可以抑制相关炎症因子的表达.⑤通过RT-PCR结果表明,在高糖环境下桑叶水提物可以通过调控凋亡相关基因的表达来抑制凋亡,相关炎症基因的表达与ELISA的结果基本一致(P＜0.05).⑥通过碱性磷酸酶染色,ALP活性和茜素红染色结果表明,与对照组相比,高糖组的ALP活性和矿化结节的形成量均明显降低,加入桑叶水提物后可明显缓解(P＜0.05);⑦通过RT-PCR结果表明,与对照组相比,桑叶水提物可以缓解因高糖刺激引起的成骨相关基因表达降低(P＜0.001).结论 ①桑叶水提取物可以缓解因高糖刺激引起的MC3T3-E1细胞损伤和凋亡.②桑叶水提取物可以促进高糖环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化.
万方数据
维普