查看更多>>摘要:目的 探讨唾液腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)中蛋白多糖(proteoglycans,PGs)阻抑后,对肿瘤侵袭性生物学行为的抑制.方法 ①构建靶向沉默木糖基转移酶基因-Ⅰ(xylosyltransferase-1,XT-1)的质粒载体shRNA-WJ4.②留取1例腮腺原发性多形性腺瘤标本,进行组织学和免疫组织化学染色,采用鼠抗人Hyaluronan synthase 2(HAS2)检测透明质酸,鼠抗人Heparan Sulfate Proteoglycan检测硫酸乙酰肝素.③原代细胞培养,采用兔抗人calponin,鼠抗人S-100蛋白和CK7单克隆抗体鉴定细胞.④脂质体转染培养的PA细胞,沉默XT-Ⅰ基因.实验分三组,PA组(空白组)、PA-HK组(空载体组)、PA-WJ4组(沉默组),MTT法检测三组细胞的生长情况.⑤采用Real-Time PCR技术,检测基因沉默后XT-Ⅰ基因的表达.⑥应用Blyscan Assay Kit试剂盒检测基因沉默后,PGs合成分泌的改变.⑦应用Transwell小室法检测基因沉默后,肿瘤细胞侵袭能力的改变.⑧统计学分析应用SPSS13.0统计分析软件,Excel软件导出数据,生成柱形图.结果 ①成功构建靶向沉默木糖基转移酶基因-Ⅰ(XT-1)的质粒载体shRNA-WJ4.②唾液腺PA黏液软骨样组织中,富含透明质酸和硫酸乙酰肝素.③唾液腺PA原代培养5~7天,细胞从组织块周围爬出.培养的PA细胞鉴定发现,肿瘤性肌上皮细胞抗calponin阳性、抗S-100阳性;肿瘤性腺上皮细胞CK7阳性.④ShRNA-WJ4成功转染PA细胞后,表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),转染效率44.2%.MTT法检测显示,沉默组PA细胞生长缓慢.⑤Real-TimePCR检测沉默组PA细胞,XT-Ⅰ基因mRNA沉默效率为28.0%.⑥应用Blyscan Assay Kit试剂盒,检测基因沉默48 h后,沉默组PA细胞PGs合成分泌降低27.20%.⑦Transwell侵袭试验显示,沉默组PA组细胞穿过微孔膜到达下层的细胞数量为23.83±2.93个,较空载体组(64.50±3.94)和空白组(67.50±2.35)细胞明显减少(P<0.01),侵袭抑制率为64.70%.结论 靶向沉默XT-Ⅰ基因,有效阻抑PA细胞的PGs合成,成功有效抑制PA细胞的侵袭性生物学行为.